鼠尾Ⅰ型膠原：選擇適當(dāng)?shù)墓切迯?fù)材料是治好骨缺損的中心環(huán)節(jié),。目前,，臨床上常用的有人工骨移植、自體骨移植和同種異體骨移植,。其中,，人工骨材料多為磷酸三鈣、半水硫酸鈣等含有鈣和磷的無(wú)機(jī)礦物材料[1-2],，由于不含自體骨組織中的有機(jī)大分子Ⅰ型膠原蛋白,，其臨床療效遠(yuǎn)遠(yuǎn)低于自體骨組織。但是,，自體骨移植和同種異體骨移植均來(lái)源于人類自身骨組織,，數(shù)量有限，難以滿足臨床需要,。因此,，研發(fā)與人類自體骨組織化學(xué)成分和分子結(jié)構(gòu)相近的仿生骨材料，成為全世界骨組織工程學(xué)者孜孜以求的目標(biāo),。由于天然骨組織是Ⅰ型膠原蛋白和羥基磷灰石鈣生物礦化的產(chǎn)物,，在分子結(jié)構(gòu)上，羥基磷灰石鈣晶體是以Ⅰ型膠原纖維為模板,，呈片狀鑲嵌在膠原纖維分子間隙,，沿著膠原纖維的長(zhǎng)軸縱向礦化生長(zhǎng)。本研究仿生天然骨組織的分子結(jié)構(gòu),，酸解提取鼠尾肌腱的Ⅰ型膠原蛋白，重構(gòu)形成Ⅰ型膠原纖維,，然后將Ⅰ型膠原纖維放置在礦化液中模擬人體內(nèi)骨生物礦化,，通過(guò)透射電子顯微鏡(TEM)和電子衍射觀察羥基磷灰石鈣晶體在膠原纖維內(nèi)部的骨生物礦化。論鼠尾膠原能促進(jìn)毛細(xì)胞貼壁,，涂布鼠尾膠原有利于膜片鉗實(shí)驗(yàn)的長(zhǎng)時(shí)程記錄,，并且制作簡(jiǎn)便，成本低廉,。鼠尾膠原蛋白用于培養(yǎng)容器等實(shí)驗(yàn)室設(shè)備的內(nèi)部涂層,。上海濟(jì)南鼠尾膠原

鼠尾膠原蛋白的提取方法：1.一種生物醫(yī)用鼠尾膠原蛋白的提取方法，其特征在于，包括以下步驟: (1)將無(wú)組織纖維,、脂肪和多糖殘留的鼠尾腱,，真空冷凍干燥備用； (2)凍干鼠尾腱經(jīng)低溫凍干粉碎至200?400目,； (3)在冰水浴中將粉碎的鼠尾腱在醋酸溶液中溶脹,，鼠尾腱與醋酸的固液比為I克:10mL?I克:120mL，期間不斷攪拌,，防止凍結(jié)成塊,，得到膠原溶脹液； (4)稱取胃蛋白酶加入到膠原溶脹液中,，鼠尾腱與蛋白酶質(zhì)量比為50: I?100: 1,，在4°C，48?74小時(shí)酶解,，期間間歇性攪拌,。北京鼠尾膠原廠家供應(yīng)膠原蛋白就像骨骼中的一張充滿小洞的網(wǎng)，它會(huì)牢牢地留住就要流失的鈣質(zhì),。

鼠尾膠原蛋白Ⅰ型使用說(shuō)明：不含細(xì)胞的三維膠原的制備（以配制1毫升,，1mg/ml三維膠為例）：將200ul鼠尾膠原蛋白I型(5mg/ml)加到置于冰浴的離心管中，加入 690ul H2O,。然后加到12ul 0.1mol/L NaOH中（如果反過(guò)來(lái)把12ul 0.1mol/L NaOH加到膠原溶液中,，會(huì)由于NaOH不能迅速混勻而產(chǎn)生局部的膠原凝結(jié)），立即混勻,。再加入100ul 10×PBS或10×培養(yǎng)液,，混勻后立即加到培養(yǎng)器皿中(混勻后pH為7左右，如果PBS或培養(yǎng)液中沒(méi)有加酚紅,，初次使用時(shí)需要用pH試紙測(cè)試),。將培養(yǎng)器皿在室溫(25度左右)下放置20分鐘待膠凝固后，轉(zhuǎn)移到培養(yǎng)箱內(nèi),。如果配制中使用的是10×PBS,，使用前需要加入適當(dāng)體積的細(xì)胞培養(yǎng)液預(yù)平衡。

膠原蛋白（Collagen）是結(jié)締組織和內(nèi)臟部位外基質(zhì)的主要成分,，但在皮膚,、肌腱、骨骼中分布*為普遍,。膠原蛋白在結(jié)構(gòu)和遺傳學(xué)上被分為不同類型,，I型膠原蛋白（Collagen, Type I）結(jié)構(gòu)上是由2個(gè)α1鏈和1個(gè)α2鏈組成的異源多聚體，在37℃中性條件下可形成3股螺旋結(jié)構(gòu),，被普遍用于多種細(xì)胞的培養(yǎng)基質(zhì),，如肝細(xì)胞,、纖維細(xì)胞、脊髓神經(jīng)節(jié),、雪旺氏細(xì)胞等,。另外，I型膠原蛋白在細(xì)胞生長(zhǎng),、分化,、遷移和組織態(tài)的發(fā)生等方面也具有重要應(yīng)用。注意事項(xiàng)：1） 為了您的安全和健康,，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作,。2） 整個(gè)操作請(qǐng)于冰上進(jìn)行，因室溫下鼠尾膠原I可迅速成膠,。3） 整個(gè)操作請(qǐng)?jiān)跓o(wú)菌環(huán)境下無(wú)菌操作,，避免污染以影響細(xì)胞生長(zhǎng)。鼠尾膠原醋酸溶解：稀釋一定數(shù)量的膠原溶液,。

鼠尾膠原制備詳細(xì)步驟： 1,、取大鼠尾巴洗凈，75%酒精浸泡 5 分鐘,； 2.將尾巴剪開,、去掉皮毛，并剪成小段,，抽出銀色的尾鍵 3,、將尾腱剪斷置于平皿中，PBS 浸泡,； 4,、將所有的尾鍵放于 Tris-HCl 中，4 度過(guò)夜,。 0.05mol/L Tris-bas 的 Tris-HCl 的配制方法,。 稱量 6gTris 置于 1L 燒杯中，加入約 800ml 去離子水,，充分?jǐn)嚢枞芙?，濃鹽酸調(diào)節(jié) PH，高壓滅菌,。 5,、吸去 Tris-HCl，將尾腱稱重（0.5-1 克）,； 6、將尾腱置于平皿內(nèi)剪碎,，轉(zhuǎn)移至三角燒瓶中,； 7,、按每克尾腱 50ml 的比例，加入 0.1%醋酸溶液,； 8,、搖晃，使尾腱分散于醋酸溶液中,，4℃放置一星期,； 9、離心,，4 度 4000 轉(zhuǎn)/分,，30 分鐘； 10,、吸取上清,，過(guò) 300 目濾器。 11,、每 600ml 上述粗提液中加入 100ml 0.14 mol/LNaOH,，8000 轉(zhuǎn) 5min 離心，棄上清,，留絮狀沉淀,。 12、將絮狀沉淀物置于三蒸水中,，用 0.1mol/L（1000:6）醋酸溶解沉淀物,。成功建立了利用自制鼠尾膠原培養(yǎng)大鼠耳蝸邊緣細(xì)胞的方法，并且制作簡(jiǎn)便,成本低廉,。寧波南昌鼠尾膠原

鼠尾膠原醋酸溶解：不建議用過(guò)濾的方法無(wú)菌化,。上海濟(jì)南鼠尾膠原

鼠尾膠原蛋白：膠原蛋白（Collagen）是結(jié)締組織和內(nèi)臟部位外基質(zhì)的主要成分，但在皮膚,、肌腱,、骨骼中分布較為普遍。膠原蛋白在結(jié)構(gòu)和遺傳學(xué)上被分為不同類型,，I型膠原蛋白（Collagen, Type I）結(jié)構(gòu)上是由2個(gè)α1鏈和1個(gè)α2鏈組成的異源多聚體,，在37℃中性條件下可形成3股螺旋結(jié)構(gòu)，被普遍用于多種細(xì)胞的培養(yǎng)基質(zhì),，如肝細(xì)胞,、纖維細(xì)胞、脊髓神經(jīng)節(jié),、雪旺氏細(xì)胞等,。另外，I型膠原蛋白在細(xì)胞生長(zhǎng),、分化,、遷移和組織形態(tài)的發(fā)生等方面也具有重要應(yīng)用,。膠原蛋白I（rat tail tendon collagen type I）根據(jù)Birkedal-Hansen方法，經(jīng)過(guò)醋酸（HAc）抽提,、氯化鈉沉淀,、磷酸氫二鈉沉淀等步驟制備所得，可用于制備三維膠,，模擬細(xì)胞真實(shí)的生長(zhǎng)環(huán)境,；也可以用于包被組織培養(yǎng)皿表面，提高細(xì)胞表面粘附性,，比如培養(yǎng)角質(zhì)形成細(xì)胞,、肝細(xì)胞等原代細(xì)胞。上海濟(jì)南鼠尾膠原

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