膠原蛋白的提取方法:1.堿法提取:堿法提取膠原蛋白常用的處理劑為石灰,、氫氧化鈉,、碳酸鈉等。如Holzer等[5]采用1%~1.5%石灰水浸泡的方法提取膠原蛋白,。由于它容易造成肽鍵水解,,因此得到的水解產(chǎn)物分子量比較低。所以,,若想保留膠原的三股螺旋結(jié)構(gòu),,此法不可取。2.鹽法提?。蝴}法提取膠原蛋白所用的中性鹽有鹽酸-三羥甲基胺基甲烷(Tris-HCl),、氯化鈉、檸檬酸鹽等,。在中性條件下,,當鹽的濃度達到一定量時,膠原溶解,。并且可采用不同濃度的氯化鈉對提取的膠原蛋白進行鹽析處理,,可以沉淀出不同類型的膠原蛋白。制備鼠尾膠原:重復步驟2,、3,,直至尾腱量夠用,。太原鼠尾膠原服務電話
膠原蛋白占人體蛋白質(zhì)總量的三分之一,不論來源于哪一種動物或哪一種組織的膠原都有許多共同特性,。膠原蛋白可分為20幾個亞型,,但為常見的為I、II,、III型膠原蛋白,,即間質(zhì)膠原蛋白。其中I型為豐富且品質(zhì)優(yōu)良,。劃重點:任何動物的膠原都有許多共性,,I型膠原蛋白為豐富且品質(zhì)優(yōu)良,鼠尾膠原蛋白是I型膠原蛋白,。于是,,動物中心就進行了有關(guān)“耗子尾汁”的發(fā)明:一種基于鼠尾膠原蛋白制備的可吸收止血材料及其制備方法并在說明書中給出了原因:“一般的生物體中提取的膠原蛋白多為混合型,之前多從牛皮,、豬皮,、牛腱中提取,但這類膠原蛋白不僅有油脂等其他雜質(zhì),,深圳鼠尾膠原單價對于生物科研汪們來說,,大白鼠、小白鼠們簡直渾身是寶,。
生物醫(yī)用鼠尾膠原蛋白的提取方法,,采用酸法與酶法相結(jié)合的工藝,保持恒低溫無菌的環(huán)境,,利用同樣濃度的鹽溶液進行兩次鹽析與離心,,簡化了提純步驟。所用酸為低濃度酸溶液,,并采用檸檬酸替代醋酸進行提純,。從提取原料到樣品生成過程中,進行多次真空冷凍干燥,,并經(jīng)進一步處理獲得含水率在3%以下的膠原蛋白微粉,;較后由滅菌、無菌包裝,,成品膠原蛋白粉末的純度在98%以上。本發(fā)明獲得的膠原蛋白降低了蛋白的免疫原性,,提高了產(chǎn)率和生物相容性,,降低了成本,適用于生物醫(yī)用材料,,所得到的膠原蛋白能完整地保留其特有的三股螺旋結(jié)構(gòu),。
鼠尾膠原蛋白Ⅰ型使用方法及注意事項:通過醋酸抽提,、氯化鈉沉淀、磷酸氫二鈉沉淀等步驟制備的,。鼠尾膠原蛋白可用于包被細胞培養(yǎng)器皿,,培養(yǎng)一些在普通細胞培養(yǎng)器皿中不易貼壁的細胞。也可用于制備三維膠,,模擬真實的生長環(huán)境,,使細胞在三維環(huán)境中生長。1,,在使用鼠膠原蛋白型包被的細胞培養(yǎng)皿中檢查到PC-12細胞的貼壁和生長,。1mg/ml濃度以上,pH左右時可形成具有一定強度的三維膠,,檢查到NIH-3T3細胞在三維膠內(nèi)正常生長,、PC-12細胞在三維膠表面正常生長。使用方法:1,、細胞培養(yǎng)器皿的表面包被推薦濃度:1-5ug/cm0.012mg/ml,。按以下表格體積加到相應的培養(yǎng)器皿中。成纖維細胞膠原凝膠復合物有著良好的生物學特性,。
對于生物科研汪們來說,,大白鼠、小白鼠們簡直渾身是寶,,從毛發(fā),、皮膚,到心肝脾肺,,甚至各種排泄物,,都是我們重要的研究對象。尾巴,,自然也是,。所以耗子尾汁不僅存在,甚至是我們生物實驗中必不可少的實驗材料和實驗對象,。有不少人靠「耗子尾汁」發(fā)了CNS和頂刊,。沒有「耗子尾汁」,很多課題可能都沒辦法開展,。在以小鼠為模式生物進行科學研究的實驗室中,,日常和基本的一個實驗就是提取它們的遺傳物質(zhì)—DNA(脫氧核糖核酸)進行基因型鑒定,檢測這些小動物的基因組中是否含有特定的DNA,??梢岳斫鉃榻o小動物做核酸檢測。注意事項:在室溫下pH 中性時可迅速成膠,,在操作過程中要 盡量保持低溫,。蕪湖珠海鼠尾膠原
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鼠尾膠原凝膠體在皮膚細胞原代培養(yǎng)中的應用:在國外的藥理,毒理和皮膚病學的研究領(lǐng)域中已得到的限翩,否則培養(yǎng)成功率極低.本文采用鼠尾膠原凝膠體作為滋養(yǎng)層,提高了培養(yǎng)細胞的材料和方法r1]實驗材料:培養(yǎng)液DEIdE(G皿}ao),表皮細胞生長因子(EGFSigma),小牛血清(上海祟明生物制品廠),氫化可的松,胰島素(Sigm,青,鏈霉素,胰蛋白酶,]~DTA,細胞培養(yǎng)皿~35mill(00rningrSA).(2)皮膚基底細胞的分離和細胞懸液的制備:2~3d的新生大鼠(wisr),以75%酒精消毒背部皮膚,剪下皮膚后.以消化12h.輕刷表皮面,收集細胞懸液,加入細胞培養(yǎng)液.用梯度離心收集細胞,以3xi0/m]濃度接種平皿.(3)鼠尾膠原凝膠體的制備:具體方法參見文獻c13o(4)培養(yǎng)皿的膠原鋪制:i.0ml的酸溶解膠原滴入~35mm培養(yǎng)皿中,鋪滿平皿底部;將平皿暴露于氨氣中30min,然后置空氣中30rain,散盡剩余氨氣,。太原鼠尾膠原服務電話