一種生物醫(yī)用鼠尾膠原蛋白的提取方法：1.用0.03?0.06mol/L的檸檬酸溶液溶解沉淀物，成透明澄清黏稠溶液；在冰水浴中，調(diào)節(jié)pH=6.5,，用的3?6mol/L的NaCl溶液緩慢加入上清液中，不斷攪拌至溶液中白色的絮狀物不再析出,，4°C沉淀10小時(shí),，去除上清液，去除上清液,，絮狀溶液高速冷凍離心處理，收集沉淀,；2.用0.03?0.06mol/L的檸檬酸再次溶液溶解沉淀物,，成透明澄清黏稠溶液，冰水浴中,，調(diào)節(jié)PH=6.5;溶液依次通過(guò)陽(yáng)離子交換樹(shù)脂,、陰離子交換樹(shù)脂進(jìn)行脫鹽處理；(8)將脫鹽后的膠原蛋白溶液,，-40至-20°C預(yù)凍2?4小時(shí),，然后真空冷凍干燥，凍干產(chǎn)品經(jīng)進(jìn)一步處理得到含水率在3%以下的膠原蛋白微粉,，滅菌,、包裝，得到成品膠原蛋白粉末,。為了盡可能減少對(duì)動(dòng)物的傷害和方便試驗(yàn)人員的操作,，剪下一小段鼠尾是一個(gè)不錯(cuò)的選擇。溫州珠海鼠尾膠原

鼠尾Ⅰ型膠原：組裝液的配置：1.50mmol/L甘氨酸+200mmol/L氯化鉀100mL,，用1mol/L氫氧化鈉調(diào)節(jié)酸堿度至9.2,。2.膠原纖維的重構(gòu)吸取膠原10μL至小培養(yǎng)皿中，倒入0.5mL自組裝液,，室溫放置20min,。予自組裝液自組裝24h。吸取0.05%戊二醛2mL至小培養(yǎng)皿中,，將自組裝24h的膠原浸泡在戊二醛中,。然后將膠原經(jīng)去離子水,、50%乙醇、100%乙醇依次漂洗后進(jìn)行TEM觀(guān)察,。3.生物礦化形成仿生骨材料靜滴配置鈣磷礦化液將25mL鈣液(10mmol/L二水氯化鈣+150mmol/L氯化鈉+50mmol/L三羥甲基氨基甲烷+0.02%三氮化鈉)倒入燒杯中,，滴入聚丙烯(PAA)至濃度350μg/mL；滴加1mol/L的氯化氫,，調(diào)節(jié)酸堿度至7.4,，然后緩慢滴入25mL磷液(6mmol/L磷酸氫二鈉)，約16滴/min,。開(kāi)封正規(guī)鼠尾膠原廠(chǎng)家直銷(xiāo)膠原蛋白是一種蛋白質(zhì),，能幫助連接皮膚，骨頭和肌腱等身體組織,。

鼠尾膠原蛋白Ⅰ型使用方法及注意事項(xiàng)：三維膠原的制備鼠尾膠原蛋白型在濃度1mg/ml以上,，pH左右時(shí)可形成具有一定強(qiáng)度三維膠,建議成膠濃度1-2mg/ml。膠原蛋白溶解于0.006mol/L乙酸中,，在成膠過(guò)程中需要加入0.06體積的0.1mol/LNaOH來(lái)中和,。需要的溶液（均需要無(wú)菌、預(yù)冷）10mg/L酚紅用于pH指示）0.1mol/LNaOH,，0.1mol/L乙酸(一般不用),，雙蒸水200ul鼠尾膠原蛋白型(5mg/ml)加到置于冰浴的離心管中，加入690ulH2O12ul0.1mol/LNaOH12ul0.1mol/LNaOH加到膠原溶液中,，會(huì)由于NaOH不能迅速混勻而產(chǎn)生局部的膠原凝結(jié)）立即混勻,。再加入100ul10PBS10培養(yǎng)液，混勻后立即加到培養(yǎng)器皿中(混勻后pH左右,，如果PBS或培養(yǎng)液中沒(méi)有加酚紅,，初次使用時(shí)需要用pH試紙測(cè)試)。

細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中,，細(xì)胞需要貼附在培養(yǎng)皿表面（懸浮培養(yǎng)細(xì)胞除外）才能完成生長(zhǎng)過(guò)程,，而有一些細(xì)胞卻總是不太給力，自己完成不了貼壁過(guò)程或者貼壁困難,，這個(gè)時(shí)候鼠尾膠原蛋白就能承擔(dān)起讓細(xì)胞更容易貼壁的作用,。這一步也被稱(chēng)作涂層（coating），給培養(yǎng)皿涂上了一層膠原蛋白后,，細(xì)胞就能更好地貼附上去,，除了培養(yǎng)皿，一些需要使用海藻碳酸鈣微球培養(yǎng)得細(xì)胞,，同樣也可以用鼠尾膠原蛋白協(xié)助細(xì)胞貼壁生長(zhǎng),。耗子尾汁還能變得更加，一種被稱(chēng)作鼠尾膠原蛋白的“珍貴”液體就來(lái)自大鼠的尾巴，制作過(guò)程需要經(jīng)歷醋酸抽提鼠尾Ⅰ型膠原：選擇適當(dāng)?shù)墓切迯?fù)材料是治好骨缺損的中心環(huán)節(jié),。

鼠尾膠原蛋白Ⅰ型使用方法及注意事項(xiàng)：通過(guò)醋酸抽提,、氯化鈉沉淀、磷酸氫二鈉沉淀等步驟制備的,。鼠尾膠原蛋白可用于包被細(xì)胞培養(yǎng)器皿,，培養(yǎng)一些在普通細(xì)胞培養(yǎng)器皿中不易貼壁的細(xì)胞。也可用于制備三維膠,，模擬真實(shí)的生長(zhǎng)環(huán)境,，使細(xì)胞在三維環(huán)境中生長(zhǎng)。1,，在使用鼠膠原蛋白型包被的細(xì)胞培養(yǎng)皿中檢查到PC-12細(xì)胞的貼壁和生長(zhǎng),。1mg/ml濃度以上，pH左右時(shí)可形成具有一定強(qiáng)度的三維膠,，檢查到NIH-3T3細(xì)胞在三維膠內(nèi)正常生長(zhǎng),、PC-12細(xì)胞在三維膠表面正常生長(zhǎng)。使用方法：1,、細(xì)胞培養(yǎng)器皿的表面包被推薦濃度：1-5ug/cm0.012mg/ml,。按以下表格體積加到相應(yīng)的培養(yǎng)器皿中。它可以用于監(jiān)測(cè)小鼠血液成分的變化,，確糖尿病或者某些能夠改變小鼠的血糖等,。蕪湖鼠尾膠原廠(chǎng)家直銷(xiāo)

結(jié)果無(wú)鼠尾膠原時(shí)，前庭毛細(xì)胞懸浮于外液,，不宜封接。溫州珠海鼠尾膠原

鼠尾膠原實(shí)驗(yàn)應(yīng)用：鼠尾膠原在原代培養(yǎng)耳蝸血管紋邊緣細(xì)胞中的應(yīng)用,。目的：建立利用自制的鼠尾膠原培養(yǎng)大鼠耳蝸邊緣細(xì)胞的方法,。方法:制作鼠尾膠原,并觀(guān)察利用自制的鼠尾膠原所培養(yǎng)出大鼠耳蝸邊緣細(xì)胞的效果。結(jié)果：自制的鼠尾膠原能正常地培養(yǎng)出大鼠耳蝸邊緣細(xì)胞,，細(xì)胞角蛋白18表達(dá)陽(yáng)性,，免疫組織化學(xué)結(jié)果和掃描電鏡證實(shí)所培養(yǎng)的細(xì)胞具有典型的分泌上皮細(xì)胞特征。結(jié)論：成功建立了利用自制鼠尾膠原培養(yǎng)大鼠耳蝸邊緣細(xì)胞的方法,，并且制作簡(jiǎn)便,成本低廉,。溫州珠海鼠尾膠原