鼠尾膠原在心肌細胞氧化損傷中的保護作用：膠原蛋白具有抗氧化作用,但既往在實驗室主要將鼠尾膠原用于促進細胞貼壁和支架構建,對于其抗氧化作用目前尚無相關研究。目的:探討鼠尾膠原對過氧化氫導致離體心肌細胞氧化損傷的保護作用,。方法:將原代培養(yǎng)的SD大鼠乳鼠心肌細胞隨機接種到鋪有鼠尾膠原的培養(yǎng)皿(實驗組)和普通培養(yǎng)皿(對照組)中,并且均用0,10,100μmol/LH2O2誘導。24h后,以電子顯微鏡觀察各組乳鼠心肌細胞的形態(tài),應用MTT比色法檢測心肌細胞存活率,TUNEL法檢測心肌細胞凋亡形態(tài),流式細胞技術檢測心肌細胞凋亡率,黃嘌呤氧化酶法檢測超氧化物歧化酶活力,硫代巴比妥比色法檢測丙二醛水平,Western-Blot檢測凋亡蛋白Bax,、Bcl-2的表達。結果與結論:兩組培養(yǎng)皿中,隨著過氧化氫濃度的增高,均可見細胞凋亡狀態(tài)明顯加重,細胞存活率及細胞內過氧化氫活力明顯下降,細胞凋亡率及細胞內丙二醛水平明顯增高,Bcl-2/Bax比值明顯降低,呈劑量依賴性,。在冰水浴中將粉碎的鼠尾腱在醋酸溶液中溶脹。徐州正規(guī)鼠尾膠原供應商

鼠尾膠原備用膠凝程序：1）在冰上放置以下物品：膠原蛋白I,、無菌10×PBS,、無菌蒸餾水、無菌1MNaOH,。2）確定膠原蛋白I待使用溶液所需的較終濃度的體積,。3）在冰上放置無菌管以收存膠原蛋白I。4）在無菌條件下執(zhí)行以下步驟,。4.1加入10×PBS（終體積/10）mL4.2計算要使用的膠原蛋白I的體積（不要添加到管中直到步驟4.6為止）終體積x終膠原蛋白I濃度（mg/mL）,。4.3向10×PBS溶液中加入（要加入的膠原體積×0.023）mL的無菌冰冷1MNaOH。4.4向4.3溶液中加入下述體積的無菌冰冷蒸餾水：添加蒸餾水體積=V（終）—V（膠原蛋白）—V(10×PBS）—V（1MNaOH）4.5混合管中的物質并放入冰中,。4.6加入膠原蛋白I并計算體積,，混勻，冰上備用,。5）膠原蛋白I溶液可立即使用或在冰上放置2-3小時,。6）使用時，無菌條件下將溶液加入到細胞培養(yǎng)裝置中37°C凝膠30min,。論鼠尾膠原能促進毛細胞貼壁,，涂布鼠尾膠原有利于膜片鉗實驗的長時程記錄，并且制作簡便,，成本低廉,。鄭州鼠尾膠原銷售廠家在操作過程中要盡量保持低溫。保存條件4℃保存,，切勿凍存,，有效期一年,。

鼠尾膠原：鼠尾膠原是一種天然培養(yǎng)基和一種天然的黏附劑。實驗設備及材料：大鼠尾巴,、剪刀,、鑷子、止血鉗,、彎頭吸管,、平皿、三角燒瓶,、燒杯,、量筒、天平,、生理鹽水,、75%酒精、0.1%醋酸溶液,、蓋玻片,、培養(yǎng)瓶、鉆石筆,、鼠尾膠原,。實驗內容：1、制備鼠尾膠原（兩個同學一組操作）,。2,、切割小玻片。3,、利用鼠尾膠原將小玻片固定于培養(yǎng)瓶內,。制備鼠尾膠原：1、取大鼠尾巴洗凈,，75%酒精浸泡5分鐘,；2、手持尾巴,，用止血鉗夾住鼠尾的,，折斷尾骨后拉出尾腱；3,、將尾腱剪斷置于平皿中,，生理鹽水浸泡；4,、重復步驟2,、3，直至尾腱量夠用；5,、吸去生理鹽水,，將尾腱稱重（0.5-1克）；6,、將尾腱置于平皿內剪碎,，轉移至三角燒瓶中；7,、按每克尾腱50ml的比例,，加入0.1%醋酸溶液；8,、搖晃,，使尾腱分散于醋酸溶液中，4℃放置一星期,；9,、離心，4000轉/分,，10-15分鐘,；10、吸取上清,，分裝成小瓶,，4℃保存。

鼠尾膠原蛋白I型,，用那一種膠原酶可以溶解：1．將膠原加入到0.1M的醋酸中，制備成濃度為0.1%的溶液,。在室溫中攪拌1-3小時直到完全溶解,。2．建議將溶液轉移到擰口的玻璃瓶中，并小心的在瓶底鋪上一層氯仿,。氯仿的量約為膠原溶液的10%,。不要晃動或攪拌。在2-8度中放置過夜,。在無菌條件下轉移上層的膠原溶液,。我們不建議用過濾的方法無菌化。已經發(fā)現(xiàn)該方法會導致丟失蛋白,。3．稀釋一定數(shù)量的膠原溶液,。4．按照6-10ug/cm2的濃度包被培養(yǎng)瓶。在室溫或37度結合數(shù)小時或者2-8度過夜,。5．從包被表面除去多余的液體,。過夜干燥。如果膠原溶液不是無菌的，這時候可以在無菌細胞操作室中暴光在紫外線下過夜消毒,。在接種細胞前用無菌的水漂洗,。論鼠尾膠原能促進毛細胞貼壁，涂布鼠尾膠原有利于膜片鉗實驗的長時程記錄,，并且制作簡便,，成本低廉。鼠尾膠原蛋白還能用于制備三維膠,。

膠原蛋白占人體蛋白質總量的三分之一,，不論來源于哪一種動物或哪一種組織的膠原都有許多共同特性。膠原蛋白可分為20幾個亞型,，但為常見的為I,、II、III型膠原蛋白,，即間質膠原蛋白,。其中I型為豐富且品質優(yōu)良。劃重點：任何動物的膠原都有許多共性,，I型膠原蛋白為豐富且品質優(yōu)良,，鼠尾膠原蛋白是I型膠原蛋白。于是,，動物中心就進行了有關“耗子尾汁”的發(fā)明：一種基于鼠尾膠原蛋白制備的可吸收止血材料及其制備方法并在說明書中給出了原因：“一般的生物體中提取的膠原蛋白多為混合型,，之前多從牛皮、豬皮,、牛腱中提取,，但這類膠原蛋白不僅有油脂等其他雜質，鼠尾膠原蛋白用于培養(yǎng)容器等實驗室設備的內部涂層,。石家莊正規(guī)鼠尾膠原哪家好

將無菌5cm左右的紗布海綿貼在150mm培養(yǎng)皿的蓋子上來制備氨蒸氣室,。徐州正規(guī)鼠尾膠原供應商

鼠尾膠原的生物礦化和TEM觀察：果凍樣Ⅰ型膠原蛋白膠體初始浸泡在礦化液中時呈微白色；礦化2d后,，膠體的顏色逐漸加深至乳白色,；礦化6d后，隨著羥基磷灰石晶體礦化長入膠原纖維內部,，膠體顏色加深至純白色,，并在膠體表面沉積了一層薄薄的羥基磷灰石鈣晶體，予鑷子夾起,，其表層羥基磷灰石鈣晶體破碎散落,。TEM表征顯示：礦化2d后，Ⅰ型膠原纖維的明暗相隔周期性條紋結構逐漸模糊,，羥基磷灰石鈣前體滲入膠原纖維內部,，膠原纖維部分礦化,，沿著膠原纖維生長，忖度變深,；礦化6d后,，Ⅰ型膠原纖維的明暗相隔D-Band結構完全消失，膠原纖維內部可以看到黑色羥基磷灰石晶體,，嵌入膠原纖維縱向生長,。當鼠尾Ⅰ型膠原纖維完全礦化時，由于整條膠原纖維都被羥基磷灰石鈣晶體占據(jù),，膠原纖維呈現(xiàn)黑色,，選區(qū)衍射斑圖符合羥基磷灰石表征。徐州正規(guī)鼠尾膠原供應商