外泌體是一種存在于細(xì)胞外的多囊泡體,,可通過細(xì)胞內(nèi)吞泡膜向內(nèi)凹陷形成多泡內(nèi)涵體,,內(nèi)涵體與細(xì)胞膜融合后釋放其中的小囊泡。外泌體的直徑在40-110nm之間,,其中包含RNA,、蛋白質(zhì)、microRNA,、DN 段等多種物質(zhì),,存在于血液、唾液,、尿液,、腦脊液和母乳等多種體液中。外泌體從發(fā)現(xiàn)至今已有30多年的歷史,,雖然較初被認(rèn)為可能是細(xì)胞的“垃圾”,,所以才被排出來,但是近年來研究表明外泌體具有功能活性并可進(jìn)行細(xì)胞間信息傳遞,。如今,,研究已經(jīng)發(fā)現(xiàn)外泌體在抗原提呈細(xì)胞中呈遞抗原程中、一些病癥細(xì)胞發(fā)生的發(fā)展,、神經(jīng)細(xì)胞信號轉(zhuǎn)導(dǎo)過程中都發(fā)揮著重要作用,。外泌體提取:超離法是較常用的外泌體純化手段,,采用低速離心,、高速離心交替進(jìn)行,。蕪湖外泌體提取試劑進(jìn)貨價
外泌體可通過流式、WB(檢測指標(biāo)有CD9,CD63,CD81),、電鏡觀察,、NTA粒徑追蹤等手段檢測,普遍應(yīng)用于藥物載體,、疾病診斷marker,、精細(xì)醫(yī)療、一些病癥治病等方面研究,。由于外泌體直徑小,,樣本含量低,提取十分困難,。已有的外泌體分離方式有密度梯度離心,、超濾離心法、免疫磁珠抗體捕獲,、商用試劑盒等,。但到目前為止,仍沒有一種提取方法能同時保證外泌體的含量,、純度以及生物活性,。外泌體是細(xì)胞間進(jìn)行物質(zhì)運(yùn)輸和信息交流的重要工具,可以通過調(diào)節(jié)免疫功能促進(jìn)一些病癥的增殖,,血管新生和一些病癥轉(zhuǎn)移,。與細(xì)菌傳染,幫助細(xì)菌逃避免疫關(guān)系很大,,并與心血管疾病,,老年癡呆等疾病具有密切關(guān)系。貴陽正規(guī)外泌體提取試劑價格外泌體提?。撼x法因操作簡單,,獲得的囊泡數(shù)量較多而廣受歡迎。
專利申請利用分離培養(yǎng)人尿液來源細(xì)胞并收集培養(yǎng)基來進(jìn)行體外培養(yǎng),,直接把外泌體從尿液中沉降下來,,無須分離培養(yǎng)人尿液來源細(xì)胞并收集培養(yǎng)基。人尿液來源細(xì)胞的外泌體的獲取方法,,是首先分離培養(yǎng)人尿液來源細(xì)胞并收集培養(yǎng)基,,將人尿液來源細(xì)胞的培養(yǎng)基通過0.22微米濾膜過濾,以去除大的細(xì)胞殘片以及其它雜質(zhì),;然后離心除去細(xì)胞器,,留取上清;再使用可截留100KD分子量的膜,通過離心截留上清中的外泌體,,截留完成后,,使用PBS對膜進(jìn)行洗脫即得到外泌體濃縮液。
外泌體與神經(jīng)退行性疾?。和饷隗w可能促進(jìn)或限制大腦中未折疊和異常折疊的蛋白質(zhì)的聚集,。AD病人腦脊液外泌體中均可檢測到Tau和Aβ蛋白。類似的現(xiàn)象也在PD和ALS疾病中發(fā)現(xiàn),。PD病人腦脊液外泌體可檢測到α-synuclein,,ALS病人外泌體中也可以檢測到SOD1或TDP-43。外泌體與疾病診斷(應(yīng)用潛能):外泌體生成機(jī)制表明,,通過分析外泌體的組分,,可以幫助識別其來源的細(xì)胞類型。這一特性已被應(yīng)用于開發(fā)心血管疾病,,神經(jīng)系統(tǒng)疾病和一些病癥的分子診斷方法,也在肝腎肺相關(guān)疾病中進(jìn)行研發(fā)測試,。將沉淀物用PBS緩沖液進(jìn)行懸浮,,使外泌體懸浮于液體上層。外泌體提?。簶悠分写蠓肿硬荒苓M(jìn)入凝膠孔,,只能沿多孔凝膠粒子之間的空隙通過色譜柱,被流動相洗脫出來,。
外泌體的提取,、分離方法:微流控技術(shù)。微流控是利用微納米級尺寸的管道來處理和操控流體所涉及的一門技術(shù),,其在外泌體分離方面的應(yīng)用受到越來越多學(xué)者的關(guān)注,。Jie等[16]課題組開發(fā)了一種三維納米結(jié)構(gòu)微流控芯片,微柱陣列通過化學(xué)沉積將交叉多壁碳納米管功能化,,然后其就可以識別特定的分子(CD63)并利用獨(dú)特拓?fù)浼{米材料高效的捕獲外泌體,。Wunsch等[17]利用硅工藝生產(chǎn)納米級確定性側(cè)向位移(Nano-DLD)芯片,得到了均勻的間隙尺寸,,該芯片可以靈敏地將20~110nm的顆粒分離,。該研究證明了外泌體基于大小的位移,從而揭示了利用芯片分選和量化納米級生物膠體的潛力,。外泌體提?。旱退匐x心去除細(xì)胞和凋亡碎片。重慶正規(guī)外泌體提取試劑廠家
超濾離心法簡單高效,,且不影響外泌體的生物活性,,是提取細(xì)胞外泌體的一種新方法。蕪湖外泌體提取試劑進(jìn)貨價
外泌體的提取、分離方法:免疫親和層析法,。免疫親和層析法是利用生物體內(nèi)存在的抗原,、抗體之間高度特異性的親和力進(jìn)行分離的方法,主要用于生物大分子的分離,、純化,。將其應(yīng)用于外泌體的分離主要是借助外泌體表面的特異性抗體,如TSG101或四跨膜蛋白,。此方法的原理是利用抗原抗體的特異性結(jié)合,,只有囊泡表面有特異性的抗體才可以被識別,這使得提取的外泌體純度高,,但是產(chǎn)量低,。Zarovni等分別用超速離心、密度梯度離心和免疫層析法,,從血漿和細(xì)胞上清中提取外泌體蛋白,,結(jié)果表明,免疫親和層析法得到的外泌體表面存在多種標(biāo)記蛋白(Alix,、CD9,、CD63),同時,,ELISA和PCR結(jié)果也證明了該方法的可行性,。蕪湖外泌體提取試劑進(jìn)貨價