外泌體（exosomes）是活細(xì)胞經(jīng)過(guò)"內(nèi)吞-融合-外排"等一系列調(diào)控過(guò)程而形成的膜性囊泡,，來(lái)源于晚期核內(nèi)體(也稱為多囊泡體),，直徑約為30-150nm，密度在1.13-1.21g/ml,，天然存在于血液,、唾液、尿液及母乳等體液中,，同時(shí)外泌體也存在于組織和細(xì)胞間隙中,。人體中幾乎所有類型的細(xì)胞均能產(chǎn)生外泌體，人體中大約有1014個(gè)外泌體,，大約平均每個(gè)細(xì)胞產(chǎn)生1000-10000個(gè),。外泌體中含有核酸（DNA、miRNA,、lncRNA,、mRNA、tRF等）,、蛋白和脂類,，在細(xì)胞間物質(zhì)和信息轉(zhuǎn)導(dǎo)中發(fā)揮重要作用，研究表明其在干細(xì)胞、免疫調(diào)控,、瘤轉(zhuǎn)移,、血管生成以及生物標(biāo)志物等領(lǐng)域都發(fā)揮著不可替代的作用。直接把外泌體從尿液中沉降下來(lái),，無(wú)須分離培養(yǎng)人尿液來(lái)源細(xì)胞并收集培養(yǎng)基,。無(wú)錫外泌體提取試劑廠家推薦

研究中研究人員發(fā)現(xiàn)，胃病細(xì)胞周圍富含TAM,。TAM以M2極化表型為特征,，并促進(jìn)胃病細(xì)胞在體外和體內(nèi)的遷移。此外,，研究人員發(fā)現(xiàn)M2衍生的外泌體決定了TAMs介導(dǎo)的遷移活動(dòng),。通過(guò)使用質(zhì)譜方法，研究人員確定載脂蛋白E（ApoE）是M2巨噬細(xì)胞衍生的外泌體中高度特異性和有效的蛋白質(zhì),。ApoE是一種M2特異性且高度豐富的來(lái)源于M2外泌體的蛋白質(zhì),，是決定胃病細(xì)胞遷移潛力的主要驅(qū)動(dòng)因素。然而,，來(lái)自ApoE-/-的小鼠M2巨噬細(xì)胞的外泌體在體外和體內(nèi)對(duì)胃病細(xì)胞的遷移沒(méi)有顯著影響,。在機(jī)制上，M2巨噬細(xì)胞衍生的外泌體介導(dǎo)ApoE啟動(dòng)的PI3K-Akt信號(hào)通路,，并在TAM和受體胃病細(xì)胞之間進(jìn)行細(xì)胞間轉(zhuǎn)移,，促進(jìn)細(xì)胞骨架的遷移?？偟膩?lái)說(shuō),，該研究發(fā)現(xiàn)外泌體介導(dǎo)的功能性ApoE蛋白從TAM轉(zhuǎn)移到一些病癥細(xì)胞，促進(jìn)了胃病細(xì)胞的遷移,。外泌體提取試劑廠家直銷重復(fù)離心操作還有可能對(duì)囊泡造成損害,，從而降低其質(zhì)量。

外泌體的提取方法：1,、磁珠免疫法,。外泌體表面有其特異性標(biāo)記物（如CD63、CD9蛋白）,，用包被抗標(biāo)記物抗體的磁珠與外泌體囊泡孵育后結(jié)合,，即可將外泌體吸附并分離出來(lái)。磁珠法具有特異性高,、操作簡(jiǎn)便,、不影響外泌體形態(tài)完整等優(yōu)點(diǎn)，但是效率低,，外泌體生物活性易受pH和鹽濃度影響，不利于下游實(shí)驗(yàn)，難以普遍普及,。2,、多聚物沉淀法。聚乙二醇（PEG）為常用的多聚物,，可與疏水性蛋白和脂質(zhì)分子結(jié)合共沉淀,，早先應(yīng)用于從血清等樣本中收集病毒，現(xiàn)在也被用來(lái)沉淀外泌體,，其原理可能與競(jìng)爭(zhēng)性結(jié)合游離水分子有關(guān),。利用PEG沉淀外泌體存在不少問(wèn)題：比如純度和回收率低，雜蛋白較多（假陽(yáng)性）,，顆粒大小不均一,，產(chǎn)生難以去除的聚合物，機(jī)械力或者吐溫-20等化學(xué)添加物將會(huì)破壞外泌體等,。

功能：當(dāng)外泌體在1980年初次被發(fā)現(xiàn)后,，其被認(rèn)為是細(xì)胞排泄廢物的一種方式，如今隨著大量對(duì)其生物來(lái)源,、其物質(zhì)構(gòu)成及運(yùn)輸,、細(xì)胞間信號(hào)的傳導(dǎo)以及在體液中的分布的研究發(fā)現(xiàn)外泌體具有多種多樣的功能。外泌體的功能取決于其所來(lái)源的細(xì)胞類型,，其可參與到機(jī)體免疫應(yīng)答,、抗原提呈、細(xì)胞遷移,、細(xì)胞分化,、一些病癥侵襲等方方面面。有研究表明一些病癥來(lái)源的外泌體參與到一些病癥細(xì)胞與基底細(xì)胞的遺傳信息的交換,，從而導(dǎo)致大量新生血管的生成,，促進(jìn)了一些病癥的生長(zhǎng)與侵襲。超離法是常用的外泌體純化手段,，采用低速離心,、高速離心交替進(jìn)行，可分離到大小相近的囊泡顆粒,。

外泌體相關(guān)miRNA與肺病的診斷：miRNAs是一類含有20～25個(gè)核苷酸的非編碼小RNA,，能夠通過(guò)下調(diào)或壓制靶mRNAs來(lái)調(diào)節(jié)轉(zhuǎn)錄水平上的基因表達(dá)，目前非編碼RNA被普遍發(fā)現(xiàn)存在于NSCLC患者外泌體中,，參與一些病癥的形成和演化過(guò)程,。單個(gè)miRNA可能通過(guò)壓制性復(fù)合物與多個(gè)mRNA結(jié)合，從而阻滯整個(gè)生物通路,。因此,，外泌體的miRNA具有成為NSCLC標(biāo)志物的優(yōu)勢(shì),。Chen等在152例肺病患者的研究中初次報(bào)道了循環(huán)游離miRNA的表達(dá),，與75例健康者相比,，發(fā)現(xiàn)了兩種高表達(dá)的miRNA（miR-25和miR-223）。Rabinonowits等對(duì)27例肺病患者和9例健康人的血漿外泌體中12個(gè)miRNA的表達(dá)進(jìn)行了評(píng)估,，結(jié)果顯示,，12個(gè)一些病癥相關(guān)的miRNA*在肺病患者中過(guò)度表達(dá)。Cazzoli等收集了30個(gè)血漿樣本,，發(fā)現(xiàn)4種外泌體miRNA（miR-378a,、-379a、-139-5p,、-200b-5p）在肺病患者血清中明顯升高,，用于篩查患者與健康人ROC曲線下面積（AUC）為0.908。離心除去細(xì)胞器,，留取上清,。外泌體檢測(cè)作為一種新型的液體活檢熱點(diǎn)技術(shù)已被許多臨床科研機(jī)構(gòu)普遍地應(yīng)用于一些病癥和疾病的無(wú)創(chuàng)診斷。成都外泌體提取試劑銷售廠家

外泌體提純?cè)噭┖械奶厣c優(yōu)勢(shì)：純化和富集的完整血漿/血清,，尿液和細(xì)胞培養(yǎng)基中外泌體可用于功能研究,。無(wú)錫外泌體提取試劑廠家推薦

用于外泌體提取的體液收集注意事項(xiàng)：1、選擇血清還是血漿,？推薦大多數(shù)研究選擇血漿,。血液凝固過(guò)程中血小板會(huì)產(chǎn)生大量外泌體，含量占血清中外泌體的50%以上,，選擇血漿可避免不必要的影響,。2、注意抗凝劑的選擇,。肝素類抗凝劑與PCR假陰性有關(guān),，這可能是因?yàn)楦嗡嘏c引物和/或酶有競(jìng)爭(zhēng)作用。除了克制PCR,，肝素可以與外泌體結(jié)合,，阻止細(xì)胞攝取外泌體。因此需要記錄肝素類藥物的患者的血液樣本,。EDTA和雙嘧達(dá)莫（CTAD）,，CTAD可以阻止血小板的并克制其釋放外泌體。EDTA可能會(huì)干擾PCR反應(yīng)（盡管其程度小于肝素）,，但是還是優(yōu)于其他選擇,。此外，有研究表明鈣螯合劑可在體外促進(jìn)外泌體與血小板的結(jié)合從而降低經(jīng)EDTA,、或檸檬酸鹽處理后的血液樣本中外泌體的表觀數(shù)量,。無(wú)錫外泌體提取試劑廠家推薦