外泌體因諾貝爾醫(yī)學獎而被眾人知曉,,也因其作為生命信息傳遞者,在體液中普遍存在及易獲得性等特點被譽為液體活檢"新貴",,成為疾病的精確診斷和治病研究的熱點,,尤其是在一些病癥研究領域[。外泌體作為細胞間通信載體的作用現(xiàn)在已被普遍接受,。外泌體包含胞質環(huán)境中富含的DNA,,RNA,蛋白質和其它分析物,,研究表明,,外泌體中的運轉RNA和蛋白質與一些病癥的生長密切相關,有望作為診斷標志物,。研究發(fā)現(xiàn)Vps4A是一個外泌體的重要調控因子,,與肝病的發(fā)生有著密切的關系,Vps4A基因的表達下調肝病的發(fā)生及轉移相關,。通過microRNA高通量測序發(fā)現(xiàn)Vps4A基因能導致外泌體分泌肝病相關的重要microRNA,,與肝病的發(fā)生密切相關。直接把外泌體從尿液中沉降下來,,無須分離培養(yǎng)人尿液來源細胞并收集培養(yǎng)基,。無錫正規(guī)外泌體提取試劑單價
外泌體(Exosome)是細胞主動分泌的囊泡樣小體,大小均一,,直徑30-200nm,,密度1.10-1.18g/ml,來源普遍,,幾乎所有細胞都可分泌,,在血液,尿液,,唾液,,腦脊液,腹水,,乳汁等體液中普遍分布,。外泌體較早在1986年發(fā)現(xiàn)于培養(yǎng)的綿羊紅細胞上清液中。1996年,,研究者發(fā)現(xiàn)外泌體作為抗原呈遞因子參與T細胞依賴的抗一些病癥反應,,開啟了外泌體蛋白研究的新天地,。2013年諾貝爾生物/醫(yī)學獎解答了細胞如何組織其內部較重要的運輸系統(tǒng)之一——囊泡傳輸系統(tǒng)的奧秘。貴陽外泌體提取試劑廠家現(xiàn)貨首先在無菌條件下提取人體體液,,并用PBS緩沖液進行稀釋,。
外泌體的提取分離:1、超濾離心,。由于外泌體是一個大小約幾十納米的囊狀小體,,大于一般蛋白質,利用不同截留相對分子質量(MWCO)的超濾膜對樣品進行選擇性分離,,便可獲得外泌體,。超濾離心法簡單高效,且不影響外泌體的生物活性,,是提取細胞外泌體的一種新方法,。2、磁珠免疫法,。外泌體表面有其特異性標記物(如CD63,、CD9蛋白),用包被抗標記物抗體的磁珠與外泌體囊泡孵育后結合,,即可將外泌體吸附并分離出來,。磁珠法具有特異性高、操作簡便,、不影響外泌體形態(tài)完整等優(yōu)點,,但是效率低,外泌體生物活性易受pH和鹽濃度影響,,不利于下游實驗,,難以普遍普及。
外泌體的提取,、分離方法:超高速離心法,。常用的是超高速離心法,該方法是被譽為分離外泌體的“金標準”,。該方法利用離心力從細胞培養(yǎng)液或生物流體獲得外泌體,,經過400×g、2000×g,、10000×g的低速離心,,除去細胞及大的細胞分泌物;較后超高速100000×g離心得到外泌體[12],。超高速離心因操作簡單,,不需要復雜的技術支持,并且成本相對較低而被普遍使用。但是該方法耗時,、產率低,,得到的外泌體的數量和質量很大程度上受轉子的類型、轉子沉降角度等因素影響,,其中較主要的問題就是差速離心法獲得的沉淀物是外泌體,,但也會有其他的囊泡、蛋白質或蛋白和RNA的聚集體,。這些試劑盒不需要特殊設備,,隨著產品不斷更新?lián)Q代,提取效率和純化效果逐漸提高,。
外泌體的提取方法:1、磁珠免疫法,。外泌體表面有其特異性標記物(如CD63,、CD9蛋白),用包被抗標記物抗體的磁珠與外泌體囊泡孵育后結合,,即可將外泌體吸附并分離出來,。磁珠法具有特異性高、操作簡便,、不影響外泌體形態(tài)完整等優(yōu)點,,但是效率低,外泌體生物活性易受pH和鹽濃度影響,,不利于下游實驗,,難以普遍普及。2,、多聚物沉淀法,。聚乙二醇(PEG)為常用的多聚物,可與疏水性蛋白和脂質分子結合共沉淀,,早先應用于從血清等樣本中收集病毒,,現(xiàn)在也被用來沉淀外泌體,其原理可能與競爭性結合游離水分子有關,。利用PEG沉淀外泌體存在不少問題:比如純度和回收率低,,雜蛋白較多(假陽性),顆粒大小不均一,,產生難以去除的聚合物,,機械力或者吐溫-20等化學添加物將會破壞外泌體等。外泌體提?。河眠@種聚合物沉淀具有許多優(yōu)點,,包括對分離的外泌體影響小、pH中性等,。廈門外泌體提取試劑平均價格
對外泌體的研究興趣日益增長,,無論是研究其功能還是了解如何將其用于微創(chuàng)診斷的開發(fā),。無錫正規(guī)外泌體提取試劑單價
外泌體鑒定:外泌體分離之后,需要經過一系列鑒定才能確定分離的是外泌體,。鑒定方法從物理特征到表面分子標志物,,多角度進行鑒定。l透射電鏡鑒定法:簡稱TEM,,適合外泌體雙層囊膜超微結構觀察,,即通常為茶托型或一側凹陷的半球形。l納米顆粒追蹤分析法:簡稱NTA,,該方法能保證外泌體原始狀態(tài),、檢測速度快,檢測后能提供外泌體粒徑和濃度信息,。lWesternblot分子標志物檢測:外泌體標志蛋白包括四跨膜蛋白家族,,如CD9、CD63和CD81,;細胞質蛋白,,如肌動蛋白(Actin)和鈣磷脂結合蛋白(Annexins);無錫正規(guī)外泌體提取試劑單價