使用雙光子顯微鏡可以以亞細(xì)胞分辨率對鈣離子傳感器和谷氨酸傳感器成像，從而測量不透明大腦深處的活動,；成像膜電壓變化能直接反映神經(jīng)元活動,，但神經(jīng)元活動的速度對于常規(guī)的2PM來說太快。目前電壓成像主要通過寬場顯微鏡實現(xiàn),，但它的空間分辨率較差并且只是于淺層深度。因此要在不透明的大腦中以高空間分辨率對膜電壓變化進行成像，需要較提高2PM的成像速率,。FACED模塊輸出處的子脈沖序列可以看作從虛擬光源陣列發(fā)出的光，這些子脈沖在中繼到顯微鏡物鏡后形成了一個空間上分離且時間延遲的焦點陣列,。然后將該模塊并入具有高速數(shù)據(jù)采集系統(tǒng)的標(biāo)準(zhǔn)雙光子熒光顯微鏡中，如圖2所示,。光源是具有1MHz重復(fù)頻率的920nm的激光器,，通過FACED模塊可產(chǎn)生80個脈沖焦點,，其脈沖時間間隔為2ns。這些焦點是虛擬源的圖像,，虛擬源越遠(yuǎn),，物鏡處的光束尺寸越大,，焦點越小,。光束沿y軸比x軸能更好地充滿物鏡,，從而導(dǎo)致x軸的橫向分辨率為0.82μm,，y軸的橫向分辨率為0.35μm,。雙光子顯微鏡的應(yīng)用中,，該如何選擇以及更好的使用PMT,。進口2PPLUS雙光子顯微鏡光損傷

在高光子密度的情況下，熒光分子可以同時吸收兩個長波長的光子,，然后發(fā)射出一個波長較短的光子,，其效果和使用一個波長為長波長一半的光子去激發(fā)熒光分子是相同的（如下圖）。如煙酰胺腺嘌呤二核苷酸（NADH）,，在單光子激發(fā)時,，在波長為350nm光的激發(fā)下發(fā)出450nm熒光；而在雙光子激發(fā)時,，可采用750nm的激發(fā)光得到450nm熒光,。由于雙光子激發(fā)需要很高的光子密度，為了不損傷細(xì)胞,，雙光子顯微鏡使用高能量鎖模脈沖激光器,。這種激光器發(fā)出的激光具有很高的峰值能量和很低的平均能量，從而可以減少光漂白和光毒性帶來的不利影響,。美國investigator雙光子顯微鏡聯(lián)系方式雙光子顯微鏡型號有哪些,？

其實電子顯微鏡相比于光學(xué)顯微鏡的重要優(yōu)勢或者存在的比較大意義，準(zhǔn)確的來說，不在于放大倍數(shù),，而在于超高的分辨率。這兩者是不同的,。通俗的來說，就是進行觀察的時候,，除了要將物體放大，還需要能將它與相鄰的其他物體分辨開來,。如果兩個相鄰微粒的圖像在光學(xué)顯微鏡下,，即使放大到很大,，看到的可能卻是兩個相交的亮斑（艾里斑），而沒有明顯的界限（更不用說細(xì)節(jié)了）,，這表示是分辨率不夠。拋開分辨率談放大倍數(shù)是沒有意義的,。光學(xué)顯微鏡的分辨率極限是阿貝極限，約等于光波波長的一半,，通常被說成是光學(xué)顯微鏡放大極限,，其實準(zhǔn)確地來說,，應(yīng)該叫做分辨率的極限,。而其產(chǎn)生的原因是光的衍射,，根本原因是光的波粒二象性,。電子衍射實驗證明了電子的波動性，于是用電子代替光的電子顯微鏡成為可能,。電子顯微鏡也有多種,，題主說的是像REM的。電鏡也存在用衍射規(guī)則觀察的,，比如低能電子衍射（LEED）和透射電鏡（TEM）。兩者主要用于觀察晶體,，根據(jù)其周期性的特點而生成倒易空間里的衍射圖像，借助elward球或者傅里葉變換就可以轉(zhuǎn)換到實空間,，得到真正的晶體表面圖像了,。

與普通顯微鏡相比,，電子顯微鏡可以在更小的尺度上觀察事物,，冷凍電子顯微鏡可以觀察活性生物大分子。雙光子顯微鏡有什么優(yōu)勢,？它能做普通光學(xué)顯微鏡做不到的事情嗎,？原來雙光子顯微鏡可以準(zhǔn)確穿透厚標(biāo)本進行定點和***觀察,！因為電磁波的波長越短，粒子越強,，散射的影響越大。雙光子顯微鏡將激發(fā)光源改為長波長激光,，增加了激光的穿透力,，同時降低了對細(xì)胞的毒性。此外,，由于雙光子激發(fā)效應(yīng)只能發(fā)生在物鏡的焦點處,，因此掃描精度極高,，還可以提高激發(fā)光效率，減少掃描點以外的熒光物質(zhì)的消耗,。雙光子顯微鏡是新型的熒光顯微鏡，其原理大致是這樣的,；

從雙光子的原理和特點我們就可以明顯的得出雙光子的優(yōu)點：☆穿透能力強：相對于紫外光,，可見光和近紅外光都具有更強的穿透能力,，因而受生物組織散射的影響更小,，解決對生物組織中深層物質(zhì)的層析成像研究問題,；☆高分辨率：由于雙光子吸收截面很小,，只有在焦平面很小的區(qū)域內(nèi)可以激發(fā)出熒光,，雙光子吸收局限于焦點處的體積約為波長3次方的范圍內(nèi)；☆漂白區(qū)域?。河捎诩ぐl(fā)只存在于交點處,，所以焦點以外的區(qū)域都不會發(fā)生光漂白現(xiàn)象；☆熒光收集率高：與共聚焦成像相比,，雙光子成像不需要光學(xué)濾波器（共焦）,，這樣就提高了對熒光的收集率,，而收集率的提高直接導(dǎo)致圖像對比度的提高。雙光子顯微鏡使用長波長脈沖光,，是通過物鏡匯聚的,。進口2PPLUS雙光子顯微鏡光損傷

雙光子顯微鏡為什么穿透能力強?進口2PPLUS雙光子顯微鏡光損傷

從雙光子到三光子：科學(xué)家正在從雙光子轉(zhuǎn)向三光子顯微鏡。1996年,，ChrisXu在康奈爾大學(xué)(Denk同導(dǎo)師實驗室)讀博期間發(fā)明了三光子顯微鏡,，如果雙光子吸收可行，那么三光子看起來也是自然的發(fā)展方向,。三光子成像使用更長的波長,，大約在1.3和1.7微米，其成像深度也比雙光子更深,，目前記錄約為2.2毫米,，人類大腦皮層厚約4毫米。相比雙光子顯微鏡,，三光子還要求以較低重頻使用更強和更短的激光脈沖，而傳統(tǒng)的鈦寶石激光器難以達(dá)到這些要求,，但是對于摻鐿光纖飛秒光參量放大器則非常容易,，比如我們的Y-Fi光參量放大器(OPA)。進口2PPLUS雙光子顯微鏡光損傷