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來源: 發(fā)布時(shí)間:2023-01-30

1976年德國馬普生物物理化學(xué)研究所Neher和Sakmann在青蛙肌細(xì)胞上用雙電極鉗制膜電位的同時(shí),,記錄到ACh啟動(dòng)的單通道離子電流,從而產(chǎn)生了膜片鉗技術(shù),。1980年Sigworth等在記錄電極內(nèi)施加5-50cmH2O的負(fù)壓吸引,得到10-100GΩ的高阻封接(Giga-seal),,明顯降低了記錄時(shí)的噪聲實(shí)現(xiàn)了單根電極既鉗制膜片電位又記錄單通道電流的突破,。1981年Hamill和Neher等對(duì)該技術(shù)進(jìn)行了改進(jìn),引進(jìn)了膜片游離技術(shù)和全細(xì)胞記錄技術(shù),,從而使該技術(shù)更趨完善,,具有1pA的電流靈敏度、1μm的空間分辨率和10μs的時(shí)間分辨率,。1983年10月,,《Single-ChannelRecording》一書問世,奠定了膜片鉗技術(shù)的里程碑,。Sakmann和Neher也因其杰出的工作和突出貢獻(xiàn),,榮獲1991年諾貝爾醫(yī)學(xué)和生理學(xué)獎(jiǎng)。玻璃微電極的應(yīng)用使的電生理研究進(jìn)行了重命性的變化,。美國細(xì)胞膜片鉗腦片

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膜片鉗技術(shù)發(fā)展至今,,已經(jīng)成為現(xiàn)代細(xì)胞電生理的常規(guī)方法,它不僅可以作為基礎(chǔ)生物醫(yī)學(xué)研究的工具,,而且直接或間接為臨床醫(yī)學(xué)研究服務(wù),。目前膜片鉗技術(shù)廣泛應(yīng)用于神經(jīng)(腦)科學(xué)、心血管科學(xué),、藥理學(xué),、細(xì)胞生物學(xué)、病理生理學(xué),、中醫(yī)藥學(xué),、植物細(xì)胞生理學(xué)、運(yùn)動(dòng)生理等多學(xué)科領(lǐng)域研究,。隨著全自動(dòng)膜片鉗技術(shù)(Automaticpatchclamptechnology)的出現(xiàn),,膜片鉗技術(shù)因其具有的自動(dòng)化,、高通量特性,,在藥物研發(fā),、藥物篩選中顯示了強(qiáng)勁的生命力。日本細(xì)胞膜片鉗產(chǎn)品介紹細(xì)胞是動(dòng)物和人體的基本組成單元,,細(xì)胞與細(xì)胞內(nèi)的通信,是依靠其膜上的離子通道進(jìn)行的,。

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在大多數(shù)膜片鉗實(shí)驗(yàn),要求所有實(shí)驗(yàn)儀器及設(shè)備均具有良好的機(jī)械穩(wěn)定性,,以使微電極與細(xì)胞膜之間的相對(duì)運(yùn)動(dòng)盡可能小,。防震工作臺(tái)放置倒置顯微鏡和與之固定連接的微操縱器,其他設(shè)備置于臺(tái)外,。屏蔽罩由銅絲網(wǎng)制成,,接地以防止周圍環(huán)境的雜散電場(chǎng)對(duì)膜片鉗放大器的探頭電路的干擾。儀器設(shè)備架要靠近工作臺(tái),,便于測(cè)量儀器與光學(xué)儀器配接,。倒置顯微鏡是膜片鉗實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)的主要光學(xué)部件,它不僅具有較好的視覺效果,,便于將玻璃電極與細(xì)胞的頂部接觸,,而且是借助移動(dòng)物鏡來實(shí)現(xiàn)聚焦,具有較好的機(jī)械穩(wěn)定性,。視頻監(jiān)視器主要是用來監(jiān)視實(shí)驗(yàn)過程中的操作,,特別是能將封接參數(shù)(如封接阻抗)與細(xì)胞的形態(tài)對(duì)應(yīng),以實(shí)現(xiàn)良好的封接,。

膜片鉗技術(shù)實(shí)現(xiàn)了小片膜的孤立和高阻封接的形成,,由于高阻封接使背景噪聲水平降低,相對(duì)地增寬了記錄頻帶范圍,,提高了分辨率,。另外,它還具有良好的機(jī)械穩(wěn)定性和化學(xué)絕緣性,。而小片膜的孤立使對(duì)單個(gè)離子通道進(jìn)行研究成為可能,。單通道電流1.典型的單通道電流呈一種振幅相同而持續(xù)時(shí)間不等的脈沖樣變化。他有兩個(gè)電導(dǎo)水平,,即O和1,,分別對(duì)應(yīng)通道的關(guān)閉和開效狀態(tài)。2.有的矩形脈沖簇狀發(fā)放時(shí),,通道電流不在同一水平,,可以明顯觀察到不同數(shù)目離子通道所形成的電流臺(tái)階,從而可推斷出被測(cè)膜片的通道數(shù)目,。3.有的通道可記錄到圓滑型和方波形兩種形式,。4.有些通道開放活動(dòng)是持續(xù)開放,中間被閃動(dòng)樣的關(guān)閉所中斷,形成burst開放,。有些通道開放活動(dòng)是簇狀開放與短期平靜交替出現(xiàn),,形成簇狀發(fā)放串(Cluster)不同的全自動(dòng)膜片鉗技術(shù)所采用的原理也不完全相同。

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膜片鉗技術(shù)的創(chuàng)立取代了電壓鉗技術(shù),,是細(xì)胞電生理研究的一個(gè)飛躍,,使得離子通道的研究,從宏觀深入到微觀,,使昔日的“肉湯生理學(xué)(brothphysiology)”與“閃電生理學(xué)(lightningphysiology)”在分子水平上結(jié)合起來,,使人們對(duì)膜通道的認(rèn)識(shí)耳目一新。當(dāng)前,,生理學(xué),、生物物理學(xué)、生物化學(xué),、分子生物學(xué)和藥理學(xué)等多種學(xué)科正在把膜片鉗技術(shù)和膜通道蛋白重組技術(shù),、同位素示蹤技術(shù)和光譜技術(shù)等非電生理技術(shù)結(jié)合起來,協(xié)同對(duì)離子通道進(jìn)行較全的研究,。不少實(shí)驗(yàn)室已經(jīng)將基因工程與膜片鉗技術(shù)結(jié)合起來,,把通道蛋白有目的地重組于人工膜中進(jìn)行研究。設(shè)想將合成的通道蛋白分子接種入機(jī)體以替換有缺陷和異常的通道的功能而達(dá)到的目的?,F(xiàn)代膜片鉗技術(shù)是在電壓鉗技術(shù)的基礎(chǔ)上發(fā)展起來的,。日本細(xì)胞膜片鉗參數(shù)

通過研究離子通道的離子流, 從而了解離子運(yùn)輸,、信號(hào)傳遞等信息,。美國細(xì)胞膜片鉗腦片

細(xì)胞是動(dòng)物和人體的基本組成單元,細(xì)胞與細(xì)胞內(nèi)的通信,是依靠其膜上的離子通道進(jìn)行的,,離子和離子通道是細(xì)胞興奮的基礎(chǔ),,亦即產(chǎn)生生物電信號(hào)的基礎(chǔ),生物電信號(hào)通常用電學(xué)或電子學(xué)方法進(jìn)行測(cè)量,。由此形成了一門細(xì)胞學(xué)科———電生理學(xué)(electrophysiology),,即是用電生理的方法來記錄和分析細(xì)胞產(chǎn)生電的大小和規(guī)律的科學(xué)。早期的研究多使用雙電極電壓鉗技術(shù)作細(xì)胞內(nèi)電活動(dòng)的記錄?,F(xiàn)代膜片鉗技術(shù)是在電壓鉗技術(shù)的基礎(chǔ)上發(fā)展起來的,。美國細(xì)胞膜片鉗腦片

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