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細胞凍存:取出凍存管,注明細胞名稱,,代數(shù),,日期。離心后,,以無菌吸管吸棄上清,,不要吸到底部的細胞沉淀。將細胞沉淀與凍存液充分混勻,,根據(jù)計數(shù)結(jié)果,,將細胞總數(shù)調(diào)節(jié)成細胞數(shù)量為5-10*105/ml為宜。將細胞凍存懸液分裝進細胞凍存管中,,一般2ml的凍存管中裝入1-1.5ml凍存液為宜,。嚴密封口后,使用可控制降溫速度的冷凍裝置冷凍細胞,,使溫度每分鐘大約降低1℃,。或者,,將裝有細胞的凍存管放入異丙的醇凍存盒中,,然后將凍存盒置于–80℃條件下過夜。若無凍存盒及其他凍存裝置,,可以先將凍存管置于4℃30min,,再-20℃凍存1h直至完全冷凍,再轉(zhuǎn)移至-80℃冰箱過夜,。第二天將已經(jīng)冷凍的細胞轉(zhuǎn)移到液氮容器中,,置于液氮上方的氣相空間中儲存無血清細胞凍存液,通用于人和各種動物細胞株,。杭州珠海無血清細胞凍存液
無血清細胞凍存液對比含血清細胞凍存液的優(yōu)勢:傳統(tǒng)的細胞凍存液是使用培養(yǎng)基,、血清和DMSO按照一定的比例混合,其中DMSO的含量是10%,,血清的含量是10%,,統(tǒng)稱為含血清細胞凍存液。含血清細胞凍存液的一般的凍存方法是梯度降溫凍存法,,如先將冷凍管置于4℃冰箱10分鐘,,然后移至-20℃冰箱30分鐘,再移至-80℃冰箱保存16-18個小時(或隔夜),,較后才移至液氮罐中進行長期的儲存,。(其中需要注意的是-20℃條件下不可超過1個小時,,以防止冰晶過大,造成細胞大量的死亡,。)天津正規(guī)無血清細胞凍存液產(chǎn)品介紹無血清細胞凍存液產(chǎn)品性能:胎牛血清取自牛,,因此,難以應用到需要避免接觸動物源的應用領(lǐng)域,。
無血清細胞凍存:在細胞培養(yǎng)中,,細胞凍存是較關(guān)鍵環(huán)節(jié)之一,尤其在細胞治好,、細胞存儲中對細胞凍存更有特殊要求,,下面就根據(jù)降溫速度以及凍存液組分對細胞凍存做詳細介紹。根據(jù)降溫速度區(qū)分,,細胞凍存可以分為程序降溫凍存與非程序降溫凍存。根據(jù)凍存方式不同可以分為慢速凍存(程序降溫法)與快速凍存(非程序降溫法),。程序降溫凍存技術(shù)要點是慢凍,,標準的凍存程序為降溫速率-1~-2/℃min;當溫度達-25℃以下時,,可增至-5℃~-10℃/min,。之前,常用的傳統(tǒng)方法是將凍存管置于4℃30分鐘--20℃60分鐘--80℃過夜-液氮罐,。不過,,由于步驟較多,間隔時間又長,,很容易遺忘,。之后,人們也開始使用程序降溫盒,。將凍存管放入程序降溫盒中,,再將程序降溫盒放入-80℃冰箱。以1℃/min的速度進行降溫,。
無血清細胞凍存液產(chǎn)品用途:1.無血清細胞凍存液可用于造血干細胞,、間充質(zhì)干細胞等干細胞的儲存。2.無血清細胞凍存液可用于T淋巴細胞,、NK細胞等免疫細胞的存儲,。3.無血清細胞凍存液可用于其他類型哺乳動物細胞的儲存。無血清細胞凍存液產(chǎn)品原理:無血清細胞凍存液,,含多種保護劑成分,。一些保護劑,易于穿透細胞,,避免細胞內(nèi)部水分子形成冰晶損傷細胞,,同時另一些保護劑不能穿透細胞,但可以在冰晶形成之前,,優(yōu)先結(jié)合細胞外的水分子,降低細胞外溶液的電解質(zhì)濃度,,減少陽離子進入細胞的數(shù)量,,無血清細胞凍存液,為多種保護劑組合,,在細胞內(nèi)外進行雙重保護,,較大提高了細胞復蘇存活率,。無血清凍存液使用方法:將凍存管直接轉(zhuǎn)移至-80C水箱中冷凍保存。
無血清細胞凍存液的使用方法及注意事項:無血清細胞凍存液:含多種保護劑成分,一些保護劑,易于穿透細胞,避免細胞內(nèi)部水分子形成冰晶損傷細胞,同時另一些保護劑不能穿透細胞,但可以在冰晶形成之前,優(yōu)先結(jié)合細胞外的水分子,降低細胞外溶液的電解質(zhì)濃度,減少陽離子進入細胞的數(shù)量,我公司無血清細胞凍存液,為多種保護劑組合,在細胞內(nèi)外進行雙重保護,較大提高了細胞復蘇存活率,。【產(chǎn)品用途】1.用于免疫細胞及干細胞的存儲,。2.細胞保藏中心,用于細胞株的長期保存,。3.科研高校,,細胞株凍存,。4.醫(yī)院樣本庫細胞樣本保存?!臼褂梅椒ā?,、細胞凍存前準備(1)要求凍存的細胞在對數(shù)生長期,,且活率大于90%,。(2)計算細胞密度,一般要求密度在1-3x10cells/mL,,不同細胞系請參照附表。2、細胞凍存過程(1)將要凍存的細胞懸液,,進行細胞計數(shù),計數(shù)后離心,,8003min即可。度保存的無血清凍存液緩慢加入離心后的細胞沉淀中,,根據(jù)密度調(diào)整細胞凍存液用量。(3)反復吹吸混勻后,,分裝于細胞凍存管中,每管500ul-1000ul,,(建議500ul/管)。無血清細胞凍存液產(chǎn)品特色:即用型,,無需現(xiàn)配,即開即用,。杭州珠海無血清細胞凍存液
無血清細胞凍存液的優(yōu)勢:因不含血清,,批次間差異小。杭州珠海無血清細胞凍存液
細胞凍存的注意事項:1.為保持細胞較大存活率,,一般都采用慢凍存融的方法。2.凍存物距液氮面越近溫度越低,。標準的低凍速度為-1℃~12℃/分鐘,當溫度下降達-25℃時,,下降速度可增至-5~-10℃/分鐘,到-100℃時則可迅速凍入液氮中,。因此要適當掌握凍存物下降入液氮中的速度,,過快能影響細胞內(nèi)水分透出,,太慢則促冰晶形成,。3.初次凍存者在下降凍存時,宜先用細木棒伸入罐中探測液面位置,,然后需用溫度計與凍存物并行的辦法,以觀測下降凍存物的速度,、凍存物與液氮液面距離和溫度三者關(guān)系,當已掌握以上各參數(shù)和凍存技術(shù)熟練后,,光按下降時間和下降距離便可獲理想凍存效果。杭州珠海無血清細胞凍存液