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美國(guó)高通量全自動(dòng)膜片鉗細(xì)胞功能特性

來(lái)源: 發(fā)布時(shí)間:2023-12-08

電壓鉗的缺點(diǎn)∶電壓鉗技術(shù)目前主要用于巨火細(xì)胞的全細(xì)胞電流研究,,特別在分子克隆的卵母細(xì)胞表達(dá)電流的鑒定中發(fā)揮其它技術(shù)不能替代的作用。但也有其致命的弱點(diǎn)1,、微電極需刺破細(xì)胞膜進(jìn)入細(xì)胞,,以致造成細(xì)胞漿流失,破壞了細(xì)胞生理功能的完整性;2,、不能測(cè)定單一通道電流,。因?yàn)殡妷恒Q制的膜面積很大,包含著大量隨機(jī)開(kāi)放和關(guān)閉著的通道,,而且背景噪音大,,往往掩蓋了單一通道的電流。3,、對(duì)體積小的細(xì)胞(如哺乳類(lèi)***元,,直徑在10-30μm之間)進(jìn)行電壓鉗實(shí)驗(yàn),技術(shù)上有更大的困難,。由于電極需插入細(xì)胞,,不得不將微電極的前列做得很細(xì),如此細(xì)的前列致使電極阻抗很大,,常常是60~-8OMΩ或120~150MΩ(取決于不同的充灌液),。這樣大的電極阻抗不利于作細(xì)胞內(nèi)電流鉗或電壓鉗記錄時(shí)在短時(shí)間(μs)內(nèi)向細(xì)胞內(nèi)注入電流,達(dá)到鉗制膜電壓或膜電流之目的,。再者,,在小細(xì)胞上插入的兩根電極可產(chǎn)生電容而降低測(cè)量電壓電極的反應(yīng)能力。膜片鉗是一種用于夾持薄膜或其他薄片材料的工具,。美國(guó)高通量全自動(dòng)膜片鉗細(xì)胞功能特性

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膜片鉗技術(shù)是當(dāng)前研究細(xì)胞膜電流及離子通道的蕞重要的技術(shù),。從技術(shù)層面來(lái)解釋的話(huà),膜片鉗技術(shù)(patchclamp)是指利用鉗制電壓或者電流的方法(通常為鉗制電壓)來(lái)記錄細(xì)胞膜離子通道電活動(dòng)的微電極技術(shù),。膜片鉗技術(shù)的原理為:使用一個(gè)一頭尖一頭粗的錐狀玻璃管,,管中設(shè)有微電極,管的前列直徑約1.5~3.0μm,,通過(guò)負(fù)壓吸引使前列口與細(xì)胞膜形成千兆歐姆級(jí)的阻抗封接,,前列口內(nèi)的細(xì)胞膜區(qū)域與周?chē)渌麉^(qū)域形成了電學(xué)分隔,然后人工鉗制此片區(qū)域細(xì)胞膜的電位,,即可達(dá)到對(duì)膜片上離子通道電流的監(jiān)測(cè)與記錄,。全細(xì)胞膜片鉗腦片玻璃微電極的應(yīng)用使的電生理研究進(jìn)行了重命性的變化。

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這一設(shè)計(jì)模式似乎幾十年都沒(méi)有改變過(guò),,作為一個(gè)有著近20年膜片鉗經(jīng)驗(yàn)的科研工作者,記得自己進(jìn)入實(shí)驗(yàn)室次看到的放大器就差不多是這樣,也不覺(jué)得還會(huì)有什么變化,。直到筆者在19年訪(fǎng)問(wèn)歐洲的一個(gè)同樣做電生理的實(shí)驗(yàn)室的時(shí)候,,發(fā)現(xiàn)了這樣一款獨(dú)特的放大器,讓筆者眼前一亮,,這款放大器從前置放大器出來(lái)的線(xiàn)竟然就直接連接在了電腦上,,當(dāng)筆者問(wèn)他們放大器和數(shù)模呢?他們說(shuō),,你看到的就是全部了,,所以的部件都包含在了這個(gè)前置放大器中。滔博生物TOP-Bright專(zhuān)注基于多種離子通道靶點(diǎn)的化合物體外篩選,服務(wù)于全球藥企的膜片鉗公司,快速獲得實(shí)驗(yàn)結(jié)果,專(zhuān)業(yè)團(tuán)隊(duì),7*63小時(shí)隨時(shí)人工在線(xiàn)咨詢(xún).

膜片鉗技術(shù)是一種用于研究生物細(xì)胞膜離子通道的實(shí)驗(yàn)方法,。它通過(guò)在細(xì)胞膜上形成小孔,,從而對(duì)細(xì)胞膜的離子通道進(jìn)行精確的電生理記錄和描述。在膜片鉗實(shí)驗(yàn)中,,研究人員通常會(huì)先將細(xì)胞膜上的脂質(zhì)雙層通過(guò)特殊設(shè)備進(jìn)行穿刺,,形成一個(gè)小孔。然后,,他們將一個(gè)玻璃微電極插入這個(gè)小孔中,,以接觸并測(cè)量細(xì)胞膜內(nèi)部的電位變化。這個(gè)玻璃微電極的非常細(xì),,不會(huì)對(duì)細(xì)胞膜產(chǎn)生太大的干擾,。通過(guò)膜片鉗技術(shù),科學(xué)家可以精確地測(cè)量離子通道的活動(dòng),,從而了解離子通道在細(xì)胞生理學(xué)中的作用,。例如,他們可以測(cè)量離子通道在不同刺激下如何開(kāi)啟或關(guān)閉,,以及這些變化如何影響細(xì)胞的電活動(dòng)和化學(xué)信號(hào)傳遞,。此外,膜片鉗技術(shù)還可以用于研究和鑒定新的藥物靶點(diǎn),。通過(guò)觀察藥物對(duì)離子通道活動(dòng)的影響,,科學(xué)家可以評(píng)估新藥對(duì)特定疾病的zhi潛力??偟膩?lái)說(shuō),,膜片鉗技術(shù)是一種非常有用的實(shí)驗(yàn)方法,它為我們提供了深入研究細(xì)胞膜離子通道以及藥物作用機(jī)制的工具,。膜片鉗技術(shù)實(shí)現(xiàn)了小片膜的孤立和高阻封接的形成,。

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膜片鉗技術(shù)發(fā)展至今,已經(jīng)成為現(xiàn)代細(xì)胞電生理的常規(guī)方法,,它不僅可以作為基礎(chǔ)生物醫(yī)學(xué)研究的工具,,而且直接或間接為臨床醫(yī)學(xué)研究服務(wù),。目前膜片鉗技術(shù)廣泛應(yīng)用于神經(jīng)(腦)科學(xué)、心血管科學(xué),、藥理學(xué),、細(xì)胞生物學(xué)、病理生理學(xué),、中醫(yī)藥學(xué),、植物細(xì)胞生理學(xué)、運(yùn)動(dòng)生理等多學(xué)科領(lǐng)域研究,。隨著全自動(dòng)膜片鉗技術(shù)(Automaticpatchclamptechnology)的出現(xiàn),,膜片鉗技術(shù)因其具有的自動(dòng)化、高通量特性,,在藥物研發(fā),、藥物篩選中顯示了強(qiáng)勁的生命力。脂質(zhì)層電導(dǎo)很低,,由于雙分子層的結(jié)構(gòu)特點(diǎn),,形成了細(xì)胞的膜電容,通道蛋白開(kāi)閉狀況主要決定了膜電導(dǎo)的數(shù)值,。德國(guó)全自動(dòng)膜片鉗高阻抗封接

這是一種以記錄通過(guò)離子通道的離子電流來(lái)反映細(xì)胞膜單一的或多個(gè)的離子通道分子活動(dòng)的技術(shù),。美國(guó)高通量全自動(dòng)膜片鉗細(xì)胞功能特性

膜片鉗技術(shù)的發(fā)展∶全自動(dòng)膜片鉗技術(shù)(Automated patch clamp technique)的出現(xiàn)標(biāo)志著膜片鉗技術(shù)已經(jīng)發(fā)展到了一個(gè)嶄新階段,從這個(gè)意義上說(shuō),,前面所講的膜片鉗技術(shù)我們稱(chēng)之為傳統(tǒng)膜片鉗技術(shù)( Traditional patch clamp technique),,傳統(tǒng)膜片鉗技術(shù)每次只能記錄一個(gè)細(xì)胞(或一對(duì)細(xì)胞),對(duì)實(shí)驗(yàn)人員來(lái)說(shuō)是一項(xiàng)耗時(shí)耗力的工作,,不適合在藥物開(kāi)發(fā)初期和中期進(jìn)行大量化合物的篩選,,也不適合需要記錄火量細(xì)胞的基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn)研究。全自動(dòng)膜片鉗技術(shù)的出現(xiàn)在很大程度上解決了這些問(wèn)題,,它不僅通量高,,一次能記錄幾個(gè)甚至幾十個(gè)細(xì)胞,而且從找細(xì)胞,、形成封接,、破膜等整個(gè)實(shí)驗(yàn)操作實(shí)現(xiàn)了自動(dòng)化,免除了這些操作的復(fù)雜與困難,。這兩個(gè)優(yōu)點(diǎn)使得膜片鉗技術(shù)的工作效率提高了!全自動(dòng)膜片鉗技術(shù)采用的標(biāo)本必須是懸浮細(xì)胞,,像腦片這類(lèi)標(biāo)本無(wú)法采用。此外,,全自動(dòng)膜片鉗技術(shù)只能進(jìn)行全細(xì)胞記錄模式,、穿孔膜片鉗記錄模式以及細(xì)胞貼附式單通道記錄模式,而不能進(jìn)行其他模式的記錄,。美國(guó)高通量全自動(dòng)膜片鉗細(xì)胞功能特性