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德國細胞膜片鉗蛋白質(zhì)分子水平

來源: 發(fā)布時間:2023-02-28

1976年德國馬普生物物理化學研究所Neher和Sakmann在青蛙肌細胞上用雙電極鉗制膜電位的同時,記錄到ACh的單通道離子電流,,從而產(chǎn)生了膜片鉗技術,。1980年Sigworth等在記錄電極內(nèi)施加5-50cmH2O的負壓吸引,得到10-100GΩ的高阻封接(Giga-seal),,明顯降低了記錄時的噪聲實現(xiàn)了單根電極既鉗制膜片電位又記錄單通道電流的突破,。1981年Hamill和Neher等對該技術進行了改進,引進了膜片游離技術和全細胞記錄技術,,從而使該技術更趨完善,,具有1pA的電流靈敏度、1μm的空間分辨率和10μs的時間分辨率,。1983年10月,,《Single-ChannelRecording》一書問世,奠定了膜片鉗技術的里程碑,。Sakmann和Neher也因其杰出的工作和突出貢獻,,榮獲1991年諾貝爾醫(yī)學和生理學獎。膜片鉗技術實現(xiàn)了小片膜的孤立和高阻封接的形成,。德國細胞膜片鉗蛋白質(zhì)分子水平

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全細胞膜片鉗記錄(whole-cellpatch-clamprecording)是應用*早,,也是*廣的鉗位技術,它相當于連續(xù)的單電極電壓鉗位記錄,,也就是說全細胞記錄類似于傳統(tǒng)的細胞內(nèi)記錄,,但它具有更大的優(yōu)越性,,如高分辨率,、低噪聲、極好的穩(wěn)定性以及能控制細胞內(nèi)的成分等,。全細胞記錄技采測定的是一個細胞內(nèi)全部**通道的電流,,記錄過程中電極的溶液取代了原細胞質(zhì)的成分。雖然膜片鉗記錄技術與*初的單電極電壓鉗位相比進步了很多,,尤其在單離子通道鉗位記錄方面,,細胞或腦片的組織選擇及實驗溶液的制備仍然是很重要的步驟。德國細胞膜片鉗市場價在細胞膜的電學模型中,,膜電容和膜電導構(gòu)成了一個并聯(lián)回路,。

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ePatch的設計的一些亮點還包括:可以在軟件中伴隨數(shù)據(jù)進行實驗記錄,,你不用再專門拿一個實驗記錄本了,也不用再擔心本本上記錄的內(nèi)容找不到對應的數(shù)據(jù)了,,系統(tǒng)會把他們一一對應起來,。電壓電流刺激模式的編輯更為傻瓜,眾多的模塊,,直接拖拽就可以,,還伴隨著示例圖,讓你對你編輯的程序一目了然,。實時的全細胞參數(shù)估算,,包括封接電阻,膜電容,,膜電阻等重要參數(shù)強大的在線分析功能,,包括電壓鉗模式下的I/V graph,event detection,,F(xiàn)FT,,以及電流鉗模式下的AP threshold detection,AP frequency,,AP slope等數(shù)據(jù)可保存成多種格式,,你要是個程序達人,可以支持使用Matlab進行數(shù)據(jù)分析,,如果沒有這樣的經(jīng)驗也沒有問題,,數(shù)據(jù)可以保存成.abf用的Clampfit直接分析。

離子通道的近代觀念源于Hodgkin,、Huxley,、Katz等人在20世紀30—50年代的開創(chuàng)性研究。在1902年,,Bernstein創(chuàng)造性地將Nernst的理論應用到生物膜上,,提出了“膜學說”。他認為在靜息狀態(tài)下,,細胞膜只對鉀離子具有通透性,;而當細胞興奮的瞬間,膜的破裂使其喪失了選擇通透性,,所有的離子都可以自由通過,。Cole等人在1939年進行的高頻交變電流測量實驗表明,當動作電位被觸發(fā)時,,雖然細胞的膜電導大為增加,,但膜電容卻只略有下降,這個事實表明膜學說所宣稱的膜破裂的觀點是不可靠的,。1949年Cole在玻璃微電極技術的基礎上發(fā)明了電壓鉗位(voltage clamp technique)技術膜片鉗技術是用玻璃微電極吸管把只含1-3個離子通道,、面積為幾個平方微米的細胞膜通過負壓吸引封接起來,。

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一、記錄設備首先,,盡可能完善膜片鉗記錄設備是實驗前的重要步驟,,如用模型細胞測定電子設備、安裝并測試應用軟件,、調(diào)節(jié)光學顯微鏡,、檢驗防震工作臺等。二,、微電極的制備膜片鉗電極是用外徑為1-2mm的毛細玻璃管拉制成的,。標準的毛細玻璃管(外經(jīng)1.5mm,管壁厚0.3mm)適合于制作單通道記錄的微電極,,而全細胞記錄則應選管壁較?。?.16mm)的毛細玻璃管,這樣可以使電極阻抗較低,。三,、封接(Sealing)技術封接(seal)是膜片鉗記錄的關鍵步驟之一。封接不好噪聲太大必然影響細胞膜電信號的記錄,,一般要求封接阻抗至少20GΩ才可進行常規(guī)記錄,。為了形成良好封接必須保持清潔的溶液、良好的視野以及適當?shù)碾姌O鍍膜,。為了獲得較好的"千兆歐封接",,細胞表面必須裸露以便微電極前列能接觸細胞,細胞的大小也是成功記錄的個因素,,一般選擇10-20um的細胞比較理想,。膜片鉗技術的建立,對生物學科學特別是神經(jīng)科學是一資有重大意義的變革,。德國細胞膜片鉗市場價

現(xiàn)代膜片鉗技術是在電壓鉗技術的基礎上發(fā)展起來的,。德國細胞膜片鉗蛋白質(zhì)分子水平

膜片鉗技術本質(zhì)上也屬于電壓鉗范疇,兩者的區(qū)別關鍵在于:①膜電位固定的方法不同,;②電位固定的細胞膜面積不同,,進而所研究的離子通道數(shù)目不同。電壓鉗技術主要是通過保持細胞跨膜電位不變,,并迅速控制其數(shù)值,,以觀察在不同膜電位條件下膜電流情況,。因此只能用來研究整個細胞膜或一大塊細胞膜上所有離子通道活動,。目前電壓鉗主要用于巨大細胞的全性能電流的研究,特別在分子克隆的卵母細胞表達電流的鑒定中發(fā)揮著其他技術不能替代的作用,。該技術的主要缺陷是必須在細胞內(nèi)插入兩個電極,,對細胞損傷很大,,在小細胞如元,就難以實現(xiàn),,又因細胞形態(tài)復雜,,很難保持細胞膜各處生物特性的一致。德國細胞膜片鉗蛋白質(zhì)分子水平

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