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來源: 發(fā)布時間:2025-05-24

想要對鈣離子的動態(tài)變化進(jìn)行有效的檢測,,鈣離子指示劑的選擇顯得尤為重要。鈣離子熒光指示劑在未結(jié)合鈣離子前幾乎無熒光,,與鈣離子結(jié)合后,,熒光強(qiáng)度明顯增強(qiáng)。利用這一原理,,可以通過指示劑的信號強(qiáng)弱來觀察細(xì)胞內(nèi)鈣離子濃度水平的變化,。根據(jù)激發(fā)光波長范圍,鈣離子指示劑可以分為可見光激發(fā)和紫外光激發(fā),,而根據(jù)其工作原理又可以分為比率和非比率型,。常見的鈣離子指示劑有,,紫外光激發(fā)Ca2+熒光探針,、可見光激發(fā)Ca2+熒光探針、轉(zhuǎn)基因Ca2+指示劑,。鈣成像技術(shù)(calcium imaging)是指利用鈣離子指示劑監(jiān)測組織內(nèi)鈣離子濃度的方法,。哈爾濱inscopix鈣成像采購信息

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鈣離子在很多生理活動中都發(fā)揮著重要作用,除了在肌肉細(xì)胞收縮中扮演著重要的角色,,鈣離子也是神經(jīng)元活動的重要“風(fēng)向標(biāo)”之一:當(dāng)神經(jīng)元膜電位發(fā)生去極化,,產(chǎn)生的動作電位傳導(dǎo)到神經(jīng)元軸突末梢時,細(xì)胞膜上的電壓門控鈣離子通道打開,,大量鈣離子內(nèi)流,,包含神經(jīng)遞質(zhì)的囊泡由突觸前膜釋放至后膜,下游神經(jīng)元就得以接受到上游的信號,。因此,,鈣離子成像可以追蹤神經(jīng)元動作電位,從而幫助我們了解神經(jīng)元集群的活動,,可以用于感知覺,,學(xué)習(xí)記憶,社會性行為等各種各樣的研究中,。南京超微顯微鈣成像動物行為學(xué)想要同時觀察軸突和樹突的鈣離子信號,,大視野是很重要的。

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霍華德休斯頓醫(yī)學(xué)研究所(HHMI)ScottSternson課題組研究了影響這種源源不斷的食欲的神經(jīng)機(jī)制,。他們通過使用Inscopix小顯微鏡觀察小鼠腦干區(qū)域的神經(jīng)元,,發(fā)現(xiàn)貪念美食的小鼠可能是因?yàn)樘厥獾拇竽X區(qū)域?qū)γ朗澈湍滩璞绕渌∈蟾用舾小1灸軙?qū)使我們在感到饑餓和干渴的時候?qū)ふ沂澄?,在找到食物或水時通過眼睛看,、鼻子聞、嘴巴嘗等方式來感受和決定要不要吃,,吃到一定程度產(chǎn)生滿足感(或是吃了還想吃的不滿足感),。因此,,要把大腦中匯集的關(guān)于吃喝的各類信號分清楚,并找出控制不同吃喝行為的神經(jīng)環(huán)路無疑是很有挑戰(zhàn)的任務(wù),。ScottSternson博士的研究團(tuán)隊(duì)在小鼠大腦中尋找饑餓和干渴神經(jīng)環(huán)路共存的腦區(qū),。他們注意到,腦干的藍(lán)斑區(qū)(locuscoeruleus)附近有一群谷氨酸能神經(jīng)元(被稱為periLC神經(jīng)元),,參與進(jìn)食和飲水的行為,,是餓和渴的匯聚點(diǎn)。為了研究這些神經(jīng)細(xì)胞的功能,,研究小組開發(fā)了一種技術(shù),,可以讓小鼠在自由活動的同時,通過Inscopix自由活動鈣成像顯微鏡觀察記錄腦干中periLC神經(jīng)元的活動,。這項(xiàng)研究的作者龔蓉博士表示,,解決這個技術(shù)是此項(xiàng)研究的關(guān)鍵。

在神經(jīng)系統(tǒng)研究中,,我們常使用鈣指示劑表征鈣離子濃度變化,,以反映神經(jīng)元的活動。常見的鈣成像方法有雙光子熒光成像和單光子熒光成像兩種,,其中后者是研究腦神經(jīng)活動的常用方法,。但與雙光子成像相比,單光子成像更易受到來自神經(jīng)元的高水平串?dāng)_,,導(dǎo)致信噪比降低,。不僅如此,采集活動信號時還易被來自近距離通過的軸突和樹突的信號所污染,,造成的非特異性信號,,這些均嚴(yán)重影響對神經(jīng)元活動反應(yīng)的精細(xì)成像。因而,,在單光子熒光成像的基礎(chǔ)上,,研究團(tuán)隊(duì)在細(xì)胞核中表達(dá)遺傳編碼的鈣指示劑,從而消除神經(jīng)纖維信號,。但與經(jīng)典的胞質(zhì)鈣成像相比,,鈣進(jìn)入細(xì)胞核的要求降低了這種成像的時間精度。專業(yè)的鈣成像顯微鏡使得鈣成像變的直接,。

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細(xì)胞內(nèi)鈣離子作為重要的信號分子其作用具有時間性和空間性,。當(dāng)個細(xì)胞興奮時,產(chǎn)生了一個電沖動,,此時,,細(xì)胞外的鈣離子流入該細(xì)胞內(nèi),促使該細(xì)胞分泌神經(jīng)遞質(zhì),神經(jīng)遞質(zhì)與相鄰的下一級神經(jīng)細(xì)胞膜上的蛋白分子結(jié)合,,促使這一級神經(jīng)細(xì)胞產(chǎn)生新的電沖動,。以此類推,神經(jīng)信號便一級一級地傳遞下去,,從而構(gòu)成復(fù)雜的信號體系,,較終形成學(xué)習(xí)、記憶等大腦的高級功能,。在哺乳動物神經(jīng)系統(tǒng)中,,鈣離子同樣扮演著重要的信號分子的角色。靜息狀態(tài)下大部分神經(jīng)元細(xì)胞內(nèi)鈣離子濃度約為50-100nM,,而細(xì)胞興奮時鈣離子濃度能瞬間上升10-100倍,,增加的鈣離子對于突觸囊泡胞吐釋放神經(jīng)遞質(zhì)的過程必不可少。眾所周知,,只有游離鈣才具有生物學(xué)活性,,而細(xì)胞質(zhì)內(nèi)鈣離子濃度由鈣離子的內(nèi)外流平衡所決定,同時也受鈣結(jié)合蛋白的影響,。細(xì)胞外鈣離子內(nèi)流的方式有很多種,,其中包括電壓門控鈣離子通道、離子型谷氨酰胺受體,、煙堿型膽堿能受體(nAChR)和瞬時受體電位C型通道(TRPC)等。通過鈣成像技術(shù)發(fā)現(xiàn)神經(jīng)元的活動與其內(nèi)部的鈣離子濃度密切相關(guān),。北京光遺傳鈣成像什么價格

對鈣離子的功能研究中,,鈣指示劑是必不可少的工具。哈爾濱inscopix鈣成像采購信息

利用鈣成像技術(shù)記錄大腦活動,,隨著功能光學(xué)成像技術(shù)的發(fā)展,,神經(jīng)學(xué)家們已經(jīng)可以研究腦區(qū)和神經(jīng)元內(nèi)部的工作情況。功能鈣成像技術(shù)就是其中之一,,其主要原理是將外源性熒光信號和生理現(xiàn)象耦合起來——通過熒光染料信號的改變反映細(xì)胞內(nèi)游離鈣離子濃度,,以此細(xì)胞的功能狀態(tài)。目前它被廣泛應(yīng)用于實(shí)時監(jiān)測一群相關(guān)神經(jīng)元內(nèi)鈣離子的變化,,從而判斷其功能活動,。該技術(shù)的出現(xiàn)使得科學(xué)家可以親眼目睹神經(jīng)信號在神經(jīng)網(wǎng)絡(luò)之中時間和空間上的傳遞穿梭。哈爾濱inscopix鈣成像采購信息