外泌體(exosomes,，Exos)是細胞分泌的一種膜囊泡，因其可以將供體細胞的信息通過其攜帶的蛋白質(zhì),、mRNA,、miRNA等傳遞到受體細胞，實現(xiàn)細胞之間的信息交流及物質(zhì)交換,，并且可以作為藥物載體轉(zhuǎn)運藥物而引起科學(xué)家的普遍關(guān)注(Fig1),。外泌體作為內(nèi)源性的天然藥物載體有著獨特的優(yōu)勢，表面由脂質(zhì)和蛋白質(zhì)組成,，使其可以穿透許多生物膜,，提高藥物的運輸效率和靶向性，可以穩(wěn)定存在于血液中,，納米級尺寸明顯增強藥物在瘤部位的滲透滯留效應(yīng)(permeabilityandretentioneffect,EPR),。目前，許多抗藥物,、基因藥物及藥物均被成功載入外泌體,。但是由于沒有較好的外泌體分離純化和載藥的方法，使得其作為藥物載體的應(yīng)用受到限制,。離心除去細胞器,，留取上清。重慶外泌體提取試劑服務(wù)電話

PS不是你想有,，想有就能有,，迄今為止所發(fā)現(xiàn)的外泌體，并非所有的外膜表面都暴露PS,。例如,，細菌來源的外泌體膜表面沒有PS，因此,，本款試劑不能提取這種外泌體?，F(xiàn)在的研究尚未得知是否所有的外泌體上都會露出PS，但是上述的外泌體標記根據(jù)細胞種類不同表現(xiàn)出的信號強弱差大,，通過利用本試劑盒PS親和法捕捉,、提取外泌體是較好的方法。：這個MagCapture?ExosomeIsolationKitPS,，1次提取的外泌體量大概是多少,？實驗樣品的種類和體積不同，提取的外泌體量也不一樣,。Wako的操作實例中,，一次提取操作可獲得蛋白量約30μg/mL（BCA法檢測），粒子數(shù)1~2×1010（NanoSightLM10檢測）（經(jīng)莫能菌素鈉刺激外泌體分泌的K562培養(yǎng)上清5mL濃縮為1mL后,，對其進行提?。Ａ硗?，和光驗證了從1mL正常人混合血清提取一次,，可回收約34μg/mL蛋白質(zhì)（BCA法檢測），約5×109/mL的粒子數(shù)（NanoSightLM10檢測）,。本試劑盒終可獲得100μL的洗脫液,。上海正規(guī)外泌體提取試劑推薦廠家同時可獲得高純度和高回收率的外泌體——如新西蘭IZON開發(fā)的系列的外泌體排阻劑。

外泌體與肺病預(yù)后：外泌體mirRNA和蛋白質(zhì)被認為是NSCLC的預(yù)后因子,。Dejima等在研究NSCLC患者預(yù)后的生物標志物時發(fā)現(xiàn),，外泌體miR-4257和miR-21的含量顯著上升。此外,，還有研究表明,，低水平miR-146a-5p的NSCLC患者較高水平miR-146a-5p的NSCLC患者有更高的復(fù)發(fā)率。Sandfeld-Paulsen等在研究276例NSCLC患者血漿的外泌體時發(fā)現(xiàn),，NY-ESO-1是其中對低生存率有顯著影響的標志物,。Silva等利用TaqMan低密度芯片的方法系統(tǒng)分析了28位NSCLC患者體內(nèi)的365種miRNA，其中l(wèi)et-7f,、miR-30e-3p和miR-20b表達均下調(diào),，進一步研究發(fā)現(xiàn)，let-7f和miR-30e-3p水平可以區(qū)分早期和晚期NSCLC患者,，高水平let-7f和miR-30e-3p與不良預(yù)后密切相關(guān),。如何高效地提取外泌體是實現(xiàn)這項新興液體活檢技術(shù)臨床常規(guī)化應(yīng)用的關(guān)鍵

外泌體的提取主要包括以下幾種方式。一是超速離心法,，這是目前外泌體提取較常用的方法,。此種方法得到的外泌體量多,，但是純度不足，電鏡鑒定時發(fā)現(xiàn)外泌體聚集成塊,，由于微泡和外泌體沒有非常統(tǒng)一的鑒定標準,，也有一些研究認為此種方法得到的是微泡不是外泌體。二是過濾離心,，這種操作簡單,、省時，不影響外泌體的生物活性,，但同樣存在純度不足的問題,。三是密度梯度離心法，用此種方法分離到的外泌體純度高,，但是前期準備工作繁雜,，耗時，量少,。外泌體檢測作為一種新型的液體活檢熱點技術(shù)已被許多臨床科研機構(gòu)普遍地應(yīng)用于一些病癥和疾病的無創(chuàng)診斷,。外泌體的提取方法學(xué)規(guī)范、統(tǒng)一定量及鑒定等,。

外泌體的提取分離：1,、超濾離心。由于外泌體是一個大小約幾十納米的囊狀小體,，大于一般蛋白質(zhì),，利用不同截留相對分子質(zhì)量(MWCO)的超濾膜對樣品進行選擇性分離，便可獲得外泌體,。超濾離心法簡單高效,，且不影響外泌體的生物活性，是提取細胞外泌體的一種新方法,。2,、磁珠免疫法。外泌體表面有其特異性標記物（如CD63,、CD9蛋白）,，用包被抗標記物抗體的磁珠與外泌體囊泡孵育后結(jié)合，即可將外泌體吸附并分離出來,。磁珠法具有特異性高,、操作簡便、不影響外泌體形態(tài)完整等優(yōu)點,，但是效率低,，外泌體生物活性易受pH和鹽濃度影響，不利于下游實驗，難以普遍普及,。多種細胞在正常及病理狀態(tài)下均可分泌外泌體,。深圳正規(guī)外泌體提取試劑服務(wù)電話

用于外泌體提取的體液收集注意事項：選擇血清還是血漿？推薦大多數(shù)研究選擇血漿,。重慶外泌體提取試劑服務(wù)電話

外泌體的提取,、分離方法：梯度密度離心法。研究發(fā)現(xiàn),，外泌體的密度在1.1~1.19kg·L-1之間，因此,，可以采用密度梯度離心法來分離外泌體,。該方法是將超速離心結(jié)合蔗糖密度梯度或蔗糖墊結(jié)合，原理是先除去非囊泡物質(zhì),，再通過梯度密度濃縮提取外泌體,，該方法可以得到相對較為純凈的外泌體。傳統(tǒng)的梯度密度方法通常需要離心16h,，但是2012年,，研究者[15]使用了62~90h才分離出某些確切囊泡，因此,，該方法可能不足以沉淀所有的外泌體,。如果離心時間不充足，污染物質(zhì)可能和外泌體保持在相同的密度層,，特別是這個密度范圍又比較寬,。重慶外泌體提取試劑服務(wù)電話