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美國雙電極膜片鉗報(bào)價(jià)

來源: 發(fā)布時(shí)間:2023-01-18

1976年德國馬普生物物理化學(xué)研究所Neher和Sakmann在青蛙肌細(xì)胞上記錄記錄到AChjihuo的單通道離子電流1980年Sigworth等用負(fù)壓吸引,,得到10-100GΩ的高阻封接(Giga-sea1),,降低了記錄時(shí)的噪聲1981年Hamill和Neher等引進(jìn)了膜片游離技術(shù)和全細(xì)胞記錄技術(shù)1983年10月,《Single-ChannelRecording》一書問世,,奠定了膜片鉗技術(shù)的里程碑,。膜片鉗技術(shù)原理膜片鉗技術(shù)是用玻璃微電極接觸細(xì)胞,形成吉?dú)W姆(GΩ)阻抗,,使得與電極前列開口處相接的細(xì)胞膜的膜片與周圍在電學(xué)上絕緣,,在此基礎(chǔ)上固定電位,對(duì)此膜片上的離子通道的離子電流(pA級(jí))進(jìn)行監(jiān)測記錄的方法,。全自動(dòng)膜片鉗技術(shù)采用的標(biāo)本必須是懸浮細(xì)胞,,像腦片這類標(biāo)本無法采用。美國雙電極膜片鉗報(bào)價(jià)

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膜片鉗技術(shù)本質(zhì)上也屬于電壓鉗范疇,,兩者的區(qū)別關(guān)鍵在于:①膜電位固定的方法不同,;②電位固定的細(xì)胞膜面積不同,進(jìn)而所研究的離子通道數(shù)目不同,。電壓鉗技術(shù)主要是通過保持細(xì)胞跨膜電位不變,,并迅速控制其數(shù)值,以觀察在不同膜電位條件下膜電流情況,。因此只能用來研究整個(gè)細(xì)胞膜或一大塊細(xì)胞膜上所有離子通道活動(dòng),。目前電壓鉗主要用于巨大細(xì)胞的全性能電流的研究,特別在分子克隆的卵母細(xì)胞表達(dá)電流的鑒定中發(fā)揮著其他技術(shù)不能替代的作用,。該技術(shù)的主要缺陷是必須在細(xì)胞內(nèi)插入兩個(gè)電極,,對(duì)細(xì)胞損傷很大,在小細(xì)胞如元,,就難以實(shí)現(xiàn),,又因細(xì)胞形態(tài)復(fù)雜,很難保持細(xì)胞膜各處生物特性的一致,。進(jìn)口可升級(jí)膜片鉗系統(tǒng)膜片鉗記錄技術(shù)與較早的單電極電壓鉗位相比進(jìn)步了很多,,尤其在單離子通道鉗位記錄方面。

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膜片鉗技術(shù)是1976年由諾貝爾獎(jiǎng)得主Neher和Sakmann發(fā)展起來的一種記錄胞膜離子通道電生理活動(dòng)的技術(shù),。該技術(shù)的應(yīng)用將細(xì)胞水平和分子水平的生理學(xué)研究聯(lián)系在一起,,已成為現(xiàn)代細(xì)胞電生理研究的常規(guī)方法,廣泛應(yīng)用于生物,、生理,、病理、藥理,、神經(jīng)科學(xué),、植物和微生物等領(lǐng)域并取得了豐碩的研究成果,。膜片鉗技術(shù)點(diǎn)燃了細(xì)胞和分子水平的生理學(xué)研究的**之火,與基因克隆技術(shù)(genecloning)并駕齊驅(qū),給生命科學(xué)研究帶來了巨大的前進(jìn)動(dòng)力。鈣成像技術(shù)被廣泛應(yīng)用于實(shí)時(shí)監(jiān)測神經(jīng)元,、心肌以及多種細(xì)胞胞內(nèi)鈣離子的變化,,從而檢測神經(jīng)元、心肌的活動(dòng)情況,。這些技術(shù)是人們觀測神經(jīng)以及多種細(xì)胞活動(dòng)為直接的手段,,現(xiàn)已發(fā)展為生命科學(xué)研究的熱點(diǎn),也是國家自然科學(xué)基金等鼓勵(lì)申報(bào)的重要領(lǐng)域,。

離子通道的近代觀念源于Hodgkin,、Huxley、Katz等人在20世紀(jì)30—50年代的開創(chuàng)性研究,。在1902年,,Bernstein創(chuàng)造性地將Nernst的理論應(yīng)用到生物膜上,提出了“膜學(xué)說”,。他認(rèn)為在靜息狀態(tài)下,,細(xì)胞膜只對(duì)鉀離子具有通透性;而當(dāng)細(xì)胞興奮的瞬間,,膜的破裂使其喪失了選擇通透性,,所有的離子都可以自由通過。Cole等人在1939年進(jìn)行的高頻交變電流測量實(shí)驗(yàn)表明,,當(dāng)動(dòng)作電位被觸發(fā)時(shí),,雖然細(xì)胞的膜電導(dǎo)大為增加,但膜電容卻只略有下降,,這個(gè)事實(shí)表明膜學(xué)說所宣稱的膜破裂的觀點(diǎn)是不可靠的,。1949年Cole在玻璃微電極技術(shù)的基礎(chǔ)上發(fā)明了電壓鉗位(voltage clamp technique)技術(shù)在細(xì)胞膜的電興奮過程中,脂質(zhì)層膜電容的反應(yīng)是被動(dòng)的,,其電流電壓曲線是線性的。

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過去認(rèn)為,,膜片鉗只能在培養(yǎng)細(xì)胞或酶解的細(xì)胞上進(jìn)行,,這樣得到的細(xì)胞膜表面比較光滑,才能夠形成高阻封接,,但缺點(diǎn)是組織的正常三維結(jié)構(gòu)被破壞,,并且對(duì)神經(jīng)中樞內(nèi)突觸特有的傳遞機(jī)能的研究無法展開。于是,,一些學(xué)者建立了組織切片膜片鉗技術(shù)(Slicepatch),,就能在哺乳動(dòng)物腦片制備上做全細(xì)胞記錄。1992年,,在腦片膜片鉗技術(shù)上,,美國Ferster實(shí)驗(yàn)室報(bào)道在在體貓的視皮層用膜片鉗全細(xì)胞記錄研究了視刺激誘發(fā)的興奮性和***性突觸后電位相互影響及節(jié)律性膜電位的變化規(guī)律,。1993年,德國的Dodt和Sakmann合作,,利用紅外電視顯微鏡監(jiān)視,,使得膜片鉗記錄不但能夠在神經(jīng)元胞體及其樹突上進(jìn)行,而且可同時(shí)在這兩個(gè)不同的部位作膜片鉗記錄,。在青蛙肌細(xì)胞上用雙電極鉗制膜電位的同時(shí),,記錄到ACh啟動(dòng)的單通道離子電流,從而產(chǎn)生了膜片鉗技術(shù),。日本雙電極膜片鉗單細(xì)胞

脂質(zhì)層電導(dǎo)很低,,由于雙分子層的結(jié)構(gòu)特點(diǎn),形成了細(xì)胞的膜電容,,通道蛋白開閉狀況主要決定了膜電導(dǎo)的數(shù)值,。美國雙電極膜片鉗報(bào)價(jià)

膜片鉗的基本原理則是利用負(fù)反饋電子線路,將微電極前列所吸附的一個(gè)至幾個(gè)平方微米的細(xì)胞膜的電位固定在一定水平上,,對(duì)通過通道的微小離子電流作動(dòng)態(tài)或靜態(tài)觀察,,從而研究其功能。膜片鉗技術(shù)實(shí)現(xiàn)膜電流固定的關(guān)鍵步驟是在玻璃微電極前列邊緣與細(xì)胞膜之間形成高阻密封,,其阻抗數(shù)值可達(dá)10~100GΩ(此密封電阻是指微電極內(nèi)與細(xì)胞外液之間的電阻),。由于此阻值如此之高,故基本上可看成絕緣,,其上之電流可看成零,,形成高阻密封的力主要有氫健、范德華力,、鹽鍵等,。此密封不僅電學(xué)上近乎絕緣,在機(jī)械上也是較牢固的,。又由于玻璃微電極前列管徑很小,,其下膜面積只約1μm2,在這么小的面積上離子通道數(shù)量很少,,一般只有一個(gè)或幾個(gè)通道,,經(jīng)這一個(gè)或幾個(gè)通道流出的離子數(shù)量相對(duì)于整個(gè)細(xì)胞來講很少,可以忽略,,也就是說電極下的離子電流對(duì)整個(gè)細(xì)胞的靜息電位的影響可以忽略,,那么,只要保持電極內(nèi)電位不變,,則電極下的一小片細(xì)胞膜兩側(cè)的電位差就不變,,從而實(shí)現(xiàn)電位固定。美國雙電極膜片鉗報(bào)價(jià)

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