鼠尾膠原蛋白Ⅰ型使用方法及注意事項：將培養(yǎng)器皿在室溫(25 度左右)下 放置 20 分鐘待膠凝固后,，轉(zhuǎn)移到培養(yǎng)箱內(nèi)。如果配制中使用的是 10PBS,， 使用前需要加入適當體積的細胞培養(yǎng)液預(yù)平衡,。 B．含細胞的三維膠原的制備（以配制 200ul鼠尾膠原蛋白(5mg/ml)加到（如果反過來把12ul 0.1mol/L NaOH 加到膠原溶液中,，會由于 NaOH 不能迅速混勻而產(chǎn)生局部的膠原凝結(jié)），立即 混勻,。再加入 23ul 10PBS 10培養(yǎng)液,，混勻(混勻后pH 左右，如果 PBS 或培養(yǎng)液中沒有加酚紅,，初次使用時需要用 pH 試紙測試),。加入 760ul 的細胞懸浮液，混勻后立即加到培養(yǎng)器皿中,。將培養(yǎng)器皿在室溫下放 20分鐘待膠凝固后,，加入適當體積的細胞培養(yǎng)液，轉(zhuǎn)移到培養(yǎng)箱中培養(yǎng),。 注意事項 型在室溫下pH 中性時可迅速成膠,，在操作過程中要 盡量保持低溫。鼠尾肌腱膠原蛋白I（rat tail tendon collagen type I）根據(jù)Birkedal-Hansen方法,，經(jīng)過醋酸（HAc）抽提,、氯化鈉沉淀、磷酸氫二鈉沉淀等步驟制備所得。免疫組織化學(xué)結(jié)果和掃描電鏡證實所培養(yǎng)的細胞具有典型的分泌上皮細胞特征,。寧波鼠尾膠原產(chǎn)品介紹

膠原蛋白的功效與作用：1,、可以作為一種補鈣食品。膠原蛋白的特征氨基酸羥基脯氨酸是血漿中運輸鈣到骨細胞的運載工具,，骨細胞中的骨膠原是羥基磷灰石的黏合劑,，它與羥摹磷灰石共同構(gòu)成了骨骼的主體。因此,，只要攝入足夠的膠原蛋白,，就能保證正常機體鈣質(zhì)的攝入量，膠原蛋白可成制成補鈣的保健食品,。2,、可以為特殊人群使用。婦科疾病的根源來自于內(nèi)分泌失調(diào),，膠原蛋白能夠改善婦科疾病的困擾,，而更年期的婦女更需要膠原蛋白供給身體所需，使得更年期婦女能夠更輕松面對各種不適,。南京鼠尾膠原單價細胞培養(yǎng)器皿的表面包被以包被濃度為2μg/cm2為例,。

三維膠原的制備：鼠尾膠原蛋白I型在濃度1mg/ml以上，pH 7左右時可形成具有一定強度三維膠,建議成膠濃度1-2mg/ml,。膠原蛋白溶解于0.006mol/L 乙酸中,，在成膠過程中需要加入0.06X 體積的 0.1mol/L NaOH 來中和。需要的溶液 ( 均需要 無菌 ,、 預(yù)冷 ):10xPBS( 可含10 mg/L的酚紅用于 pH 指示 )或 10x 培養(yǎng)液 , 0.1mol/L NaOH, 0.1mol/L 乙酸(一般不用), 雙蒸水A．不含細胞的三維膠原的制備（以配制1毫升,，1mg/ml三維膠為例）：將200ul鼠尾膠原蛋白I型(5mg/ml)加到置于冰浴的離心管中，加入690ul H2O,。然后加到12ul 0.1mol/L NaOH中（如果反過來把12ul 0.1mol/L NaOH加到膠原溶液中,，會由于NaOH不能迅速混勻而產(chǎn)生局部的膠原凝結(jié)），立即混勻,。

鼠尾膠原蛋白Ⅰ型使用說明：含細胞的三維膠原的制備（以配制1毫升,，1mg/ml三維膠為例）：準備好懸浮于培養(yǎng)液的細胞，并放置于冰浴中,。將200ul鼠尾膠原蛋白I型 (5mg/ml)加到12ul 0.1mol/L NaOH中（如果反過來把12ul 0.1mol/L NaOH加到膠原溶液中,，會由于NaOH不能迅速混勻而產(chǎn)生局部的膠原凝結(jié)），立即混勻,。再加入23ul 10×PBS或10×培養(yǎng)液，混勻(混勻后pH為7左右,，如果PBS或培養(yǎng)液中沒有加酚紅,，初次使用時需要用pH試紙測試)。加入760ul的細胞懸浮液，混勻后立即加到培養(yǎng)器皿中,。將培養(yǎng)器皿在室溫下放置20分鐘待膠凝固后,，加入適當體積的細胞培養(yǎng)液，轉(zhuǎn)移到培養(yǎng)箱中培養(yǎng),。論鼠尾膠原能促進毛細胞貼壁,，涂布鼠尾膠原有利于膜片鉗實驗的長時程記錄，并且制作簡便,，成本低廉,。將無菌5cm左右的紗布海綿貼在150mm培養(yǎng)皿的蓋子上來制備氨蒸氣室。

鼠尾Ⅰ型膠原：選擇適當?shù)墓切迯?fù)材料是治好骨缺損的中心環(huán)節(jié),。目前,，臨床上常用的有人工骨移植、自體骨移植和同種異體骨移植,。其中,，人工骨材料多為磷酸三鈣、半水硫酸鈣等含有鈣和磷的無機礦物材料[1-2],，由于不含自體骨組織中的有機大分子Ⅰ型膠原蛋白,，其臨床療效遠遠低于自體骨組織。但是,，自體骨移植和同種異體骨移植均來源于人類自身骨組織,，數(shù)量有限，難以滿足臨床需要,。因此,，研發(fā)與人類自體骨組織化學(xué)成分和分子結(jié)構(gòu)相近的仿生骨材料，成為全世界骨組織工程學(xué)者孜孜以求的目標,。由于天然骨組織是Ⅰ型膠原蛋白和羥基磷灰石鈣生物礦化的產(chǎn)物,，在分子結(jié)構(gòu)上，羥基磷灰石鈣晶體是以Ⅰ型膠原纖維為模板,，呈片狀鑲嵌在膠原纖維分子間隙,，沿著膠原纖維的長軸縱向礦化生長[3]。本研究仿生天然骨組織的分子結(jié)構(gòu),，酸解提取鼠尾肌腱的Ⅰ型膠原蛋白,，重構(gòu)形成Ⅰ型膠原纖維，然后將Ⅰ型膠原纖維放置在礦化液中模擬人體內(nèi)骨生物礦化,，通過透射電子顯微鏡(TEM)和電子衍射觀察羥基磷灰石鈣晶體在膠原纖維內(nèi)部的骨生物礦化,。鼠尾膠原醋酸溶解：在2-8度中放置過夜。長沙正規(guī)鼠尾膠原哪家好

使用前需要加入適當體積的細胞培養(yǎng)液預(yù)平衡,。寧波鼠尾膠原產(chǎn)品介紹

鼠尾膠原,，10mg包裝,，配制方法如下：1.配0.1M的乙酸溶液100ml。即取575ul冰乙酸加超純水至100ml,，容量瓶配制比較準確,。2.用吸管吸取10ml剛配好的0.1M乙酸溶液（不要用*加，吸十次不如加一次z準確）,，加入盛膠原的瓶中,，輕輕顛倒，不要震蕩,，蛋白 容易起泡,。幾分鐘即可，蛋白質(zhì)非常好溶解,。3.將膠原溶液移入事先壓好的玻璃瓶中,，比青霉素瓶大點的就行。用*在瓶底加1ml氯仿,，打到一檔就行,，避免加入氣泡。然后4度過夜除菌,。4.第二天將上層膠原溶液分裝進EP管中,。用封口膜封口，4度保存,，勿冷凍,。寧波鼠尾膠原產(chǎn)品介紹

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