研究人員通過用不同激光波長并行化激光掃描(wavelengthmultiplexing),,增加了相同時間內(nèi)可以成像的體積,,并同時保持較高的時間和空間分辨率。通過引入兩種波長不同的鈣信號熒光探針,,研究人員將神經(jīng)元群體的活動標(biāo)記為兩個不同顏色,,并同時用兩個不同波長的激光激發(fā)探針,實現(xiàn)了兩個顏色的并行化數(shù)據(jù)記錄,。為了實現(xiàn)三維空間成像,研究人員還分別在兩個激光光路上配置了快速變焦系統(tǒng),,分別為電可調(diào)節(jié)透鏡(electricaltunablelens)和空間光調(diào)制器(spatiallightmodulator),。由此,可以同時以10赫茲的速度記錄500微米500微米的10個平面,,覆蓋縱深達(dá)600微米,,涵蓋了從腦皮層第2層到第5層的結(jié)構(gòu),體積內(nèi)記錄到的神經(jīng)元可以達(dá)到2000個以上,。這種雙光子顯微鏡的視場是普通顯微鏡的10倍,。美國investigator雙光子顯微鏡多少錢
由于具有較高輸出功率的光源可以提高成像速度,在我們的實驗中,,時間分辨率主要是受OPO輸出可見光激光功率的限制,。盡管在單點掃描系統(tǒng)中,v2PE激發(fā)會使得空間分辨率提高,,但多聚焦v2PE顯微鏡具有與1PE多聚焦顯微鏡近乎相同的橫向分辨率,,這主要是多聚焦成像和單點掃描技術(shù)之間的差異造成的。由于v2PE的激發(fā)體積小于1PE,,引入圖像掃描技術(shù)可以進(jìn)一步提高空間分辨率,,這種技術(shù)需要通過在陣列前引入額外的微透鏡陣列來實現(xiàn)。除此之外,由于可見光區(qū)域的共振效應(yīng),,可能會產(chǎn)生光漂白,,因而為了延長觀察時間,系統(tǒng)還需要對激發(fā)強(qiáng)度和曝光時間做進(jìn)一步優(yōu)化,。國外激光雙光子顯微鏡分辨率是多少優(yōu)勢來源于其雙光子光源的非線性光學(xué)效應(yīng),。
雙光子吸收理論早在1931年就由諾獎得主提出,30年后因為有了激光才得到實驗驗證,,但是到WinfriedDenk發(fā)明雙光子顯微鏡又用了將近30年,。要理解雙光子的技術(shù)挑戰(zhàn)和飛秒激光發(fā)揮的重要作用,首先要了解其中的非線性過程,。雙光子吸收相當(dāng)于和頻產(chǎn)生非線性過程,,這要求極高的電場強(qiáng)度,而電場取決于聚焦光斑大小和激光脈寬,。聚焦光斑越小,,脈寬越窄,雙光子吸收效率越高,。對于衍射極限顯微鏡,,聚焦在樣品上的光斑大小只和物鏡NA和激光波長有關(guān),所以關(guān)鍵變量只剩下激光脈寬,?;谝陨戏治觯軌蛞愿咧仡l(100MHz)輸出超短脈沖(100fs量級)的飛秒激光器成了雙光子顯微鏡的標(biāo)準(zhǔn)激發(fā)光源,。這也再次說明雙光子顯微鏡的優(yōu)勢:只有焦平面處才能形成雙光子吸收,,而焦平面之外由于光強(qiáng)低無法被激發(fā),所以雙光子成像更清晰,。WinfriedDenk初使用的光源是染料飛秒激光器(100fs脈寬,、630nm可見光波長)。雖然染料激光器對于實驗室演示尚可,,但是使用很不方便所以遠(yuǎn)未實現(xiàn)商用,。很快雙光子顯微鏡的標(biāo)配光源就變成了飛秒鈦寶石激光器。除了固態(tài)光源優(yōu)勢,,鈦寶石激光器還具有較寬的近紅外波長調(diào)諧范圍,,而近紅外相比可見光穿透更深,對生物樣品損傷更小,。
首先我們來簡單介紹一下激光掃描共聚焦和雙光子這兩種當(dāng)紅的顯微成像技術(shù),。激光掃描共聚焦顯微技術(shù),是熒光顯微成像的一種,,用于激發(fā)樣品的熒光信號并對其放大成像,。在激光掃描共聚焦顯微鏡中,,樣品焦平面上每一時刻只有一個點被激發(fā)光照射,縱然焦平面外也有激發(fā)光照射,,但通過探測器前的(pinhole),,有焦平面上的熒光信號能被探測器接收。也就是說,,每個時刻,,只有焦平面上一個點的信號被探測。通過點掃描的方式,,一個個點的信號就可以組合出終的圖像,。雙光子顯微鏡(包括多光子顯微鏡)同樣采用點掃描的方式得到圖像。不同的是,,其采用的激發(fā)光波長較長,,只有當(dāng)兩個(或更多)激發(fā)光光子幾乎同時轟擊熒光探針的時候才可能激發(fā)出熒光信號。所以只有在光子密度特別大的焦點,,出才會激發(fā)出熒光,。也就是說,雙光子顯微鏡中,,同樣每個時刻只有焦平面上一個點的信號被探測,,并且連焦平面外的熒光信號也不會有。雙光子顯微鏡有哪些分類呢,?
TOPTICAFemtoFiberultra920超快光纖激光器是一種易于操作且無需維護(hù)的激光系統(tǒng),。其輸出波長為920nm,非常適合常規(guī)熒光基團(tuán)(如GFP,,eGFP,,Eosin,GCaMP,,CFP,,Calcein或者Venus)的雙光子激發(fā),。能給熒光基團(tuán)提供比較高的峰值功率,,常用于神經(jīng)科學(xué)和其他與激光有關(guān)的生物光子學(xué)學(xué)科。而且其獨特設(shè)計(制造簡單且經(jīng)濟(jì)高效的光源)對雙光子熒光顯微鏡發(fā)展的革新具有潛在的可能,。在雙光子顯微鏡中,,峰值功率就是亮度!如果您希望獲得比較好的圖像亮度,,那么你就需要短脈沖,,高功率,較重要的是需要干凈的時間脈沖形狀,。FemtoFiberultra920具有足夠高的輸出功率,,較短的脈沖和獨特的Clean-Pulse技術(shù),以及具有相對比較高的峰值功率,使得其在雙光子顯微鏡中可以實現(xiàn)****的亮度,,而不會對樣品造成不必要的加熱,。FemtoFiberultra920交鑰匙,完全集成的色散補(bǔ)償(可確保樣品處的脈沖較短),,內(nèi)置的功率控制,,操作直觀以及其堅固而緊湊的設(shè)計,使該系統(tǒng)具有極為友好的用戶體驗,,是非線性顯微鏡應(yīng)用的較好解決方案,。例如熒光蛋白的雙光子激發(fā)和基于SHG的對比機(jī)制。雙光子顯微鏡觀察到的現(xiàn)象證明了鈣離子的增加依賴于肌體觸發(fā)的鈉離子作用電勢,。美國investigator雙光子顯微鏡多少錢
雙光子顯微鏡是結(jié)合了雙光子激發(fā)技術(shù)和激光掃描共聚顯微鏡,。美國investigator雙光子顯微鏡多少錢
中國服務(wù)型正面臨百年未有之大變局,行業(yè)行家認(rèn)為,,中美貿(mào)易戰(zhàn)不會有終點,,中美關(guān)系時好時壞將成為常態(tài),儀器儀表行業(yè)無法排除大局勢的影響,,且不要把問題聚焦在關(guān)稅上,。中國經(jīng)濟(jì)的高速發(fā)展得益于WTO框架下的全球化分工;現(xiàn)在中國制造的競爭力在于工業(yè)門類齊全、供應(yīng)鏈完整,、供應(yīng)鏈的高度專業(yè)和細(xì)分,。隨著網(wǎng)絡(luò)消費的不斷遞增,而互聯(lián)網(wǎng)的商業(yè)價值不斷被挖掘出來,,呈爆發(fā)式增長,,傳統(tǒng)的營銷模式將逐步被取代。有限責(zé)任公司(自然)企業(yè)要抓住機(jī)遇,,融入到互聯(lián)網(wǎng)發(fā)展的行業(yè)中,,為行業(yè)的發(fā)展提高競爭力。隨著手機(jī)移動網(wǎng)絡(luò)的消費潛力不斷隱現(xiàn),,消費者利用手機(jī)消費的頻率和份額逐年遞增,。移動互聯(lián)網(wǎng)所隱藏的商業(yè)價值被更多地挖掘出來之后,各種傳統(tǒng)行業(yè)(包括nVista,,nVoke,,3D bioplotte,invivo行業(yè))的移動網(wǎng)上平臺相繼誕生,。伴隨移動互聯(lián)網(wǎng)的爆發(fā)式增長,,如今,它已經(jīng)漸漸取代電子商務(wù)成為了整個互聯(lián)網(wǎng)產(chǎn)業(yè)增速極快的領(lǐng)域,,而移動終端的入口也隨即成為了傳統(tǒng)行業(yè)的必爭之地,。nVista,,nVoke,3D bioplotte,,invivo行業(yè)進(jìn)軍移動互聯(lián)網(wǎng)實現(xiàn)線上發(fā)展勢在必行,。美國investigator雙光子顯微鏡多少錢
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