鼠尾Ⅰ型膠原：選擇適當?shù)墓切迯?fù)材料是治好骨缺損的中心環(huán)節(jié),。目前，臨床上常用的有人工骨移植,、自體骨移植和同種異體骨移植,。其中，人工骨材料多為磷酸三鈣,、半水硫酸鈣等含有鈣和磷的無機礦物材料[1-2],，由于不含自體骨組織中的有機大分子Ⅰ型膠原蛋白,，其臨床療效遠遠低于自體骨組織。但是,，自體骨移植和同種異體骨移植均來源于人類自身骨組織,，數(shù)量有限，難以滿足臨床需要,。因此,，研發(fā)與人類自體骨組織化學(xué)成分和分子結(jié)構(gòu)相近的仿生骨材料，成為全世界骨組織工程學(xué)者孜孜以求的目標,。由于天然骨組織是Ⅰ型膠原蛋白和羥基磷灰石鈣生物礦化的產(chǎn)物,，在分子結(jié)構(gòu)上，羥基磷灰石鈣晶體是以Ⅰ型膠原纖維為模板,，呈片狀鑲嵌在膠原纖維分子間隙,，沿著膠原纖維的長軸縱向礦化生長。本研究仿生天然骨組織的分子結(jié)構(gòu),，酸解提取鼠尾肌腱的Ⅰ型膠原蛋白,，重構(gòu)形成Ⅰ型膠原纖維，然后將Ⅰ型膠原纖維放置在礦化液中模擬人體內(nèi)骨生物礦化,，通過透射電子顯微鏡(TEM)和電子衍射觀察羥基磷灰石鈣晶體在膠原纖維內(nèi)部的骨生物礦化,。論鼠尾膠原能促進毛細胞貼壁，涂布鼠尾膠原有利于膜片鉗實驗的長時程記錄,，并且制作簡便,，成本低廉。鼠尾膠原蛋白用于培養(yǎng)容器等實驗室設(shè)備的內(nèi)部涂層,。上海濟南鼠尾膠原

鼠尾膠原蛋白的提取方法：1.一種生物醫(yī)用鼠尾膠原蛋白的提取方法,，其特征在于，包括以下步驟: (1)將無組織纖維,、脂肪和多糖殘留的鼠尾腱,，真空冷凍干燥備用； (2)凍干鼠尾腱經(jīng)低溫凍干粉碎至200?400目,； (3)在冰水浴中將粉碎的鼠尾腱在醋酸溶液中溶脹,，鼠尾腱與醋酸的固液比為I克:10mL?I克:120mL，期間不斷攪拌,，防止凍結(jié)成塊,，得到膠原溶脹液； (4)稱取胃蛋白酶加入到膠原溶脹液中,，鼠尾腱與蛋白酶質(zhì)量比為50: I?100: 1,，在4°C，48?74小時酶解，期間間歇性攪拌,。北京鼠尾膠原廠家供應(yīng)膠原蛋白就像骨骼中的一張充滿小洞的網(wǎng),，它會牢牢地留住就要流失的鈣質(zhì)。

鼠尾膠原蛋白Ⅰ型使用說明：不含細胞的三維膠原的制備（以配制1毫升,，1mg/ml三維膠為例）：將200ul鼠尾膠原蛋白I型(5mg/ml)加到置于冰浴的離心管中,，加入 690ul H2O。然后加到12ul 0.1mol/L NaOH中（如果反過來把12ul 0.1mol/L NaOH加到膠原溶液中,，會由于NaOH不能迅速混勻而產(chǎn)生局部的膠原凝結(jié)）,，立即混勻。再加入100ul 10×PBS或10×培養(yǎng)液,，混勻后立即加到培養(yǎng)器皿中(混勻后pH為7左右,，如果PBS或培養(yǎng)液中沒有加酚紅，初次使用時需要用pH試紙測試),。將培養(yǎng)器皿在室溫(25度左右)下放置20分鐘待膠凝固后,，轉(zhuǎn)移到培養(yǎng)箱內(nèi)。如果配制中使用的是10×PBS,，使用前需要加入適當體積的細胞培養(yǎng)液預(yù)平衡,。

膠原蛋白（Collagen）是結(jié)締組織和內(nèi)臟部位外基質(zhì)的主要成分，但在皮膚,、肌腱,、骨骼中分布*為普遍。膠原蛋白在結(jié)構(gòu)和遺傳學(xué)上被分為不同類型,，I型膠原蛋白（Collagen, Type I）結(jié)構(gòu)上是由2個α1鏈和1個α2鏈組成的異源多聚體,，在37℃中性條件下可形成3股螺旋結(jié)構(gòu),，被普遍用于多種細胞的培養(yǎng)基質(zhì),，如肝細胞、纖維細胞,、脊髓神經(jīng)節(jié),、雪旺氏細胞等。另外,，I型膠原蛋白在細胞生長,、分化、遷移和組織態(tài)的發(fā)生等方面也具有重要應(yīng)用,。注意事項：1） 為了您的安全和健康,，請穿實驗服并戴一次性手套操作。2） 整個操作請于冰上進行,，因室溫下鼠尾膠原I可迅速成膠,。3） 整個操作請在無菌環(huán)境下無菌操作，避免污染以影響細胞生長。鼠尾膠原醋酸溶解：稀釋一定數(shù)量的膠原溶液,。

鼠尾膠原制備詳細步驟： 1,、取大鼠尾巴洗凈，75%酒精浸泡 5 分鐘,； 2.將尾巴剪開,、去掉皮毛，并剪成小段,，抽出銀色的尾鍵 3,、將尾腱剪斷置于平皿中，PBS 浸泡,； 4,、將所有的尾鍵放于 Tris-HCl 中，4 度過夜,。 0.05mol/L Tris-bas 的 Tris-HCl 的配制方法,。 稱量 6gTris 置于 1L 燒杯中，加入約 800ml 去離子水,，充分攪拌溶解,，濃鹽酸調(diào)節(jié) PH，高壓滅菌,。 5,、吸去 Tris-HCl，將尾腱稱重（0.5-1 克）,； 6,、將尾腱置于平皿內(nèi)剪碎，轉(zhuǎn)移至三角燒瓶中,； 7,、按每克尾腱 50ml 的比例，加入 0.1%醋酸溶液,； 8,、搖晃，使尾腱分散于醋酸溶液中,，4℃放置一星期,； 9、離心,，4 度 4000 轉(zhuǎn)/分,，30 分鐘； 10,、吸取上清,，過 300 目濾器。 11、每 600ml 上述粗提液中加入 100ml 0.14 mol/LNaOH,，8000 轉(zhuǎn) 5min 離心,，棄上清，留絮狀沉淀,。 12,、將絮狀沉淀物置于三蒸水中，用 0.1mol/L（1000:6）醋酸溶解沉淀物,。成功建立了利用自制鼠尾膠原培養(yǎng)大鼠耳蝸邊緣細胞的方法,，并且制作簡便,成本低廉。寧波南昌鼠尾膠原

鼠尾膠原醋酸溶解：不建議用過濾的方法無菌化,。上海濟南鼠尾膠原

鼠尾膠原蛋白：膠原蛋白（Collagen）是結(jié)締組織和內(nèi)臟部位外基質(zhì)的主要成分,，但在皮膚、肌腱,、骨骼中分布較為普遍,。膠原蛋白在結(jié)構(gòu)和遺傳學(xué)上被分為不同類型，I型膠原蛋白（Collagen, Type I）結(jié)構(gòu)上是由2個α1鏈和1個α2鏈組成的異源多聚體,，在37℃中性條件下可形成3股螺旋結(jié)構(gòu),，被普遍用于多種細胞的培養(yǎng)基質(zhì)，如肝細胞,、纖維細胞,、脊髓神經(jīng)節(jié)、雪旺氏細胞等,。另外,，I型膠原蛋白在細胞生長、分化,、遷移和組織形態(tài)的發(fā)生等方面也具有重要應(yīng)用,。膠原蛋白I（rat tail tendon collagen type I）根據(jù)Birkedal-Hansen方法，經(jīng)過醋酸（HAc）抽提,、氯化鈉沉淀,、磷酸氫二鈉沉淀等步驟制備所得,，可用于制備三維膠,，模擬細胞真實的生長環(huán)境；也可以用于包被組織培養(yǎng)皿表面,，提高細胞表面粘附性,，比如培養(yǎng)角質(zhì)形成細胞、肝細胞等原代細胞,。上海濟南鼠尾膠原

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