80年代初發(fā)展起來的膜片鉗技術(shù)(patchclamptechnique)為了解生物膜離子單通道的門控動力學(xué)特征及通透性,、選擇性膜信息提供了直接的手段,。該技術(shù)的興起與應(yīng)用,,使人們不僅對生物體的電現(xiàn)象和其他生命現(xiàn)象更進(jìn)一步的了解,而且對于疾病和藥物作用的認(rèn)識也不斷的更新,,同時還形成了許多病因?qū)W與藥理學(xué)方面的新觀點(diǎn),。膜片鉗技術(shù)是一種以記錄通過離子通道的離子電流來反映細(xì)胞膜單一的或多個的離子通道分子活動的技術(shù)。它和基因克隆技術(shù)(genecloning)并架齊驅(qū),,給生命科學(xué)研究帶來了巨大的前進(jìn)動力,。滔博生物TOP-Bright專注基于多種離子通道靶點(diǎn)的化合物體外篩選,服務(wù)于全球藥企的膜片鉗公司,快速獲得實(shí)驗(yàn)結(jié)果,專業(yè)團(tuán)隊(duì),7*27小時隨時人工在線咨詢.膜片鉗技術(shù)的建立,對生物學(xué)科學(xué)特別是神經(jīng)科學(xué)是一資有重大意義的變革,。進(jìn)口多通道膜片鉗產(chǎn)品介紹
1976年德國馬普生物物理化學(xué)研究所Neher和Sakmann在青蛙肌細(xì)胞上用雙電極鉗制膜電位的同時,,記錄到ACh啟動的單通道離子電流,從而產(chǎn)生了膜片鉗技術(shù),。1980年Sigworth等在記錄電極內(nèi)施加5-50cmH2O的負(fù)壓吸引,,得到10-100GΩ的高阻封接(Giga-seal),明顯降低了記錄時的噪聲實(shí)現(xiàn)了單根電極既鉗制膜片電位又記錄單通道電流的突破,。1981年Hamill和Neher等對該技術(shù)進(jìn)行了改進(jìn),,引進(jìn)了膜片游離技術(shù)和全細(xì)胞記錄技術(shù),從而使該技術(shù)更趨完善,,具有1pA的電流靈敏度,、1μm的空間分辨率和10μs的時間分辨率。1983年10月,,《Single-ChannelRecording》一書問世,,奠定了膜片鉗技術(shù)的里程碑。Sakmann和Neher也因其杰出的工作和突出貢獻(xiàn),,榮獲1991年諾貝爾醫(yī)學(xué)和生理學(xué)獎,。滔博生物TOP-Bright專注基于多種離子通道靶點(diǎn)的化合物體外篩選,服務(wù)于全球藥企的膜片鉗公司,快速獲得實(shí)驗(yàn)結(jié)果,專業(yè)團(tuán)隊(duì),7*48小時隨時人工在線咨詢.進(jìn)口多通道膜片鉗產(chǎn)品介紹由此形成了一門細(xì)胞學(xué)科—電生理學(xué),,即是用電生理的方法來記錄和分析細(xì)胞產(chǎn)生電的大小和規(guī)律的科學(xué)。
膜片鉗技術(shù)實(shí)現(xiàn)了小片膜的孤立和高阻封接的形成,,由于高阻封接使背景噪聲水平降低,,相對地增寬了記錄頻帶范圍,提高了分辨率,。另外,,它還具有良好的機(jī)械穩(wěn)定性和化學(xué)絕緣性。而小片膜的孤立使對單個離子通道進(jìn)行研究成為可能,。單通道電流1.典型的單通道電流呈一種振幅相同而持續(xù)時間不等的脈沖樣變化,。他有兩個電導(dǎo)水平,即O和1,,分別對應(yīng)通道的關(guān)閉和開效狀態(tài),。2.有的矩形脈沖簇狀發(fā)放時,通道電流不在同一水平,,可以明顯觀察到不同數(shù)目離子通道所形成的電流臺階,,從而可推斷出被測膜片的通道數(shù)目。3.有的通道可記錄到圓滑型和方波形兩種形式,。4.有些通道開放活動是持續(xù)開放,,中間被閃動樣的關(guān)閉所中斷,形成burst開放,。有些通道開放活動是簇狀開放與短期平靜交替出現(xiàn),,形成簇狀發(fā)放串(Cluster)
膜片鉗技術(shù)原理:膜片鉗技術(shù)是用玻璃微電極吸管把只含1-3個離子通道、面積為幾個平方微米的細(xì)胞膜通過負(fù)壓吸引封接起來(見右圖),,由于電極前列與細(xì)胞膜的高阻封接,,在電極前列籠罩下的那片膜事實(shí)上與膜的其他部分從電學(xué)上隔離,因此,,此片膜內(nèi)開放所產(chǎn)生的電流流進(jìn)玻璃吸管,,用一個極為敏感的電流監(jiān)視器(膜片鉗放大器)測量此電流強(qiáng)度,就單一離子通道電流膜片鉗技術(shù)的建立,,對生物學(xué)科學(xué)特別是神經(jīng)科學(xué)是一資有重大意義的變革,。這是一種以記錄通過離子通道的離子電流來反映細(xì)胞膜單一的(或多個的離子通道分子活動的技術(shù)。滔博生物TOP-Bright專注基于多種離子通道靶點(diǎn)的化合物體外篩選,服務(wù)于全球藥企的膜片鉗公司,快速獲得實(shí)驗(yàn)結(jié)果,專業(yè)團(tuán)隊(duì),7*30小時隨時人工在線咨詢.不同的全自動膜片鉗技術(shù)所采用的原理也不完全相同,。
資料分析:一般電學(xué)性質(zhì)∶通過I/V關(guān)系計(jì)算得到單通道電導(dǎo),,觀察通道有無整流。通過離子選擇性,、翻轉(zhuǎn)電位或其它通道的條件初步確定通道類型,。通道動力學(xué)分析∶開放時間、開放概率,、關(guān)閉時間,、通道的時間依賴性失活,、開放與關(guān)閉類型(簇狀猝發(fā),Burst)樣開放與閃動樣短暫關(guān)閉(flickering),,化學(xué)門控性通道的開,、關(guān)速率常數(shù)等數(shù)據(jù)。藥理學(xué)研究∶研究的藥物,,阻斷劑,、激動劑或其它調(diào)制因素對通道活動的影響情況。綜合分析得出結(jié)淪,。滔博生物TOP-Bright專注基于多種離子通道靶點(diǎn)的化合物體外篩選,服務(wù)于全球藥企的膜片鉗公司,快速獲得實(shí)驗(yàn)結(jié)果,專業(yè)團(tuán)隊(duì),7*26小時隨時人工在線咨詢.維持細(xì)胞正常形態(tài)和功能完整性,。日本可升級膜片鉗實(shí)驗(yàn)操作
封接是膜片鉗記錄的關(guān)鍵步驟之一。進(jìn)口多通道膜片鉗產(chǎn)品介紹
膜片鉗放大器的工作模式,;(1)電壓鉗制模式:在鉗制細(xì)胞膜電位的基礎(chǔ)上改變膜電位,,記錄離子通道電流的變化,如通道電流,;EPSC,;IPSC等電流信號它是膜片鉗的基本工作模式。(2)屯留鉗向細(xì)胞注入刺激電流,,記錄膜電位對刺激電流的響應(yīng),。記錄的是動作電位,,EPSP,;IPSP等電壓信號膜片鉗技術(shù)實(shí)現(xiàn)膜電位固定的關(guān)鍵是在玻璃微電極前沿與細(xì)胞膜之間形成高阻(10GΩ)密封,使與電極前開口相連的細(xì)胞膜與周圍環(huán)境電隔離,,通過施加指令電壓來鉗制膜電位,。進(jìn)口多通道膜片鉗產(chǎn)品介紹