鼠尾膠原：含細(xì)胞三維膠原凝膠的制備（以配制1mg/mL三維膠1mL為例）準(zhǔn)備好懸浮于培養(yǎng)液的細(xì)胞,，并放置于冰浴中。將200μL本品加到12μL0.1mol/LNaOH中（如果反過來把12μL0.1mol/LNaOH加到膠原溶液中,，會(huì)由于NaOH不能迅速混勻而產(chǎn)生局部的膠原凝結(jié)）,，立即混勻,。再加入23μL10×PBS或10×培養(yǎng)液，混勻后立即加到培養(yǎng)器皿中（混勻后pH為7左右,，如果PBS或培養(yǎng)液中沒有加酚紅,，初次使用時(shí)需要測(cè)定pH值）。加入760μL的細(xì)胞懸浮液,，混勻后立即加到培養(yǎng)器皿中,。將培養(yǎng)器皿在室溫放置20min待膠凝固后，加入適當(dāng)體積的細(xì)胞培養(yǎng)液,，轉(zhuǎn)移到培養(yǎng)箱中培養(yǎng),。本品在室溫下pH中性時(shí)可迅速成膠，在操作過程中要盡量保持低溫,。保存條件4℃保存,，切勿凍存，有效期一年,。這種膠原蛋白在37℃的條件下會(huì)形成3股螺旋結(jié)構(gòu),，可以用來當(dāng)作細(xì)胞培養(yǎng)的基質(zhì)。鄭州正規(guī)鼠尾膠原廠家現(xiàn)貨

膠原的立體結(jié)構(gòu)與一般的球狀蛋白質(zhì)完全不同,，每一條亞基形成一股左手旋轉(zhuǎn)的螺旋,，其中每3個(gè)氨基酸殘基形成一圈螺旋。3條左手螺旋再扭在一起形成一個(gè)右手大螺旋,。這樣的螺旋稱為3股螺旋。小的甘氨酸殘基位于3股螺旋內(nèi)部,。3股螺旋式的棒狀膠原分子的大小約是3000×15埃,，這些棒狀分子首尾相連，并側(cè)向排列形成膠原微絲（其直徑可從50埃至數(shù)千埃）,。膠原分子在兩端及沿軸向每隔680埃的距離存在極性區(qū),，這些極性區(qū)能和重金屬離子結(jié)合，使膠原纖維在電子顯微鏡下形成間距為680埃的明暗相間的特征性的橫紋結(jié)構(gòu),。論鼠尾膠原能促進(jìn)毛細(xì)胞貼壁,，涂布鼠尾膠原有利于膜片鉗實(shí)驗(yàn)的長時(shí)程記錄，并且制作簡便,，成本低廉,。長沙正規(guī)鼠尾膠原進(jìn)貨價(jià)不斷攪拌至溶液中白色的絮狀物不再析出。

鼠尾膠原蛋白Ⅰ型使用說明：不含細(xì)胞的三維膠原的制備（以配制1毫升,，1mg/ml三維膠為例）：將200ul鼠尾膠原蛋白I型(5mg/ml)加到置于冰浴的離心管中,，加入690ulH2O。然后加到12ul0.1mol/LNaOH中（如果反過來把12ul0.1mol/LNaOH加到膠原溶液中,，會(huì)由于NaOH不能迅速混勻而產(chǎn)生局部的膠原凝結(jié)）,，立即混勻,。再加入100ul10×PBS或10×培養(yǎng)液，混勻后立即加到培養(yǎng)器皿中(混勻后pH為7左右,，如果PBS或培養(yǎng)液中沒有加酚紅,，初次使用時(shí)需要用pH試紙測(cè)試)。將培養(yǎng)器皿在室溫(25度左右)下放置20分鐘待膠凝固后,，轉(zhuǎn)移到培養(yǎng)箱內(nèi),。如果配制中使用的是10×PBS，使用前需要加入適當(dāng)體積的細(xì)胞培養(yǎng)液預(yù)平衡,。

以鼠尾膠原為支架的類似物的建立：探尋建立類似物的培養(yǎng)方法,。方法：原代培養(yǎng)人皮膚成纖維細(xì)胞，制備鼠尾膠原,，將鼠尾膠原溶液,、濃縮培養(yǎng)基、NaOH溶液和以血清重懸的成纖維細(xì)胞溶液在適當(dāng)?shù)谋壤禄旌虾笮纬赡z構(gòu)建類似物,。結(jié)果：形成的類似物中成纖維細(xì)胞生長狀態(tài)良好,，并且組織塊具有一定彈性和抗拉伸能力。結(jié)論：①利用鼠尾膠原可以構(gòu)建類似物,，該模型是進(jìn)行皮膚部位型培養(yǎng)和制作復(fù)合皮的關(guān)鍵與基礎(chǔ),；②成纖維細(xì)胞膠原凝膠復(fù)合物有著良好的生物學(xué)特性，它是研究成纖維細(xì)胞與細(xì)胞外基質(zhì)之間以及細(xì)胞之間相互作用的良好模型,。膠原蛋白（Collagen）是結(jié)締組織和內(nèi)臟部位外基質(zhì)的主要成分,。

鼠尾膠原備用膠凝程序：1）在冰上放置以下物品：膠原蛋白I、無菌10×PBS,、無菌蒸餾水,、無菌1MNaOH。2）確定膠原蛋白I待使用溶液所需的較終濃度的體積,。3）在冰上放置無菌管以收存膠原蛋白I,。4）在無菌條件下執(zhí)行以下步驟。4.1加入10×PBS（終體積/10）mL4.2計(jì)算要使用的膠原蛋白I的體積（不要添加到管中直到步驟4.6為止）終體積x終膠原蛋白I濃度（mg/mL）,。4.3向10×PBS溶液中加入（要加入的膠原體積×0.023）mL的無菌冰冷1MNaOH,。4.4向4.3溶液中加入下述體積的無菌冰冷蒸餾水：添加蒸餾水體積=V（終）—V（膠原蛋白）—V(10×PBS）—V（1MNaOH）4.5混合管中的物質(zhì)并放入冰中。4.6加入膠原蛋白I并計(jì)算體積,，混勻,，冰上備用。5）膠原蛋白I溶液可立即使用或在冰上放置2-3小時(shí),。6）使用時(shí),，無菌條件下將溶液加入到細(xì)胞培養(yǎng)裝置中37°C凝膠30min。論鼠尾膠原能促進(jìn)毛細(xì)胞貼壁,，涂布鼠尾膠原有利于膜片鉗實(shí)驗(yàn)的長時(shí)程記錄,，并且制作簡便,，成本低廉。將無組織纖維,、脂肪和多糖殘留的鼠尾腱,，真空冷凍干燥備用。廈門鄭州鼠尾膠原

鼠尾膠原醋酸溶解：不建議用過濾的方法無菌化,。鄭州正規(guī)鼠尾膠原廠家現(xiàn)貨

鼠尾膠原蛋白的提取方法：1.將黏稠的膠體溶液進(jìn)行高速冷凍離心處理,，收集上清液；在冰水浴中,，用的3?6mol/L的NaCl溶液緩慢加入上清液中,，不斷攪拌至溶液中白色的絮狀物不再析出，4°C沉淀10小時(shí),，去除上清液,，絮狀溶液高速冷凍離心處理，收集沉淀2.用0.03?0.06mol/L的檸檬酸溶液溶解沉淀物,，成透明澄清黏稠溶液,；在冰水浴中，調(diào)節(jié)pH=6.5,，用的3?6mol/L的NaCl溶液緩慢加入上清液中,，不斷攪拌至溶液中白色的絮狀物不再析出，4°C沉淀10小時(shí),，去除上清液,，去除上清液，絮狀溶液高速冷凍離心處理,，收集沉淀,。鄭州正規(guī)鼠尾膠原廠家現(xiàn)貨