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外泌體的提取方法:1、色譜法。色譜法是利用根據(jù)凝膠孔隙的孔徑大小與樣品分子尺寸的相對關(guān)系而對溶質(zhì)進(jìn)行分離的分析的方法,。樣品中大分子不能進(jìn)入凝膠孔,,只能沿多孔凝膠粒子之間的空隙通過色譜柱,,首先被流動相洗脫出來,;小分子可進(jìn)入凝膠中絕大部分孔洞,,在柱中受到更強(qiáng)地滯留,,更慢地被洗脫出,。分離到的外泌體在電鏡下大小均一,,但是需要特殊的設(shè)備,應(yīng)用不普遍,。2,、超濾離心。由于外泌體是一個大小約幾十納米的囊狀小體,,大于一般蛋白質(zhì),,利用不同截留相對分子質(zhì)量(MWCO)的超濾膜對樣品進(jìn)行選擇性分離,便可獲得外泌體,。超濾離心法簡單高效,,且不影響外泌體的生物活性,是提取細(xì)胞外泌體的一種新方法,。重復(fù)離心操作還有可能對囊泡造成損害,,從而降低其質(zhì)量。廣州正規(guī)外泌體提取試劑廠家批發(fā)價
外泌體提純試劑盒的特色與優(yōu)勢:純化和富集的完整血漿/血清,,尿液和細(xì)胞培養(yǎng)基中外泌體的可用于功能研究,;樣本輸入量多樣;無需耗時的超速離心,,過濾或特殊注射器,;無需沉淀試劑,也無需過夜培養(yǎng),;無需蛋白酶處理,;適用于多種物種;外泌體被純化并且不含任何其他RNA結(jié)合蛋白,;可以使用NanoSight?或電子顯微鏡分析純化的外泌體,,以評估近似外泌體大小范圍和濃度。外泌體(exosomes)是一種能被機(jī)體內(nèi)大多數(shù)細(xì)胞分泌的直徑大約為30~150nm的具有脂質(zhì)雙層膜的微小膜泡,。它普遍存在并分布于各種體液中,,攜帶和傳遞重要的信號分子,形成了一種全新的細(xì)胞間信息傳遞系統(tǒng),,影響細(xì)胞的生理狀態(tài)并與多種疾病的發(fā)生與進(jìn)程密切相關(guān),。成都外泌體提取試劑廠家批發(fā)價外泌體在免疫中抗原呈遞、一些病癥的生長與遷移,、組織損傷的修復(fù)等生理病理上起著重要的作用,。
外泌體的提取分離:1,、超濾離心。由于外泌體是一個大小約幾十納米的囊狀小體,,大于一般蛋白質(zhì),,利用不同截留相對分子質(zhì)量(MWCO)的超濾膜對樣品進(jìn)行選擇性分離,便可獲得外泌體,。超濾離心法簡單高效,,且不影響外泌體的生物活性,是提取細(xì)胞外泌體的一種新方法,。2,、磁珠免疫法。外泌體表面有其特異性標(biāo)記物(如CD63,、CD9蛋白),,用包被抗標(biāo)記物抗體的磁珠與外泌體囊泡孵育后結(jié)合,即可將外泌體吸附并分離出來,。磁珠法具有特異性高,、操作簡便、不影響外泌體形態(tài)完整等優(yōu)點(diǎn),,但是效率低,,外泌體生物活性易受pH和鹽濃度影響,不利于下游實(shí)驗(yàn),,難以普遍普及,。
外泌體(exosome),特指直徑在40-100nm的盤狀囊泡,。其主要來源于細(xì)胞內(nèi)內(nèi)溶酶體微粒內(nèi)陷形成的多囊泡體,,經(jīng)多囊泡體外膜與細(xì)胞膜融合后釋放到胞外基質(zhì)中。現(xiàn)已證實(shí)可以分泌外泌體的細(xì)胞有:肥大細(xì)胞,、淋巴細(xì)胞,、樹突狀細(xì)胞、瘤細(xì)胞,、間充質(zhì)干細(xì)胞等,。外泌體在免疫中抗原呈遞、瘤的生長與遷移,、組織損傷的修復(fù)等生理病理上起著重要的作用,。同時,不同細(xì)胞分泌的外泌體具有不用的組成成分和功能,,可作為疾病診斷的生物標(biāo)志物,。細(xì)胞外囊泡是蛋白質(zhì)、mRNA,、miRNA和脂質(zhì)運(yùn)輸來完成細(xì)胞間通訊通路的重要媒介,,根據(jù)它們的大小和發(fā)生分為三類,包括外泌體,、微泡和凋亡小體,。其中,外泌體是直徑大約為40-100nm的包裝囊泡,,由多種細(xì)胞分泌,,內(nèi)含有特定的蛋白質(zhì)、脂質(zhì),、細(xì)胞因子或遺傳物質(zhì),。來源于不同的組織的外泌體不光具有其特異性蛋白分子,而且還包含其行使功能的關(guān)鍵分子利用PEG沉淀外泌體存在不少問題:比如純度和回收率低,,雜蛋白較多,。
近年來,隨著外泌體研究的不斷深入,,它的應(yīng)用已經(jīng)涉及一些病癥治病領(lǐng)域,、醫(yī)學(xué)基礎(chǔ)和免疫領(lǐng)域、寄生蟲領(lǐng)域,;臨床研究上已涉及心血管系統(tǒng),、內(nèi)分泌代謝系統(tǒng)等。外泌體來源及內(nèi)含物,。幾乎所有類型的細(xì)胞都可以分泌外泌體,,同時外泌體也普遍存在于體液中,包括血液,、眼淚,、尿液、唾液,、乳汁,、腹水等。目前研究發(fā)現(xiàn)外泌體中富含核酸(microRNA,、lncRNA,、circRNA、mRNA,、tRNA等),、蛋白、膽固醇等,。外泌體的表面marker主要有CD63,、CD81、CD9,、TSG101,、HSP27等,。外泌體鑒定。目前對于外泌體的鑒定主要有四種方法:透射電子顯微鏡(TEM),、Nanosight,、WesternBlot、流式細(xì)胞術(shù),。外泌體的提取方法:色譜法,。合肥外泌體提取試劑單價
外泌體的特殊結(jié)構(gòu)和功能,使得它具有潛在的應(yīng)用價值,,可以作為診斷多種疾病的生物指標(biāo),。廣州正規(guī)外泌體提取試劑廠家批發(fā)價
外泌體的提取的方式:1、免疫磁珠法,,這種方法可以保證外泌體形態(tài)的完整,,特異性高、操作簡單,、不需要昂貴的儀器設(shè)備,,但是非中性pH和非生理性鹽濃度會影響外泌體生物活性,不便進(jìn)行下一步的實(shí)驗(yàn),。2,、PS親和法,該方法將PS(磷脂酰絲氨酸)與磁珠結(jié)合,,利用親和原理捕獲外泌體囊泡外的PS,。該方法與免疫磁珠法相似,獲得的外泌體形態(tài)完整,,純度較高,。由于不使用變性劑,不影響外泌體的生物活性,,外泌體可用于細(xì)胞共培養(yǎng)和體內(nèi)注射,。2016.9《ScientificReports》雜志發(fā)表了該方法較新數(shù)據(jù),表明PS法可提取相當(dāng)高純度的外泌體,。六是色譜法,,這種方法分離到的外泌體在電鏡下大小均一,但是需要特殊的設(shè)備,,應(yīng)用不普遍,。廣州正規(guī)外泌體提取試劑廠家批發(fā)價