I型鼠尾膠原是借鑒NavneetaRajan,JasonHabermehl法,，經(jīng)過乙酸抽提,、離心,、滅菌,、透析等步驟制備得到的高純度、高活性膠原蛋白,，屬于醫(yī)藥級別產(chǎn)品,，可用于包被細胞培養(yǎng)器皿（單分子層包被）,，適合多種類型細胞的貼壁如肝臟細胞、神經(jīng)節(jié)細胞,、胚胎細胞,、肌細胞、肺細胞,、神經(jīng)鞘細胞等,。I型膠原蛋白包被細胞培養(yǎng)板，規(guī)格為6/24孔板,，表面經(jīng)I型膠原蛋白包被,，可以很好的降低蛋白質(zhì)的吸附。使用這種細胞培養(yǎng)板培養(yǎng)細胞,，可以獲得良好的細胞貼壁率,，細胞增殖速度快,，形態(tài)均一,，細胞培養(yǎng)成功率高。鼠尾膠原蛋白用于培養(yǎng)容器等實驗室設(shè)備的內(nèi)部涂層,。武漢鼠尾膠原單價

鼠尾膠原備用膠凝程序：1）在冰上放置以下物品：膠原蛋白I,、無菌10×PBS、無菌蒸餾水,、無菌1MNaOH,。2）確定膠原蛋白I待使用溶液所需的較終濃度的體積。3）在冰上放置無菌管以收存膠原蛋白I,。4）在無菌條件下執(zhí)行以下步驟,。4.1加入10×PBS（終體積/10）mL4.2計算要使用的膠原蛋白I的體積（不要添加到管中直到步驟4.6為止）終體積x終膠原蛋白I濃度（mg/mL）。4.3向10×PBS溶液中加入（要加入的膠原體積×0.023）mL的無菌冰冷1MNaOH,。4.4向4.3溶液中加入下述體積的無菌冰冷蒸餾水：添加蒸餾水體積=V（終）—V（膠原蛋白）—V(10×PBS）—V（1MNaOH）4.5混合管中的物質(zhì)并放入冰中,。4.6加入膠原蛋白I并計算體積，混勻,，冰上備用,。5）膠原蛋白I溶液可立即使用或在冰上放置2-3小時。6）使用時,，無菌條件下將溶液加入到細胞培養(yǎng)裝置中37°C凝膠30min,。論鼠尾膠原能促進毛細胞貼壁，涂布鼠尾膠原有利于膜片鉗實驗的長時程記錄,，并且制作簡便,，成本低廉。上海太原鼠尾膠原這種膠原蛋白在37℃的條件下會形成3股螺旋結(jié)構(gòu),，可以用來當(dāng)作細胞培養(yǎng)的基質(zhì),。

鼠尾膠原蛋白I型,，用那一種膠原酶可以溶解：1．將膠原加入到0.1M的醋酸中，制備成濃度為0.1%的溶液,。在室溫中攪拌1-3小時直到完全溶解,。2．建議將溶液轉(zhuǎn)移到擰口的玻璃瓶中，并小心的在瓶底鋪上一層氯仿,。氯仿的量約為膠原溶液的10%,。不要晃動或攪拌。在2-8度中放置過夜,。在無菌條件下轉(zhuǎn)移上層的膠原溶液,。我們不建議用過濾的方法無菌化。已經(jīng)發(fā)現(xiàn)該方法會導(dǎo)致丟失蛋白,。3．稀釋一定數(shù)量的膠原溶液,。4．按照6-10ug/cm2的濃度包被培養(yǎng)瓶。在室溫或37度結(jié)合數(shù)小時或者2-8度過夜,。5．從包被表面除去多余的液體,。過夜干燥。如果膠原溶液不是無菌的,，這時候可以在無菌細胞操作室中暴光在紫外線下過夜消毒,。在接種細胞前用無菌的水漂洗。論鼠尾膠原能促進毛細胞貼壁,，涂布鼠尾膠原有利于膜片鉗實驗的長時程記錄,，并且制作簡便，成本低廉,。

鼠尾膠原凝膠體在皮膚細胞原代培養(yǎng)中的應(yīng)用：在國外的藥理,毒理和皮膚病學(xué)的研究領(lǐng)域中已得到的限翩,否則培養(yǎng)成功率極低.本文采用鼠尾膠原凝膠體作為滋養(yǎng)層,提高了培養(yǎng)細胞的材料和方法r1]實驗材料:培養(yǎng)液DEIdE(G皿}ao),表皮細胞生長因子(EGFSigma),小牛血清(上海祟明生物制品廠),氫化可的松,胰島素(Sigm,青,鏈霉素,胰蛋白酶,]~DTA,細胞培養(yǎng)皿~35mill(00rningrSA).(2)皮膚基底細胞的分離和細胞懸液的制備:2～3d的新生大鼠(wisr),以75%酒精消毒背部皮膚,剪下皮膚后.以消化12h.輕刷表皮面,收集細胞懸液,加入細胞培養(yǎng)液.用梯度離心收集細胞,以3xi0/m]濃度接種平皿.(3)鼠尾膠原凝膠體的制備:具體方法參見文獻c13o(4)培養(yǎng)皿的膠原鋪制:i.0ml的酸溶解膠原滴入~35mm培養(yǎng)皿中,鋪滿平皿底部;將平皿暴露于氨氣中30min,然后置空氣中30rain,散盡剩余氨氣,。手持尾巴，用止血鉗夾住鼠尾的較高,，折斷尾骨后拉出尾腱,。

鼠尾膠原蛋白Ⅰ型使用方法及注意事項：將培養(yǎng)器皿在室溫(25度左右)下放置20分鐘待膠凝固后，轉(zhuǎn)移到培養(yǎng)箱內(nèi),。如果配制中使用的是10PBS,，使用前需要加入適當(dāng)體積的細胞培養(yǎng)液預(yù)平衡。B．含細胞的三維膠原的制備（以配制200ul鼠尾膠原蛋白(5mg/ml)加到（如果反過來把12ul0.1mol/LNaOH加到膠原溶液中,，會由于NaOH不能迅速混勻而產(chǎn)生局部的膠原凝結(jié)）,，立即混勻。再加入23ul10PBS10培養(yǎng)液,，混勻(混勻后pH左右,，如果PBS或培養(yǎng)液中沒有加酚紅，初次使用時需要用pH試紙測試),。加入760ul的細胞懸浮液,，混勻后立即加到培養(yǎng)器皿中,。將培養(yǎng)器皿在室溫下放20分鐘待膠凝固后，加入適當(dāng)體積的細胞培養(yǎng)液,，轉(zhuǎn)移到培養(yǎng)箱中培養(yǎng),。注意事項型在室溫下pH中性時可迅速成膠，在操作過程中要盡量保持低溫,。鼠尾肌腱膠原蛋白I（rattailtendoncollagentypeI）根據(jù)Birkedal-Hansen方法,，經(jīng)過醋酸（HAc）抽提、氯化鈉沉淀,、磷酸氫二鈉沉淀等步驟制備所得,。4°C沉淀10小時，去除上清液,，絮狀溶液高速冷凍離心處理,，收集沉淀。武漢正規(guī)鼠尾膠原廠家推薦

一種基于鼠尾膠原蛋白：各材料重量配比為鼠尾膠原蛋白聚乙烯醇殼聚糖為5% 2% 1%,，余量的水,。武漢鼠尾膠原單價

以鼠尾膠原為支架的類似物的建立：探尋建立類似物的培養(yǎng)方法。方法：原代培養(yǎng)人皮膚成纖維細胞,，制備鼠尾膠原,，將鼠尾膠原溶液,、濃縮培養(yǎng)基,、NaOH溶液和以血清重懸的成纖維細胞溶液在適當(dāng)?shù)谋壤禄旌虾笮纬赡z構(gòu)建類似物。結(jié)果：形成的類似物中成纖維細胞生長狀態(tài)良好,，并且組織塊具有一定彈性和抗拉伸能力,。結(jié)論：①利用鼠尾膠原可以構(gòu)建類似物，該模型是進行皮膚部位型培養(yǎng)和制作復(fù)合皮的關(guān)鍵與基礎(chǔ),；②成纖維細胞膠原凝膠復(fù)合物有著良好的生物學(xué)特性,，它是研究成纖維細胞與細胞外基質(zhì)之間以及細胞之間相互作用的良好模型。武漢鼠尾膠原單價