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外泌體(Exosome)是由細(xì)胞分泌而來的微小囊泡,,直徑約為30-200nm,密度在1.13-1.21g/ml,,具有杯狀形態(tài),、雙層膜結(jié)構(gòu),天然存在于血液,、尿液,、唾液、母乳和細(xì)胞培養(yǎng)基等生物體液中,。包括瘤細(xì)胞在內(nèi)幾乎所有類型的細(xì)胞(免疫細(xì)胞,、神經(jīng)細(xì)胞、干細(xì)胞),,都可以產(chǎn)生并釋放exosome,。Exosome內(nèi)含有與細(xì)胞來源相關(guān)的蛋白質(zhì)rRNA和microRNA,Exosome可通過細(xì)胞膜受體直接受體細(xì)胞,,也可運輸?shù)鞍踪|(zhì),、mRNA、miRNA,、lncRNA,、circRNA,甚至細(xì)胞器進(jìn)入受體細(xì)胞,,參與細(xì)胞間通訊,。Exosome在免疫應(yīng)答、炎癥反應(yīng),、血管生成,、凋亡、凝血和廢物處理等生理過程發(fā)揮關(guān)鍵作用,,不同細(xì)胞來源的exosome所含有的RNA和蛋白成分不盡相同,,可作為多種疾病的早期診斷標(biāo)記物,也能作為靶向藥物的載體進(jìn)行疾病外泌體的提取方法:超速離心法(差速離心),。溫州外泌體提取試劑哪家好
外泌體鑒定:參與生物功能的分子,,如凋亡轉(zhuǎn)接基因2互作蛋白X(ALIX)、一些病癥易感基因101蛋白(TSG101),、熱休克蛋白(HSP70,、HSP90),以及細(xì)胞分泌的特異性蛋白,。外泌體高通量檢測,。外泌體內(nèi)含有與細(xì)胞來源相關(guān)的蛋白質(zhì)和核酸,,可以運輸?shù)鞍踪|(zhì)、mRNA,、miRNA,、lncRNA、circRNA等進(jìn)入受體細(xì)胞,,參與細(xì)胞間通訊,。不同細(xì)胞來源的外泌體所含有的蛋白成分和RNA不太相同,可作為多種疾病的早期診斷標(biāo)記物,,也能作為靶向藥物的載體進(jìn)行疾病治病,。高通量測序。2.mRNA高通量測序,。芯片(人,、小鼠)。芯片(人,、小鼠),。5.蛋白質(zhì)組分析(iTRAQ、TMT,、Label-free),。昆明外泌體提取試劑供應(yīng)商外泌體提純試劑盒的特色與優(yōu)勢:適用于多種物種。
外泌體的提取,、分離方法:梯度密度離心法,。研究發(fā)現(xiàn),外泌體的密度在1.1~1.19kg·L-1之間,,因此,,可以采用密度梯度離心法來分離外泌體。該方法是將超速離心結(jié)合蔗糖密度梯度或蔗糖墊結(jié)合,,原理是先除去非囊泡物質(zhì),再通過梯度密度濃縮提取外泌體,,該方法可以得到相對較為純凈的外泌體,。傳統(tǒng)的梯度密度方法通常需要離心16h,但是2012年,,研究者[15]使用了62~90h才分離出某些確切囊泡,,因此,該方法可能不足以沉淀所有的外泌體,。如果離心時間不充足,,污染物質(zhì)可能和外泌體保持在相同的密度層,特別是這個密度范圍又比較寬,。
外泌體與肺病預(yù)后:外泌體mirRNA和蛋白質(zhì)被認(rèn)為是NSCLC的預(yù)后因子,。Dejima等在研究NSCLC患者預(yù)后的生物標(biāo)志物時發(fā)現(xiàn),,外泌體miR-4257和miR-21的含量顯著上升。此外,,還有研究表明,,低水平miR-146a-5p的NSCLC患者較高水平miR-146a-5p的NSCLC患者有更高的復(fù)發(fā)率。Sandfeld-Paulsen等在研究276例NSCLC患者血漿的外泌體時發(fā)現(xiàn),,NY-ESO-1是其中對低生存率有顯著影響的標(biāo)志物,。Silva等利用TaqMan低密度芯片的方法系統(tǒng)分析了28位NSCLC患者體內(nèi)的365種miRNA,其中l(wèi)et-7f,、miR-30e-3p和miR-20b表達(dá)均下調(diào),,進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn),let-7f和miR-30e-3p水平可以區(qū)分早期和晚期NSCLC患者,,高水平let-7f和miR-30e-3p與不良預(yù)后密切相關(guān),。由于外泌體是一個大小約幾十納米的囊狀小體,大于一般蛋白質(zhì),。
外泌體作為近幾年來的研究熱點,,受到了科研工作者的青睞及追捧。由于外泌體內(nèi)攜帶有大量的miRNA,少量lncRNA,Mrna以及DNA蛋白質(zhì)成為液體活檢的潛力無限的研究對相,。所以,,獲得純度高、內(nèi)容物完整的外泌體非常之重要,,那么,,外泌體的提取方法也顯得尤為重要。一,、差速離心法差速離心法可以說是傳統(tǒng)普遍的外泌體提取方法,。原理是:首先低速離心以除去細(xì)胞和細(xì)胞凋亡碎片;隨后,,高速離心以去除大囊泡,;高速離心以沉淀外泌體。蘇州君欣生物科技有限公司外泌體的提取分離:超速離心法(差速離心),。南京外泌體提取試劑哪家便宜
不同細(xì)胞分泌的外泌體具有不用的組成成分和功能,,可作為疾病診斷的生物標(biāo)志物。溫州外泌體提取試劑哪家好
外泌體(exosome),,特指直徑在40-100nm的盤狀囊泡,。其主要來源于細(xì)胞內(nèi)內(nèi)溶酶體微粒內(nèi)陷形成的多囊泡體,經(jīng)多囊泡體外膜與細(xì)胞膜融合后釋放到胞外基質(zhì)中?,F(xiàn)已證實可以分泌外泌體的細(xì)胞有:肥大細(xì)胞,、淋巴細(xì)胞、樹突狀細(xì)胞、瘤細(xì)胞,、間充質(zhì)干細(xì)胞等,。外泌體在免疫中抗原呈遞、瘤的生長與遷移,、組織損傷的修復(fù)等生理病理上起著重要的作用,。同時,不同細(xì)胞分泌的外泌體具有不用的組成成分和功能,,可作為疾病診斷的生物標(biāo)志物,。細(xì)胞外囊泡是蛋白質(zhì)、mRNA,、miRNA和脂質(zhì)運輸來完成細(xì)胞間通訊通路的重要媒介,,根據(jù)它們的大小和發(fā)生分為三類,包括外泌體,、微泡和凋亡小體,。其中,外泌體是直徑大約為40-100nm的包裝囊泡,,由多種細(xì)胞分泌,,內(nèi)含有特定的蛋白質(zhì)、脂質(zhì),、細(xì)胞因子或遺傳物質(zhì),。來源于不同的組織的外泌體不光具有其特異性蛋白分子,而且還包含其行使功能的關(guān)鍵分子,。溫州外泌體提取試劑哪家好