動(dòng)物細(xì)胞RNA提取:1,、懸浮細(xì)胞:可直接離心后棄掉培養(yǎng)基,,用無(wú)菌PBS清洗1~2遍后,再用適量PBS懸浮起來,,然后再加入裂解液進(jìn)行裂解,。千萬(wàn)不要完全棄掉液體后,往沉淀細(xì)胞里直接加入裂解液,,這樣會(huì)使外表層的細(xì)胞裂解后釋放的組蛋白包裹粘附在沉淀細(xì)胞外側(cè),,從而限制沉淀內(nèi)部的細(xì)胞與裂解液的接觸,從而導(dǎo)致細(xì)胞裂解不徹底,,降低RNA得率,。2、半貼壁或貼壁不緊的細(xì)胞:棄掉培養(yǎng)基后,,用PBS洗1~2次,,然后直接吸取適量PBS用吸管或者泵吹打培養(yǎng)皿,把細(xì)胞吹下來,,轉(zhuǎn)移到無(wú)RNA酶的EP管中,,加裂解液進(jìn)行提取。常用RNA提取方法有:1TRIzol法,;2TRIzol+過柱法,;3CTAB+過柱法;4試劑盒法,。廈門珠海RNA提取試劑
拭子RNA提取試劑的選擇,?1、產(chǎn)品價(jià)格,。價(jià)格也是選購(gòu)產(chǎn)品的重要考量因素,。對(duì)于絕大多數(shù)實(shí)驗(yàn)如Northern雜交、RT-PCR,、RealTimeRT-PCR,、cDNA文庫(kù)構(gòu)建等,國(guó)產(chǎn)試劑盒都能滿足質(zhì)量要求,。與國(guó)外有名品牌相比,,國(guó)產(chǎn)試劑盒的價(jià)格較為便宜,價(jià)格還不到國(guó)外品牌價(jià)格的30%,性價(jià)比較高,。因而,,對(duì)于以上實(shí)驗(yàn)建議選用國(guó)產(chǎn)試劑盒。一些經(jīng)費(fèi)不是很多的課題研究或樣本量較大的臨床檢測(cè)項(xiàng)目,,特別適合選用國(guó)產(chǎn)試劑盒,。2、與國(guó)外有名品牌相比,,國(guó)產(chǎn)試劑盒在拭子RNA提取純度上略有不足,,但不影響大多數(shù)實(shí)驗(yàn),特別是下游需要PCR擴(kuò)增的實(shí)驗(yàn)和分子雜交類實(shí)驗(yàn),。在提取得率上,,國(guó)內(nèi)試劑盒與國(guó)外品牌差別不大,而在價(jià)格方面,,國(guó)產(chǎn)試劑盒具有比較明顯的優(yōu)勢(shì),。如果經(jīng)費(fèi)充足,RNA純度要求特別高,,可考慮選擇Q等國(guó)外有名品牌,。如果經(jīng)費(fèi)不多或下游主要做PCR或分子雜交等實(shí)驗(yàn),可考慮選擇性價(jià)比較高的國(guó)產(chǎn)品牌,。寧波RNA提取試劑單價(jià)RNA提取試劑注意事項(xiàng):TRIReagent抽提總RNA的同時(shí),,理論上也可抽提蛋白和DNA。
酵母總RNA快速提取試劑盒(離心柱型):一,、原理簡(jiǎn)介,。改進(jìn)的異硫氰酸胍/酚一步法裂解細(xì)胞和滅活RNA酶,然后總RNA在高離序鹽狀態(tài)下選擇性吸附于離心柱內(nèi)硅基質(zhì)膜,,再通過一系列快速的漂洗-離心的步驟,去蛋白液和漂洗液將細(xì)胞代謝物,、蛋白等雜質(zhì)去除,較后低鹽的RNasefreewater將純凈RNA從硅基質(zhì)膜上洗脫,。二,、試劑盒特點(diǎn):1、離心吸附柱內(nèi)硅基質(zhì)膜全部采用進(jìn)口世界有名公司特制吸附膜,,柱與柱之間吸附量差異極小,,可重復(fù)性好??朔藝?guó)產(chǎn)試劑盒膜質(zhì)量不穩(wěn)定的弊端,。2、結(jié)合了異硫氰酸胍/酚一步法試劑穩(wěn)定性好,,純度高和離心柱方便快捷的優(yōu)點(diǎn),,不需要異丙醇沉淀和乙醇洗滌過程,,RNA可以直接從離心柱上洗脫避免了過度干燥不易溶解問題。3,、獨(dú)有的RL裂解液配方,可以有效的消除基因組污染,。
RNA指的是核糖核酸,。真核生物體的遺傳物質(zhì)存在于細(xì)胞核內(nèi),多數(shù)的真核生物使用DNA也就是脫氧核糖核酸來作為遺傳的中心物質(zhì),,但是少量的病菌遺傳物質(zhì)可以是RNA,。正因?yàn)椴【倪z傳物質(zhì)是RNA,所以可以通過檢測(cè)病菌的RNA是否存在,,或者其濃度和含量來判斷是否存在相應(yīng)的病菌傳染,,傳染的程度及病菌是否仍在大量復(fù)制。一個(gè)核糖核苷酸分子由磷酸,,核糖和堿基構(gòu)成,。RNA的堿基主要有4種,即A腺嘌呤,、G鳥嘌呤,、C胞嘧啶、U尿嘧啶,,其中,,U(尿嘧啶)取代了DNA中的T。RNA是核糖核酸的縮寫,。存在于生物細(xì)胞以及部分病菌,、類病菌中的遺傳信息載體。RNA由核糖核苷酸經(jīng)磷酸二酯鍵縮合而成長(zhǎng)鏈狀分子,。拭子RNA提取試劑的選擇,?操作簡(jiǎn)便性。
RNA提取注意事項(xiàng):所有實(shí)驗(yàn)所用的泵頭,、離心管等消耗品均要使用RNase-free的,;整個(gè)過程要在無(wú)RNase污染的條件下進(jìn)行,通??梢栽跓o(wú)菌操作臺(tái)中進(jìn)行實(shí)驗(yàn),,并用75%的酒精進(jìn)行擦拭殺菌,如有必要也可在實(shí)驗(yàn)前噴灑一些商用的RNase壓制劑,;所有相關(guān)溶液的配制要使用RNase-free水或DEPC水(包括75%酒精也需要用無(wú)水乙醇與DEPC水配制),;溶液的配制使用移液器進(jìn)行操作,切勿使用量筒等中間器皿,;研缽,、研棒、鑷子、剪刀等用錫箔紙包好后,,200℃干熱滅菌4h,;實(shí)驗(yàn)過程中一定要戴手套和口罩;異丙醇,、氯仿,、乙醇等試劑要使用未開封的,或者開封之后直接分裝至小容量離心管的,,以避免多次使用的交叉污染,;好的試劑盒價(jià)格比較貴,在實(shí)驗(yàn)室可以根據(jù)自己的實(shí)驗(yàn)需要來定奪試劑盒的使用,。廈門RNA提取試劑廠家推薦
血漿/血清中miRNA提取試劑盒:是專門針對(duì)血清,、血漿樣本中miRNA提取而開發(fā)的。廈門珠海RNA提取試劑
超快速多糖多酚植物RNA提取試劑盒優(yōu)勢(shì):1,、快速:多糖多酚植物RNA提取試劑盒提取RNA的整個(gè)實(shí)驗(yàn)操作步驟簡(jiǎn)化快捷從時(shí)間因素考量上較大限度的防止RNA在提取中的降解(一般樣品十多分鐘就能完一個(gè)樣RNA的提取,,較大縮短了一般試劑盒提取所需要的半小時(shí)甚至更長(zhǎng)的時(shí)間)。2,、高產(chǎn)量:多糖多酚植物RNA提取試劑盒擁有較強(qiáng)細(xì)胞裂解液,,保證后續(xù)RNA提取的得率。(能完全通過化學(xué)方法徹底裂解細(xì)胞讓RNA釋放完整,,并且有效成分能壓制內(nèi)源RNA酶的降解作用),。3、高純度:試劑盒的進(jìn)口吸附柱具有的專一吸附特性和強(qiáng)吸附力,。三管齊下保證所提取RNA的產(chǎn)量和純度,,前期得到的高質(zhì)量RNA才能保證后續(xù)實(shí)驗(yàn)成功,尤其是對(duì)熒光定量PCR實(shí)驗(yàn)等,。廈門珠海RNA提取試劑