為了分離外泌體,，研究人員用兩個這樣的單元串聯(lián)構(gòu)建了一個裝置,。首先,，使用聲波從血液樣品中除去細(xì)胞和血小板,。一旦細(xì)胞和血小板被去除,，樣品進入第二個微流體單元，然后使用較高頻率的聲波將外泌體與稍大的細(xì)胞外囊泡分開,。這項工作的通訊作者之一,，麻省理工學(xué)院材料科學(xué)與工程系科學(xué)家MingDao博士說：“聲波更溫和,。而且在分離時，這些囊泡受處理的時間只有1秒鐘或更短,。這是一個很大的優(yōu)勢,。”使用該設(shè)備,，處理100微升未稀釋血液樣本只需要不到25分鐘,。“這種新技術(shù)可以解決當(dāng)前外泌體分離技術(shù)的缺點,，如周期長,，一致性差，產(chǎn)量低,，污染以及完整性受損等,。我們想要把提取高質(zhì)量的外泌體的過程簡化為按一個按鈕就在10分鐘內(nèi)獲得所需樣品一樣簡單?！毖芯咳藛T們說。外泌體檢測作為一種新型的液體活檢熱點技術(shù)已被許多臨床科研機構(gòu)普遍地應(yīng)用于一些病癥和疾病的無創(chuàng)診斷,。北京外泌體提取試劑哪里買

外泌體(Exosome)是由細(xì)胞分泌而來的微小囊泡,，直徑約為30-200nm，密度在1.13-1.21g/ml,，具有杯狀形態(tài),、雙層膜結(jié)構(gòu)，天然存在于血液,、尿液,、唾液、母乳和細(xì)胞培養(yǎng)基等生物體液中,。包括瘤細(xì)胞在內(nèi)幾乎所有類型的細(xì)胞（免疫細(xì)胞,、神經(jīng)細(xì)胞,、干細(xì)胞),，都可以產(chǎn)生并釋放exosome。Exosome內(nèi)含有與細(xì)胞來源相關(guān)的蛋白質(zhì)rRNA和microRNA,，Exosome可通過細(xì)胞膜受體直接受體細(xì)胞,，也可運輸?shù)鞍踪|(zhì)、mRNA,、miRNA,、lncRNA、circRNA,，甚至細(xì)胞器進入受體細(xì)胞,，參與細(xì)胞間通訊,。Exosome在免疫應(yīng)答、炎癥反應(yīng),、血管生成,、凋亡、凝血和廢物處理等生理過程發(fā)揮關(guān)鍵作用,，不同細(xì)胞來源的exosome所含有的RNA和蛋白成分不盡相同,，可作為多種疾病的早期診斷標(biāo)記物，也能作為靶向藥物的載體進行疾病蕪湖正規(guī)外泌體提取試劑銷售廠家如純度和回收率低,，雜蛋白較多（假陽性）,，顆粒大小不均一，產(chǎn)生難以去除的聚合物,。

外泌體(exosomes,，Exos)是細(xì)胞分泌的一種膜囊泡，因其可以將供體細(xì)胞的信息通過其攜帶的蛋白質(zhì),、mRNA,、miRNA等傳遞到受體細(xì)胞，實現(xiàn)細(xì)胞之間的信息交流及物質(zhì)交換,，并且可以作為藥物載體轉(zhuǎn)運藥物而引起科學(xué)家的普遍關(guān)注(Fig1),。外泌體作為內(nèi)源性的天然藥物載體有著獨特的優(yōu)勢，表面由脂質(zhì)和蛋白質(zhì)組成,，使其可以穿透許多生物膜,，提高藥物的運輸效率和靶向性，可以穩(wěn)定存在于血液中,，納米級尺寸明顯增強藥物在瘤部位的滲透滯留效應(yīng)(permeabilityandretentioneffect,EPR),。目前，許多抗藥物,、基因藥物及藥物均被成功載入外泌體,。但是由于沒有較好的外泌體分離純化和載藥的方法，使得其作為藥物載體的應(yīng)用受到限制,。

外泌體鑒定：外泌體分離之后,，需要經(jīng)過一系列鑒定才能確定分離的是外泌體。鑒定方法從物理特征到表面分子標(biāo)志物,，多角度進行鑒定,。l透射電鏡鑒定法：簡稱TEM，適合外泌體雙層囊膜超微結(jié)構(gòu)觀察,，即通常為茶托型或一側(cè)凹陷的半球形,。l納米顆粒追蹤分析法：簡稱NTA，該方法能保證外泌體原始狀態(tài),、檢測速度快,，檢測后能提供外泌體粒徑和濃度信息,。lWesternblot分子標(biāo)志物檢測：外泌體標(biāo)志蛋白包括四跨膜蛋白家族，如CD9,、CD63和CD81,；細(xì)胞質(zhì)蛋白，如肌動蛋白（Actin）和鈣磷脂結(jié)合蛋白（Annexins）,；使用可截留100KD分子量的膜,，通過離心截留上清中的外泌體，截留完成后,。直接把外泌體從尿液中沉降下來,，無須分離培養(yǎng)人尿液來源細(xì)胞并收集培養(yǎng)基。

外泌體的提取方法：1,、磁珠免疫法,。外泌體表面有其特異性標(biāo)記物（如CD63、CD9蛋白）,，用包被抗標(biāo)記物抗體的磁珠與外泌體囊泡孵育后結(jié)合,，即可將外泌體吸附并分離出來。磁珠法具有特異性高,、操作簡便,、不影響外泌體形態(tài)完整等優(yōu)點，但是效率低,，外泌體生物活性易受pH和鹽濃度影響，不利于下游實驗,，難以普遍普及,。2、多聚物沉淀法,。聚乙二醇（PEG）為常用的多聚物,，可與疏水性蛋白和脂質(zhì)分子結(jié)合共沉淀，早先應(yīng)用于從血清等樣本中收集病毒,，現(xiàn)在也被用來沉淀外泌體,，其原理可能與競爭性結(jié)合游離水分子有關(guān)。利用PEG沉淀外泌體存在不少問題：比如純度和回收率低,，雜蛋白較多（假陽性）,，顆粒大小不均一，產(chǎn)生難以去除的聚合物,，機械力或者吐溫-20等化學(xué)添加物將會破壞外泌體等,。外泌體的提取、分離方法：聚合物沉淀法,。無錫外泌體提取試劑產(chǎn)品介紹

重復(fù)離心操作還有可能對囊泡造成損害,，從而降低其質(zhì)量,。北京外泌體提取試劑哪里買

1996年GRaposo等發(fā)現(xiàn)類似于B淋巴細(xì)胞的免疫細(xì)胞也會分泌抗原呈遞外泌體（antigenpresentingvesicle），所分泌的外泌體可以直接刺激效應(yīng)CD4+細(xì)胞的抗一些病癥反應(yīng),。2007年HValadi等進一步發(fā)現(xiàn)細(xì)胞之間可以通過外泌體中RNA交換遺傳物質(zhì),。隨著有關(guān)外泌體研究越來越多，研究者發(fā)現(xiàn)它普遍參與了機體免疫應(yīng)答,、抗原呈遞,、細(xì)胞分化、一些病癥生長于侵襲等各種生物過程中,。目前的主流觀點認(rèn)為,，外泌體的產(chǎn)生過程為：細(xì)胞膜內(nèi)陷，形成內(nèi)體（endosome）,，再形成多泡體（multivesicularbodies,，MVB），較后分泌到胞外成為外泌體,。外泌體中攜帶有母細(xì)胞的多種蛋白質(zhì),、脂類、DNA和RNA等重要信息,。外泌體較早見于1981年,，EGTrams等在體外培養(yǎng)的綿羊紅細(xì)胞上清液中發(fā)現(xiàn)了有膜結(jié)構(gòu)的小囊泡，并命名為exosome,。對于外泌體的作用,，當(dāng)時推測為細(xì)胞排泄廢物的一種方式。北京外泌體提取試劑哪里買