含血清細(xì)胞凍存液凍存細(xì)胞時(shí)遇到的問(wèn)題：1.凍存細(xì)胞時(shí)需現(xiàn)配凍存液(如購(gòu)買(mǎi)市面上通用的含血清細(xì)胞凍存液,，此步可省略),。2.需要程序降溫（4℃→-20℃→-80℃→液氮），步驟繁瑣,，耗時(shí)耗力,。3.含血清，細(xì)胞污染(細(xì)菌,、霉菌和支原體等)的風(fēng)險(xiǎn)更高,。4.血清批次、品質(zhì)間差異導(dǎo)致凍存液的批次間差異,。5.需液氮凍存,，且不能原位（如孔板）凍存。Cellregen無(wú)血清細(xì)胞凍存液是不含血清和動(dòng)物源成分,，含DMSO,、糖類、氨基酸等成分的一款通用型細(xì)胞凍存液,。Cellregen無(wú)血清細(xì)胞凍存液的凍存方法是：將細(xì)胞凍存懸液（凍存管或孔板）直接放置-80℃冰箱長(zhǎng)期保存,。無(wú)血清細(xì)胞凍存液產(chǎn)品性能：2-8℃即可穩(wěn)定保存，無(wú)需冷凍,，即取即用,。寧波正規(guī)無(wú)血清細(xì)胞凍存液廠家供應(yīng)

以前在另一家實(shí)驗(yàn)室的時(shí)候，凍存細(xì)胞根本就沒(méi)有講究這些標(biāo)準(zhǔn)操作,。凍存的細(xì)胞有293T,、PT67、C2C12,、MEF(鼠胚胎成纖維細(xì)胞）,、HelaS3、HelaD,、U2OS,、HKC、RK3E,、ECO、H292、HSY,、COS7,、SupT1等。將細(xì)胞酶消化后直接參與離心,，加入凍存液（含90%的血清和10%的DMS0),，直接放在-80℃冰箱。兩三天后移入液氮中,，較久保存,，幾年后細(xì)胞的活力仍沒(méi)有什么受損，照常能復(fù)蘇,，成活率高,。但有三點(diǎn)須注意：（1）一是細(xì)胞的生長(zhǎng)狀態(tài)要好，不能長(zhǎng)得過(guò)稀,，同樣也不能過(guò)密,，細(xì)胞的狀態(tài)看起來(lái)相當(dāng)健康。70%密度的要保存的細(xì)胞須再長(zhǎng)24h才能全滿,，萬(wàn)一細(xì)胞狀態(tài)不好,，可以酶消化后再繁殖一次；（2）凍存細(xì)胞的量要留心,，不能太密也不能太稀,，一般1OOmm培養(yǎng)皿的細(xì)胞凍存為3~4管；（3）存放在-80℃冰箱的時(shí)間不能過(guò)長(zhǎng),，一兩天后轉(zhuǎn)移到液氮罐里,。我們也曾取出存放在-80℃冰箱的細(xì)胞，半年還有30%~50%的細(xì)胞有活性,，但一年的細(xì)胞就沒(méi)有活的,。長(zhǎng)沙正規(guī)無(wú)血清細(xì)胞凍存液哪家好使細(xì)胞產(chǎn)生內(nèi)源性的機(jī)械損傷，引起細(xì)胞內(nèi)環(huán)境滲透壓,。

新常態(tài)下細(xì)胞凍存指南：細(xì)胞凍存及復(fù)蘇的基本原則是慢凍速融,，實(shí)驗(yàn)證明這樣可以較大限度的保存細(xì)胞活力。目前細(xì)胞凍存多采用甘油或二甲基亞砜作保護(hù)劑,，這兩種物質(zhì)能提高細(xì)胞膜對(duì)水的通透性,，加上緩慢冷凍可使細(xì)胞內(nèi)的水分滲出細(xì)胞外，減少細(xì)胞內(nèi)冰晶的形成,，從而減少由于冰晶形成造成的細(xì)胞損傷,。復(fù)蘇細(xì)胞應(yīng)采用快速融化的方法，這樣可以保證細(xì)胞外結(jié)晶在很短的時(shí)間內(nèi)即融化,，避免由于緩慢融化使水分滲入細(xì)胞內(nèi)形成胞內(nèi)再結(jié)晶對(duì)細(xì)胞造成損傷,。典型的細(xì)胞凍存液是在生長(zhǎng)培養(yǎng)基中加入5%到10%的DMSO和5%到40%的血清，或只是在血清中加入10%的DMSO。目前在有些實(shí)驗(yàn)室中仍然采用這種自制自配的凍存液,，優(yōu)點(diǎn)是成本低,，適合自己的細(xì)胞。

細(xì)胞凍存是細(xì)胞保存的主要方法之一,。利用凍存技術(shù)將細(xì)胞置于-196℃液氮中低溫保存,，可以使細(xì)胞暫時(shí)脫離生長(zhǎng)狀態(tài)而將其細(xì)胞特性保存起來(lái)，這樣在需要的時(shí)候再?gòu)?fù)蘇細(xì)胞用于實(shí)驗(yàn),。細(xì)胞凍存的原理：細(xì)胞凍存及復(fù)蘇的基本原則是慢凍快融,，實(shí)驗(yàn)證明這樣可以較大限度的保存細(xì)胞活力。目前細(xì)胞凍存多采用甘油或二甲基亞砜作保護(hù)劑,，這兩種物質(zhì)能提高細(xì)胞膜對(duì)水的通透性,，加上緩慢冷凍可使細(xì)胞內(nèi)的水分滲出細(xì)胞外，減少細(xì)胞內(nèi)冰晶的形成,，從而減少由于冰晶形成造成的細(xì)胞損傷,。復(fù)蘇細(xì)胞應(yīng)采用快速融化的方法，這樣可以保證細(xì)胞外結(jié)晶在很短的時(shí)間內(nèi)即融化,，避免由于緩慢融化使水分滲入細(xì)胞內(nèi)形成胞內(nèi)再結(jié)晶對(duì)細(xì)胞造成損傷,。程序降溫凍存技術(shù)要點(diǎn)是慢凍，標(biāo)準(zhǔn)的凍存程序?yàn)榻禍厮俾?1～-2/℃ min,。

細(xì)胞凍存,，我們應(yīng)該注意哪些事項(xiàng)：1、有文獻(xiàn)表明,，細(xì)胞以l℃/min的速度冷凍存活率較髙,，因?yàn)檫@一速度可以很好的控制細(xì)胞內(nèi)部晶體的產(chǎn)生。我們實(shí)際操作不可能將速度控制的這么精確,，目前慣用的就是4℃30min,、-20℃1h30min、-80℃2h后轉(zhuǎn)入液氮中,。2,、正常情況下，經(jīng)過(guò)-20℃1h30min這一步后,，凍存管內(nèi)的細(xì)胞已經(jīng)處于凝固狀態(tài),，如果此時(shí)凍存管內(nèi)還是液體，很可能是DMSO或冰箱冷凍功能出現(xiàn)了問(wèn)題,。如若遇到這種情況,，不能因?yàn)闀r(shí)間到了，就把把液體狀態(tài)的凍存管放置到液氮中,，可以適當(dāng)延長(zhǎng)在-20℃環(huán)境下的冷凍時(shí)間30-60分鐘,，直至凍存液凝固后再放到液氮中,。無(wú)血清細(xì)胞凍存液產(chǎn)品特色：可微量，原位凍存,，例如雜交瘤細(xì)胞的凍存,，省時(shí)高效。合肥唐山無(wú)血清細(xì)胞凍存液

無(wú)血清細(xì)胞凍存液存儲(chǔ)條件：為避免重復(fù)凍融過(guò)程可能導(dǎo)致的凍存液品質(zhì)下降和性能降低,。寧波正規(guī)無(wú)血清細(xì)胞凍存液廠家供應(yīng)

胞冷凍保存方法：選擇凍存處于對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的細(xì)胞有助于提高復(fù)蘇細(xì)胞存活率。1.按照常用方法收集懸浮細(xì)胞或貼壁細(xì)胞于試管中,。2.按照培養(yǎng)細(xì)胞密度和所用細(xì)胞凍存管的尺寸計(jì)算所需凍存細(xì)胞數(shù),。（參考：5×105至5×106cells/ml）。3.取相當(dāng)于所需細(xì)胞數(shù)的細(xì)胞懸浮液量,，置于離心管中,，離心收集培養(yǎng)細(xì)胞（參考離心條件：1,000~2,000rpm，4℃,，3~5min）,。移去離心管中的上清液。4.加入適量的無(wú)血清型細(xì)胞凍存液于離心管中,，使細(xì)胞濃度為5×105至5×106cells/ml,。緩慢地混合均勻，制成細(xì)胞混合液,。5.將離心管中的細(xì)胞混合液分裝于已標(biāo)示完全的冷凍保存管中,。6.直接將含細(xì)胞混合液的凍存管放入-80℃冰箱，長(zhǎng)期冷凍保存,。7.若研究者需要液氮保存時(shí),，可將完全凍結(jié)的凍存管（放入-80℃冰箱后至少一晝夜）移至-196℃液氮罐。寧波正規(guī)無(wú)血清細(xì)胞凍存液廠家供應(yīng)