把膜電位鉗位電壓調(diào)到-80--100mV,再用鉗位放大器的控制鍵把全細胞瞬態(tài)充電電流調(diào)定至零位(EPC-10的控制鍵稱為C-slow和C-series;Axopatch200標(biāo)為全細胞電容和系列電阻)。寫下細胞的電容值Cc和未補整的系列電阻值Rs,,用于消除全細胞瞬態(tài)電流,計算鉗位的固定時間(即RsCc),,然啟根據(jù)歐姆定律從測定脈沖電流的振幅算出細胞的電阻RC。緩慢調(diào)節(jié)Rs旋鈕注意測定脈沖反應(yīng)的變化,,逐漸增加補整的比例,。如果RS補整非常接近振蕩的閾值,RS或Cc的微細變化都會達到震蕩的閾值,,產(chǎn)生電壓的振蕩而使細胞受損,。因此應(yīng)當(dāng)在RS補整水平寫不穩(wěn)定閾值之間留有10%-20%的余地為安全。準(zhǔn)備資料收集和脈沖序列的測定,。通過膜片鉗放大器的控制鍵將微電極的連接電位(junction potentials)調(diào)至零位。美國全自動膜片鉗廠家
1976年德國馬普生物物理化學(xué)研究所Neher和Sakmann在青蛙肌細胞上用雙電極鉗制膜電位的同時,,記錄到ACh的單通道離子電流,,從而產(chǎn)生了膜片鉗技術(shù)。1980年Sigworth等在記錄電極內(nèi)施加5-50cmH2O的負壓吸引,,得到10-100GΩ的高阻封接(Giga-seal),,明顯降低了記錄時的噪聲實現(xiàn)了單根電極既鉗制膜片電位又記錄單通道電流的突破。1981年Hamill和Neher等對該技術(shù)進行了改進,,引進了膜片游離技術(shù)和全細胞記錄技術(shù),,從而使該技術(shù)更趨完善,具有1pA的電流靈敏度,、1μm的空間分辨率和10μs的時間分辨率,。1983年10月,《Single-ChannelRecording》一書問世,,奠定了膜片鉗技術(shù)的里程碑,。Sakmann和Neher也因其杰出的工作和突出貢獻,榮獲1991年諾貝爾醫(yī)學(xué)和生理學(xué)獎,。德國細胞膜片鉗細胞功能特性在細胞膜的電學(xué)模型中,,膜電容和膜電導(dǎo)構(gòu)成了一個并聯(lián)回路。
在大多數(shù)膜片鉗實驗,要求所有實驗儀器及設(shè)備均具有良好的機械穩(wěn)定性,,以使微電極與細胞膜之間的相對運動盡可能小,。防震工作臺放置倒置顯微鏡和與之固定連接的微操縱器,其他設(shè)備置于臺外,。屏蔽罩由銅絲網(wǎng)制成,,接地以防止周圍環(huán)境的雜散電場對膜片鉗放大器的探頭電路的干擾。儀器設(shè)備架要靠近工作臺,,便于測量儀器與光學(xué)儀器配接,。倒置顯微鏡是膜片鉗實驗系統(tǒng)的主要光學(xué)部件,它不僅具有較好的視覺效果,,便于將玻璃電極與細胞的頂部接觸,,而且是借助移動物鏡來實現(xiàn)聚焦,具有較好的機械穩(wěn)定性,。視頻監(jiān)視器主要是用來監(jiān)視實驗過程中的操作,,特別是能將封接參數(shù)(如封接阻抗)與細胞的形態(tài)對應(yīng),以實現(xiàn)良好的封接,。
離子通道結(jié)構(gòu)研究∶目前,,絕大多數(shù)離子通道的一級結(jié)構(gòu)得到了闡明但根本的還是要搞清楚各種離子通道的三維結(jié)構(gòu),在這方面,,美國的二位科學(xué)家彼得·阿格雷和羅德里克麥金農(nóng)做出了一些開創(chuàng)性的工作,,他們到用X光繞射方法得到了K離子通道的三維結(jié)構(gòu),二位因此獲得2003年諾貝系化學(xué)獎,。有關(guān)離子通道結(jié)構(gòu)不是本PPT的重點,,可參考楊寶峰的<離子通道藥理學(xué)>和Hill的<lonicChannelsOfExcitableMembranes》。對離子通道功能的研究,,主要采用記錄離子通道電流來間接反映離子通道功能,,目前有如下兩種技術(shù):電壓鉗技術(shù)(VoltageClamp),膜片鉗(patchclamp)技術(shù),。而由通道蛋白介導(dǎo)的膜電導(dǎo)構(gòu)成了膜反應(yīng)的主動成分,,它的電流電壓關(guān)系是非線性的。
高阻封接技術(shù)還明顯降低了電流記錄的背景噪聲,,從而戲劇性地提高了時間,、空間及電流分辨率,如時間分辨率可達10μs,、空間分辨率可達1平方微米及電流分辨率可達10-12A,。影響電流記錄分辨率的背景噪聲除了來自于膜片鉗放大器本身外,較主要還是信號源的熱噪聲,。信號源如同一個簡單的電阻,,其熱噪聲為σn=4Kt△f/R式中σn為電流的均方差根,,K為波爾茲曼常數(shù),t為溫度,,△f為測量帶寬,,R為電阻值??梢?,要得到低噪聲的電流記錄,信號源的內(nèi)阻必需非常高,。如在1kHz帶寬,,10%精度的條件下,記錄1pA的電流,,信號源內(nèi)阻應(yīng)為2GΩ以上,。電壓鉗技術(shù)只能測量內(nèi)阻通常達100kΩ~50MΩ的大細胞的電流,從而不能用常規(guī)的技術(shù)和制備達到所要求的分辨率,。屯流鉗素向細胞內(nèi)注入刺激電流,,記錄膜電位對刺激電流的反應(yīng)。進口多通道膜片鉗電生理技術(shù)
浸溶細胞溶液和微電極玻璃管內(nèi)的填充液成分對全細胞膜片鉗記錄也是很重要的內(nèi)容,。美國全自動膜片鉗廠家
資料分析:一般電學(xué)性質(zhì)∶通過I/V關(guān)系計算得到單通道電導(dǎo),,觀察通道有無整流。通過離子選擇性,、翻轉(zhuǎn)電位或其它通道的條件初步確定通道類型,。通道動力學(xué)分析∶開放時間、開放概率,、關(guān)閉時間,、通道的時間依賴性失活、開放與關(guān)閉類型(簇狀猝發(fā),,Burst)樣開放與閃動樣短暫關(guān)閉(flickering),化學(xué)門控性通道的開,、關(guān)速率常數(shù)等數(shù)據(jù),。藥理學(xué)研究∶研究的藥物,阻斷劑,、激動劑或其它調(diào)制因素對通道活動的影響情況,。綜合分析得出結(jié)淪。美國全自動膜片鉗廠家
因斯蔻浦(上海)生物科技有限公司擁有生物科技,,醫(yī)藥科技領(lǐng)域內(nèi)的技術(shù)開發(fā),、技術(shù)咨詢、技術(shù)服務(wù),、技術(shù)轉(zhuǎn)讓,,實驗室設(shè)備,、儀器儀表、醫(yī)療器械,、計算機,、軟件及輔助設(shè)備銷售,計算機數(shù)據(jù)處理,,貨物及技術(shù)進出口業(yè)務(wù),。 成像平臺: 1. Inscopix自由活動超微顯微成像系統(tǒng) 2. DiveScope多通道內(nèi)窺鏡系統(tǒng) 3. 雙光子顯微鏡 動物行為學(xué)平臺: 1. PiezoSleep無創(chuàng)睡眠檢測系統(tǒng) 2. 自身給藥、條件恐懼,、斯金納,、睡眠剝奪、跑步機,、各類經(jīng)典迷宮等 神經(jīng)電生理: 1.NeuroNexus神經(jīng)電極 2.多通道電生理信號采集系統(tǒng) 3.膜片鉗系統(tǒng) 4.AO功能神經(jīng)外科臨床電生理平臺 顯微細胞: 1. UnipicK單細胞挑選及顯微切割系統(tǒng) 科研/臨床級3D打印 1. 德國envisionTEC 3D Bioplotter生物打印機 2. 韓國Invivo醫(yī)療級生物打印機等,。等多項業(yè)務(wù),主營業(yè)務(wù)涵蓋nVista,,nVoke,,3D bioplotte,invivo,。目前我公司在職員工以90后為主,,是一個有活力有能力有創(chuàng)新精神的團隊。因斯蔻浦(上海)生物科技有限公司主營業(yè)務(wù)涵蓋nVista,,nVoke,,3D bioplotte,invivo,,堅持“質(zhì)量保證,、良好服務(wù)、顧客滿意”的質(zhì)量方針,,贏得廣大客戶的支持和信賴,。一直以來公司堅持以客戶為中心、nVista,,nVoke,,3D bioplotte,invivo市場為導(dǎo)向,,重信譽,,保質(zhì)量,想客戶之所想,,急用戶之所急,,全力以赴滿足客戶的一切需要。