膠原蛋白的提取方法：酸法提?。核岱ㄌ崛≈饕捎玫碗x子濃度酸性條件浸漬處理原料，從而破壞分子間的鹽鍵和希夫堿,，而引起纖維膨脹、溶解,。作為溶劑使用的酸，主要有鹽酸或亞硫酸、磷酸,、硫酸,、醋酸,、檸檬酸和甲酸等。酸法是提取膠原蛋白比較常用和有效的方法,，用酸法提取的膠原較大程度地保持了其三股螺旋結構,。此法處理快速，所得產(chǎn)品的分子量是連續(xù)的,，適用于醫(yī)用生物材料及原料的制備,，但產(chǎn)品得率低，設備腐蝕嚴重,，污染重,。趙蒼碧等[2]采用0.3%的醋酸溶液在4℃下從牛腱中提取膠原蛋白，得到高純度的膠原蛋白溶液,。鼠尾膠原醋酸溶解：制備成濃度為0.1%的溶液,。武漢鼠尾膠原生產(chǎn)廠家

三維膠原的制備：鼠尾膠原蛋白I型在濃度1mg/ml以上，pH7左右時可形成具有一定強度三維膠,建議成膠濃度1-2mg/ml,。膠原蛋白溶解于0.006mol/L乙酸中,，在成膠過程中需要加入0.06X體積的0.1mol/LNaOH來中和。需要的溶液(均需要無菌,、預冷):10xPBS(可含10mg/L的酚紅用于pH指示)或10x培養(yǎng)液,0.1mol/LNaOH,0.1mol/L乙酸(一般不用),雙蒸水A．不含細胞的三維膠原的制備（以配制1毫升,，1mg/ml三維膠為例）：將200ul鼠尾膠原蛋白I型(5mg/ml)加到置于冰浴的離心管中，加入690ulH2O,。然后加到12ul0.1mol/LNaOH中（如果反過來把12ul0.1mol/LNaOH加到膠原溶液中,，會由于NaOH不能迅速混勻而產(chǎn)生局部的膠原凝結），立即混勻,。南昌正規(guī)鼠尾膠原哪里買這種膠原蛋白在37℃的條件下會形成3股螺旋結構,，可以用來當作細胞培養(yǎng)的基質(zhì),。

鼠尾膠原蛋白Ⅰ型使用方法及注意事項：通過醋酸抽提、氯化鈉沉淀,、磷酸氫二鈉沉淀等步驟制備的,。鼠尾膠原蛋白可用于包被細胞培養(yǎng)器皿，培養(yǎng)一些在普通細胞培養(yǎng)器皿中不易貼壁的細胞,。也可用于制備三維膠,，模擬真實的生長環(huán)境，使細胞在三維環(huán)境中生長,。1，在使用鼠膠原蛋白型包被的細胞培養(yǎng)皿中檢查到PC-12細胞的貼壁和生長,。1mg/ml濃度以上,，pH左右時可形成具有一定強度的三維膠，檢查到NIH-3T3細胞在三維膠內(nèi)正常生長,、PC-12細胞在三維膠表面正常生長,。使用方法：1、細胞培養(yǎng)器皿的表面包被推薦濃度：1-5ug/cm0.012mg/ml,。按以下表格體積加到相應的培養(yǎng)器皿中,。論鼠尾膠原能促進毛細胞貼壁，涂布鼠尾膠原有利于膜片鉗實驗的長時程記錄,，并且制作簡便,，成本低廉。

鼠尾膠原在心肌細胞氧化損傷中的保護作用：膠原蛋白具有抗氧化作用,，但既往在實驗室主要將鼠尾膠原用于促進細胞貼壁和支架構建,，對于其抗氧化作用目前尚無相關研究。目的：探討鼠尾膠原對過氧化氫導致離體心肌細胞氧化損傷的保護作用,。方法：將原代培養(yǎng)的SD大鼠乳鼠心肌細胞隨機接種到鋪有鼠尾膠原的培養(yǎng)皿（實驗組）和普通培養(yǎng)皿（對照組）中,，并且均用0，10,，100μmol/LH2O2誘導,。24h后，以電子顯微鏡觀察各組乳鼠心肌細胞的形態(tài),，應用MTT比色法檢測心肌細胞存活率,，TUNEL法檢測心肌細胞凋亡形態(tài)，流式細胞技術檢測心肌細胞凋亡率,，黃嘌呤氧化酶法檢測超氧化物歧化酶活力,，硫代巴比妥比色法檢測丙二醛水平，Western-Blot檢測凋亡蛋白Bax,、Bcl-2的表達,。整個操作請在無菌環(huán)境下無菌操作,，避免污染以影響細胞生長。

鼠尾膠原蛋白的提取方法：1.將黏稠的膠體溶液進行高速冷凍離心處理,，收集上清液,；在冰水浴中，用的3?6mol/L的NaCl溶液緩慢加入上清液中,，不斷攪拌至溶液中白色的絮狀物不再析出,，4°C沉淀10小時，去除上清液,，絮狀溶液高速冷凍離心處理,，收集沉淀2.用0.03?0.06mol/L的檸檬酸溶液溶解沉淀物，成透明澄清黏稠溶液,；在冰水浴中,，調(diào)節(jié)pH=6.5，用的3?6mol/L的NaCl溶液緩慢加入上清液中,，不斷攪拌至溶液中白色的絮狀物不再析出,，4°C沉淀10小時，去除上清液,，去除上清液,，絮狀溶液高速冷凍離心處理，收集沉淀,。制備鼠尾膠原：吸去生理鹽水,，將尾腱稱重（0.5-1克）。正規(guī)鼠尾膠原直銷廠家

鼠尾膠原醋酸溶解：在2-8度中放置過夜,。武漢鼠尾膠原生產(chǎn)廠家

鼠尾Ⅰ型膠原：組裝液的配置：1.50mmol/L甘氨酸+200mmol/L氯化鉀100mL,，用1mol/L氫氧化鈉調(diào)節(jié)酸堿度至9.2。2.膠原纖維的重構吸取膠原10μL至小培養(yǎng)皿中,，倒入0.5mL自組裝液,，室溫放置20min。予自組裝液自組裝24h,。吸取0.05%戊二醛2mL至小培養(yǎng)皿中,，將自組裝24h的膠原浸泡在戊二醛中。然后將膠原經(jīng)去離子水,、50%乙醇,、100%乙醇依次漂洗后進行TEM觀察。3.生物礦化形成仿生骨材料靜滴配置鈣磷礦化液將25mL鈣液(10mmol/L二水氯化鈣+150mmol/L氯化鈉+50mmol/L三羥甲基氨基甲烷+0.02%三氮化鈉)倒入燒杯中,，滴入聚丙烯(PAA)至濃度350μg/mL,；滴加1mol/L的氯化氫，調(diào)節(jié)酸堿度至7.4，然后緩慢滴入25mL磷液(6mmol/L磷酸氫二鈉),，約16滴/min,。武漢鼠尾膠原生產(chǎn)廠家