細胞轉染效率低下的幾個大坑：1.試劑過期有時候轉染效率低下,，還要考慮會不會存在試劑過期的情況,。毛博當年做轉染整整半年,，百思不得其解。較后發(fā)現(xiàn),，原來是Lipofectamine2000過期了。換了之后,，立馬成功,。根據(jù)我的經(jīng)驗，盡量使用開封半年內的,，因為過了半年后,，就算沒有過失效期,，但是細胞毒性較大增加，而轉染效率卻較大下降,。千萬不要為了省錢,，影響實驗進度哈。2.未加血清轉染后未及時加入血清,，會導致細胞大量死亡,。一般要在轉染后的4-6小時換液且換為有血清的培養(yǎng)基。根據(jù)毛博的經(jīng)驗,，其實也可以在原來的無血清培養(yǎng)基里面滴加血清,。這個時候，較好不要換液,，不要打擾細胞,，讓它安安靜靜地休息。但是也不能過早加入血清,。過早的話,，會引起未轉染的細胞瘋狂生長。那么,，什么是較佳時機呢,？在20%的細胞變圓的時候，就是加血清的較佳時機,。重新接種于培養(yǎng)皿或瓶,，較好在轉染前4小時換一次新鮮培養(yǎng)液。寧波珠海細胞高效轉染試劑

如何有效提高細胞轉染實驗效率：1.選擇高效的轉染方法不同轉染試劑有不同的轉染方法,，但大多大同小異,。轉染時應跟據(jù)具體轉染試劑推薦的方法，但也要注意,，因不同實驗室培養(yǎng)的細胞性質不同,，質粒定量差異，操作手法上的差異等,，其轉染效果可能不同,，應根據(jù)實驗室的具體條件來確定較佳轉染條件。2.確保所構建載體的質量,。轉染載體的構建（細菌載體,，質粒DNA，RNA,，PCR產物,，寡核苷酸等）也影響轉染結果。細菌載體對特定宿主細胞傳染效率較高,，但不同細菌載體有其特定的宿主,，有的還要求特定的細胞周期,，如逆轉錄細菌需侵染分裂期的宿主細胞，此外還需考慮一些安全問題（如基因污染）,。除載體構建外,，載體的形態(tài)及大小對轉染效率也有不同的影響，如前面提到的超螺旋及線性DNA對瞬時和穩(wěn)定轉染的影響,。如果基因產物對細胞有毒性作用,，轉染也很難進行，因此選擇組成或可調控,，強度合適的啟動子也很重要,，同時做空載體及其它基因的相同載體構建的轉染正對照可排除毒性影響的干擾。金華正規(guī)細胞高效轉染試劑生產廠家細胞轉染是完成這一過程的必需步驟,。

細胞轉染簡介：轉染,，是將外源性基因導入細胞內的一種專門技術。隨著基因與蛋白功能研究的深入,，轉染目前已成為實驗室工作中經(jīng)常涉及的基本方法,。轉染大致可分為物理介導、化學介導和生物介導三類途徑,。電穿孔法,、顯微注射和基因屬于通過物理方法將基因導入細胞的范例；化學介導方法很多,，如經(jīng)典的磷酸鈣共沉淀法,、脂質體轉染方法、和多種陽離子物質介導的技術,；生物介導方法,，有較為原始的原生質體轉染，和現(xiàn)在比較多見的各種細菌介導的轉染技術,。

細胞轉染的原理,、操作步驟以及小技巧：一、脂質體(Liposome)轉染方法原理脂質體作為體內和體外輸送載體的工具,，已經(jīng)研究的十分普遍,，中性脂質體是利用脂質膜包裹DNA，借助脂質膜將DNA導入細胞膜內,。帶正電的陽離子脂質體,，DNA并沒有預先包埋在脂質體中，而是帶負電的DNA自動結合到帶正電的脂質體上,，形成DNA-陽離子脂質體復合物,，從而吸附到帶負電的細胞膜表面，經(jīng)過內吞被導入細胞,。優(yōu)點:與其它方法相比,，有較高的效率和較好的重復性，它適用于把DNA轉染入懸浮或貼壁培養(yǎng)細胞中,，是目前條件下較方便的轉染方法之一建議選擇50%~80%區(qū)間密度進行細胞轉染,。

細胞轉染實驗簡介：實驗材料與器材：1、材料293T細胞,、MyoD表達質粒和EGFP表達質粒,、DMEM培養(yǎng)基、鏈霉素/青霉素(雙抗),、FCS(小牛血清),、PBS(磷酸鹽緩沖溶液)、胰酶/EDTA消化液,、轉染試劑(TransFast)2,、器材20ul/200ul/1ml微量移液器和Tip頭酒精燈、廢液缸,、血球計數(shù)板,、渦旋振蕩器、恒溫水浴箱,、臺式離心機,、35mm培養(yǎng)皿、轉染管,、15ml離心管,、觀察用倒置顯微鏡熒光顯微鏡和CCD。利用脂質體轉染法較重要的就是防止其毒性,，因此脂質體與質粒的比例,，細胞密度以及轉染的時間長短和培養(yǎng)基中血清的含量都是影響轉染效率的重要問題，通過實驗摸索的合適轉染條件對于效率的提高有巨大的作用,。大部分外源DNA會被核酸酶降解或隨細胞分裂而稀釋,。合肥正規(guī)細胞高效轉染試劑生產廠家

細胞密度以及轉染的時間長短和培養(yǎng)基中血清的含量都是影響轉染效率的重要因素。寧波珠海細胞高效轉染試劑

細胞轉染為什么不能加血清：不同的細胞及轉染試劑要求轉染的條件是不同的,。較好是在靠前次實驗前做一個預實驗,，比如：HeLa，293,，CHO,，COS7，MCF－7,，HepG2等細胞,，是否加血清，對不同的細胞是有不同的影響的，有些細胞是可以有血清的,，有些加血清就會受影響,。轉染后在6小時左右較好換液且換為有血清的培養(yǎng)基，其一因為普通轉染試劑對細胞的毒性作用大,，其二可降低因血清的缺乏引起的細胞的死亡,。轉染時不加血清是防止血清的干擾作用，轉染后可適時加入,。加入過早會引起未轉染細胞的優(yōu)勢生長,，過晚會引起較多細胞死亡?？蓪崟r觀察1/5細胞變圓的時候加入血清,。寧波珠海細胞高效轉染試劑