膜片鉗技術(shù)與其它技術(shù)相結(jié)合Neher等**將膜片鉗技術(shù)與Fura2熒光測鈣技術(shù)結(jié)合,，同時進行如細胞內(nèi)熒光強度、細胞膜離子通道電流及細胞膜電容等多指標變化的快速交替測定,，這樣便可得出同一事件過程中,，多種因素各自的變化情況,，進而可分析這些變化間的相互關(guān)系。Neher將可光解出鈣離子的鈣螯合物引入膜片鉗技術(shù),，進而可以定量研究鈣離子濃度與分泌率的關(guān)系及比較大分泌率等指標,。他又創(chuàng)膜片鉗的膜電容檢測與碳纖電極電化學檢測聯(lián)合運用的技術(shù)。之后又將光電聯(lián)合檢測技術(shù)與碳纖電極電化學檢測技術(shù)首先結(jié)合起來,。這種結(jié)合既能研究分泌機制,，又能鑒別分泌物質(zhì)，還能互相彌補各單種方法的不足,。Eberwine等于1991年首先將膜片鉗技術(shù)與RT-PCR技術(shù)結(jié)合起來運用,，可對形態(tài)相似而電活動不同的結(jié)果作出分子水平的解釋，從此開始了膜片鉗與分子生物學技術(shù)相結(jié)合的時代∶基因重組技術(shù),，膜通道蛋白重建技術(shù),。一些學者建立了組織切片膜片鉗技術(shù)（Slicepatch）,，就能在哺乳動物腦片制備上做全細胞記錄。德國細胞膜片鉗細胞功能特性

膜片鉗技術(shù)原理：膜片鉗技術(shù)是用玻璃微電極吸管把只含1-3個離子通道,、面積為幾個平方微米的細胞膜通過負壓吸引封接起來（見右圖）,，由于電極前列與細胞膜的高阻封接，在電極前列籠罩下的那片膜事實上與膜的其他部分從電學上隔離,，因此,，此片膜內(nèi)開放所產(chǎn)生的電流流進玻璃吸管，用一個極為敏感的電流監(jiān)視器（膜片鉗放大器）測量此電流強度,，就單一離子通道電流膜片鉗技術(shù)的建立,，對生物學科學特別是神經(jīng)科學是一資有重大意義的變革。這是一種以記錄通過離子通道的離子電流來反映細胞膜單一的（或多個的離子通道分子活動的技術(shù),。些技術(shù)的出現(xiàn)自然將細胞水平和分子水平的生理學研究聯(lián)系在一起,，同時又將神經(jīng)科學的不同分野必然地融匯在一起，改變了既往各個分野互不聯(lián)系,、互不滲透,，阻礙人們較全認識能力的弊端。這一技術(shù)的發(fā)現(xiàn)和基因克隆技術(shù)并架齊驅(qū),，給生命科學研究帶來了巨大的前進動力,。腦片膜片鉗電生理工具在細胞膜的電興奮過程中，脂質(zhì)層膜電容的反應(yīng)是被動的,，其電流電壓曲線是線性的,。

這一設(shè)計模式似乎幾十年都沒有改變過，作為一個有著近20年膜片鉗經(jīng)驗的科研工作者,，記得自己進入實驗室次看到的放大器就差不多是這樣,，也不覺得還會有什么變化。直到筆者在19年訪問歐洲的一個同樣做電生理的實驗室的時候,，發(fā)現(xiàn)了這樣一款獨特的放大器,，讓筆者眼前一亮，這款放大器從前置放大器出來的線竟然就直接連接在了電腦上,，當筆者問他們放大器和數(shù)模呢,？他們說，你看到的就是全部了,，所以的部件都包含在了這個前置放大器中,。

全細胞記錄構(gòu)型(whole-cellrecording) 高阻封接形成后，繼續(xù)以負壓抽吸使電極管內(nèi)細胞膜破裂,，電極胞內(nèi)液直接相通，而與浴槽液絕緣,，這種形式稱為“全細胞”記錄,。它既可記錄膜電位又可記錄膜電流,。其中膜電位可在電流鉗情況下記錄，或?qū)⒉９苓B到標準高阻微電極放大器上記錄,。在電壓鉗條件下記錄到的大細胞全細胞電流可達nA級,，全細胞鉗的串聯(lián)電阻(玻管和細胞內(nèi)部之間的電阻)應(yīng)當補償。任何流經(jīng)膜的電流均流經(jīng)這一電阻,，所引起的電壓降將使玻管電壓不同于細胞內(nèi)的真正電位,。電流愈大，愈需對串聯(lián)電阻進行補償,。全細胞鉗應(yīng)注意細胞必需合理的小到其電流能被放大器測到的范圍(25～50nA),。減少串聯(lián)電阻的方法是玻管尖要比單通道記錄大。封接是膜片鉗記錄的關(guān)鍵步驟之一,。

高阻封接問題的解決不僅改善了電流記錄性能,，還隨之出現(xiàn)了研究通道電流的多種膜片鉗方式。根據(jù)不同的研究目的,，可制成不同的膜片構(gòu)型,。(1)細胞吸附膜片(cell-attachedpatch)將兩次拉制后經(jīng)加熱拋光的微管電極置于清潔的細胞膜表面上，形成高阻封接,，在細胞膜表面隔離出一小片膜,，既而通過微管電極對膜片進行電壓鉗制，分辨測量膜電流,，稱為細胞貼附膜片,。由于不破壞細胞的完整性，這種方式又稱為細胞膜上的膜片記錄,。此時跨膜電位由玻管固定電位和細胞電位決定,。因此，為測定膜片兩側(cè)的電位,，需測定細胞膜電位并從該電位減去玻管電位,。從膜片的通道活動看，這種形式的膜片是極穩(wěn)定的,，因細胞骨架及有關(guān)代謝過程是完整的,，所受的干擾小。電壓鉗技術(shù)的主要在于將膜電位固定在指令電壓的水平,，這樣才能研究在給定膜電位下膜電流隨時間的變化關(guān)系,。德國可升級膜片鉗哪家好

細胞是動物和人體的基本組成單元，細胞與細胞內(nèi)的通信,是依靠其膜上的離子通道進行的,。德國細胞膜片鉗細胞功能特性

膜片鉗技術(shù)本質(zhì)上也屬于電壓鉗范疇,，兩者的區(qū)別關(guān)鍵在于：①膜電位固定的方法不同；②電位固定的細胞膜面積不同，進而所研究的離子通道數(shù)目不同,。電壓鉗技術(shù)主要是通過保持細胞跨膜電位不變,，并迅速控制其數(shù)值，以觀察在不同膜電位條件下膜電流情況,。因此只能用來研究整個細胞膜或一大塊細胞膜上所有離子通道活動,。目前電壓鉗主要用于巨大細胞的全性能電流的研究，特別在分子克隆的卵母細胞表達電流的鑒定中發(fā)揮著其他技術(shù)不能替代的作用,。該技術(shù)的主要缺陷是必須在細胞內(nèi)插入兩個電極,，對細胞損傷很大，在小細胞如元,，就難以實現(xiàn),，又因細胞形態(tài)復雜，很難保持細胞膜各處生物特性的一致,。德國細胞膜片鉗細胞功能特性

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