外泌體鑒定：外泌體分離之后,，需要經(jīng)過一系列鑒定才能確定分離的是外泌體。鑒定方法從物理特征到表面分子標(biāo)志物,，多角度進行鑒定,。l透射電鏡鑒定法：簡稱TEM，適合外泌體雙層囊膜超微結(jié)構(gòu)觀察,，即通常為茶托型或一側(cè)凹陷的半球形,。l納米顆粒追蹤分析法：簡稱NTA，該方法能保證外泌體原始狀態(tài),、檢測速度快,，檢測后能提供外泌體粒徑和濃度信息。lWesternblot分子標(biāo)志物檢測：外泌體標(biāo)志蛋白包括四跨膜蛋白家族,，如CD9,、CD63和CD81；細胞質(zhì)蛋白,，如肌動蛋白（Actin）和鈣磷脂結(jié)合蛋白（Annexins）,；使用可截留100KD分子量的膜，通過離心截留上清中的外泌體,，截留完成后目前人們多采用超速離心,、免疫磁珠、超濾,、沉淀或試劑盒等方法實現(xiàn)外泌體的提取分離,。武漢正規(guī)外泌體提取試劑哪家便宜

外泌體的提取方法學(xué)規(guī)范、統(tǒng)一定量及鑒定等,。關(guān)于外泌體的提取有超速離心,、試劑盒、超濾法,、蔗糖密度梯度離心等,，然而各種方法均有其利弊。超速離心法是目前外泌體相關(guān)文章中的主流方法,，由于離心步驟繁瑣,，費事費力，而且步驟多導(dǎo)致實驗中容易污染,，且損耗量大,，使得較終回收的外泌體不穩(wěn)定。而且對于抽提細胞上清來說,，更是極為不請便,，試想用提取300ml的上清需要6個50ml離心管，無論是過濾還是后續(xù)的每一步的離心去沉淀，都具有操作極其不便的缺點,，總之非常麻煩,。而超濾法存在外泌體會堵塞膜孔，造成濃縮效率低,，濃縮管重復(fù)利用差,，甚至堵塞在膜孔的外泌體還可能會粘連成團，造成損失及較后的數(shù)據(jù)有誤差,，對于后續(xù)實驗也有影響開封正規(guī)外泌體提取試劑重復(fù)離心操作還有可能對囊泡造成損害,，從而降低其質(zhì)量。

外泌體(Exosome)是由細胞分泌而來的微小囊泡,，直徑約為30-200nm,，密度在1.13-1.21g/ml，具有杯狀形態(tài),、雙層膜結(jié)構(gòu),，天然存在于血液、尿液,、唾液,、母乳和細胞培養(yǎng)基等生物體液中。包括瘤細胞在內(nèi)幾乎所有類型的細胞（免疫細胞,、神經(jīng)細胞,、干細胞)，都可以產(chǎn)生并釋放exosome,。Exosome內(nèi)含有與細胞來源相關(guān)的蛋白質(zhì)rRNA和microRNA,，Exosome可通過細胞膜受體直接受體細胞，也可運輸?shù)鞍踪|(zhì),、mRNA,、miRNA、lncRNA,、circRNA,，甚至細胞器進入受體細胞，參與細胞間通訊,。Exosome在免疫應(yīng)答,、炎癥反應(yīng)、血管生成,、凋亡,、凝血和廢物處理等生理過程發(fā)揮關(guān)鍵作用，不同細胞來源的exosome所含有的RNA和蛋白成分不盡相同,，可作為多種疾病的早期診斷標(biāo)記物,，也能作為靶向藥物的載體進行疾病

外泌體是一種存在于細胞外的多囊泡體，可通過細胞內(nèi)吞泡膜向內(nèi)凹陷形成多泡內(nèi)涵體,，內(nèi)涵體與細胞膜融合后釋放其中的小囊泡,。外泌體的直徑在40-110nm之間，其中包含RNA,、蛋白質(zhì),、microRNA等多種物質(zhì)，存在于血液,、唾液,、尿液、腦脊液和母乳等多種體液中,。外泌體從發(fā)現(xiàn)至今已有30多年的歷史,，雖然較初被認為可能是細胞的“垃圾”，所以才被排出來,，但是近年來研究表明外泌體具有功能活性并可進行細胞間信息傳遞,。如今，研究已經(jīng)發(fā)現(xiàn)外泌體在抗原提呈細胞中呈遞抗原程中,、一些病癥細胞發(fā)生的發(fā)展,、神經(jīng)細胞信號轉(zhuǎn)導(dǎo)過程中都發(fā)揮著重要作用。利用化合物沉淀將法外泌體沉淀出來,。外泌體目前被視為特異性分泌的膜泡,，參與細胞間通訊。

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外泌體的提取,、分離方法：梯度密度離心法,。研究發(fā)現(xiàn)，外泌體的密度在1.1~1.19kg·L-1之間,，因此,，可以采用密度梯度離心法來分離外泌體。該方法是將超速離心結(jié)合蔗糖密度梯度或蔗糖墊結(jié)合,，原理是先除去非囊泡物質(zhì),，再通過梯度密度濃縮提取外泌體，該方法可以得到相對較為純凈的外泌體,。傳統(tǒng)的梯度密度方法通常需要離心16h,，但是2012年，研究者[15]使用了62~90h才分離出某些確切囊泡,，因此,，該方法可能不足以沉淀所有的外泌體。如果離心時間不充足,，污染物質(zhì)可能和外泌體保持在相同的密度層,，特別是這個密度范圍又比較寬。武漢正規(guī)外泌體提取試劑哪家便宜