外泌體的提取方法：1,、色譜法,。色譜法是利用根據(jù)凝膠孔隙的孔徑大小與樣品分子尺寸的相對(duì)關(guān)系而對(duì)溶質(zhì)進(jìn)行分離的分析的方法。樣品中大分子不能進(jìn)入凝膠孔,，只能沿多孔凝膠粒子之間的空隙通過(guò)色譜柱,，首先被流動(dòng)相洗脫出來(lái)；小分子可進(jìn)入凝膠中絕大部分孔洞,，在柱中受到更強(qiáng)地滯留,，更慢地被洗脫出。分離到的外泌體在電鏡下大小均一,，但是需要特殊的設(shè)備,，應(yīng)用不普遍。2,、超濾離心,。由于外泌體是一個(gè)大小約幾十納米的囊狀小體，大于一般蛋白質(zhì),，利用不同截留相對(duì)分子質(zhì)量(MWCO)的超濾膜對(duì)樣品進(jìn)行選擇性分離,，便可獲得外泌體。超濾離心法簡(jiǎn)單高效,，且不影響外泌體的生物活性,，是提取細(xì)胞外泌體的一種新方法。用無(wú)菌針管吸取上層含有外泌體的液體，置于80℃儲(chǔ)存?zhèn)溆?。蕪湖正?guī)外泌體提取試劑產(chǎn)品介紹

外泌體與肺病預(yù)后：外泌體mirRNA和蛋白質(zhì)被認(rèn)為是NSCLC的預(yù)后因子,。Dejima等在研究NSCLC患者預(yù)后的生物標(biāo)志物時(shí)發(fā)現(xiàn)，外泌體miR-4257和miR-21的含量顯著上升,。此外,，還有研究表明，低水平miR-146a-5p的NSCLC患者較高水平miR-146a-5p的NSCLC患者有更高的復(fù)發(fā)率,。Sandfeld-Paulsen等在研究276例NSCLC患者血漿的外泌體時(shí)發(fā)現(xiàn),，NY-ESO-1是其中對(duì)低生存率有顯著影響的標(biāo)志物。Silva等利用TaqMan低密度芯片的方法系統(tǒng)分析了28位NSCLC患者體內(nèi)的365種miRNA,，其中l(wèi)et-7f,、miR-30e-3p和miR-20b表達(dá)均下調(diào)，進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn),，let-7f和miR-30e-3p水平可以區(qū)分早期和晚期NSCLC患者,，高水平let-7f和miR-30e-3p與不良預(yù)后密切相關(guān)。金華外泌體提取試劑哪家便宜外泌體提?。焊鶕?jù)外泌體的大小,，從蛋白質(zhì)和其他大分子中分離外泌體。

外泌體表面有其特異性標(biāo)記物（如CD63,、CD9蛋白）,，用包被抗標(biāo)記物抗體的磁珠與外泌體囊泡孵育后結(jié)合，即可將外泌體吸附并分離出來(lái),。磁珠法具有特異性高,、操作簡(jiǎn)便、不影響外泌體形態(tài)完整等優(yōu)點(diǎn),，但是效率低,，外泌體生物活性易受pH和鹽濃度影響，不利于下游實(shí)驗(yàn),，難以普遍普及,。聚乙二醇（PEG）可與疏水性蛋白和脂質(zhì)分子結(jié)合共沉淀，早先應(yīng)用于從血清等樣本中收集菌類(lèi),，現(xiàn)在也被用來(lái)沉淀外泌體,，其原理可能與競(jìng)爭(zhēng)性結(jié)合游離水分子有關(guān)。利用PEG沉淀外泌體存在不少問(wèn)題：比如純度和回收率低,，雜蛋白較多（假陽(yáng)性）,，顆粒大小不均一，產(chǎn)生難以去除的聚合物,，機(jī)械力或者吐溫-20等化學(xué)添加物將會(huì)破壞外泌體等,，因此發(fā)表文章時(shí)易受質(zhì)疑,。如純度和回收率低，雜蛋白較多（假陽(yáng)性）,，顆粒大小不均一,，產(chǎn)生難以去除的聚合物。

人體內(nèi)多種細(xì)胞及體液均可分泌外泌體,，包括內(nèi)皮細(xì)胞,、免疫細(xì)胞、血小板,、平滑肌細(xì)胞等。當(dāng)其由宿主細(xì)胞被分泌到受體細(xì)胞中時(shí),，外泌體可通過(guò)其攜帶的蛋白質(zhì),、核酸、脂類(lèi)等來(lái)調(diào)節(jié)受體細(xì)胞的生物學(xué)活性,。外泌體介導(dǎo)的細(xì)胞間通訊主要通過(guò)以下三種方式：一是外泌體膜蛋白可以與靶細(xì)胞膜蛋白結(jié)合,，進(jìn)而靶細(xì)胞細(xì)胞內(nèi)的信號(hào)通路。二是在細(xì)胞外基質(zhì)中,，外泌體膜蛋白可以被蛋白酶剪切,，剪切的碎片可以作為配體與細(xì)胞膜上的受體結(jié)合，從而細(xì)胞內(nèi)的信號(hào)通路,。有報(bào)道稱(chēng)一些外泌體膜上蛋白在其來(lái)源細(xì)胞膜上未能檢測(cè)出,。三是外泌體膜可以與靶細(xì)胞膜直接融合，非選擇性的釋放其所含的蛋白質(zhì),、mRNA以及microRNA,。用于外泌體提取的體液收集注意事項(xiàng)：抽血時(shí)間,。

外泌體鑒定：外泌體分離之后，需要經(jīng)過(guò)一系列鑒定才能確定分離的是外泌體。鑒定方法從物理特征到表面分子標(biāo)志物,，多角度進(jìn)行鑒定。l透射電鏡鑒定法：簡(jiǎn)稱(chēng)TEM,，適合外泌體雙層囊膜超微結(jié)構(gòu)觀察,，即通常為茶托型或一側(cè)凹陷的半球形。l納米顆粒追蹤分析法：簡(jiǎn)稱(chēng)NTA,，該方法能保證外泌體原始狀態(tài),、檢測(cè)速度快，檢測(cè)后能提供外泌體粒徑和濃度信息,。lWesternblot分子標(biāo)志物檢測(cè)：外泌體標(biāo)志蛋白包括四跨膜蛋白家族,，如CD9、CD63和CD81,；細(xì)胞質(zhì)蛋白,，如肌動(dòng)蛋白（Actin）和鈣磷脂結(jié)合蛋白（Annexins）,；外泌體的提取方法學(xué)規(guī)范、統(tǒng)一定量及鑒定等,。上海正規(guī)外泌體提取試劑廠家

外泌體的提取分離：超速離心法（差速離心）,。蕪湖正規(guī)外泌體提取試劑產(chǎn)品介紹

外泌體（exosomes）是活細(xì)胞經(jīng)過(guò)"內(nèi)吞-融合-外排"等一系列調(diào)控過(guò)程而形成的膜性囊泡，來(lái)源于晚期核內(nèi)體(也稱(chēng)為多囊泡體),，直徑約為30-150nm,，密度在1.13-1.21g/ml，天然存在于血液,、唾液,、尿液及母乳等體液中，同時(shí)外泌體也存在于組織和細(xì)胞間隙中,。人體中幾乎所有類(lèi)型的細(xì)胞均能產(chǎn)生外泌體,，人體中大約有1014個(gè)外泌體，大約平均每個(gè)細(xì)胞產(chǎn)生1000-10000個(gè),。外泌體中含有核酸（DNA,、miRNA、lncRNA,、mRNA,、tRF等）、蛋白和脂類(lèi),，在細(xì)胞間物質(zhì)和信息轉(zhuǎn)導(dǎo)中發(fā)揮重要作用,，研究表明其在干細(xì)胞、免疫調(diào)控,、瘤轉(zhuǎn)移,、血管生成以及生物標(biāo)志物等領(lǐng)域都發(fā)揮著不可替代的作用。蕪湖正規(guī)外泌體提取試劑產(chǎn)品介紹