要想讓激發(fā)激光進入更深的層面,，大致可從兩個方面入手,，裝置優(yōu)化與標本改造。關(guān)于裝置優(yōu)化,，我們可以把激光束變得更細,，使能量更加集中,，就能讓激光穿透更深。關(guān)于標本,，其中影響光傳播的主要是物質(zhì)吸收和散射,，解決這個問題，我們需要對樣本進行透明化處理,。一種方法是運用某種物質(zhì)將標本浸泡,，使其中的物質(zhì)（主要是脂質(zhì)）被破壞或溶解,。另一種方法是運用電泳將脂質(zhì)電解，讓標本“透明度”提高,。高光子密度帶來的高能量容易損傷細胞,，所以雙光子顯微鏡使用高能量鎖模脈沖激光器。這種激光器發(fā)出的激光具有很高的峰值能量和很低的平均能量,，其脈沖達到最大值所持續(xù)的周期只有十萬億分之一秒,，而其頻率可以達到80至100兆赫，這樣即能達到雙光子激發(fā)的高光子密度要求,，又能不損傷細胞,，使掃描能更好地進行。雙光子顯微鏡已成為較厚有生命體生物組織三維成像中不可或缺的工具,。ultima2PPLUS雙光子顯微鏡應(yīng)用是什么

其實電子顯微鏡相比于光學(xué)顯微鏡的重要優(yōu)勢或者存在的比較大意義,，準確的來說，不在于放大倍數(shù),，而在于超高的分辨率,。這兩者是不同的。通俗的來說,，就是進行觀察的時候,，除了要將物體放大，還需要能將它與相鄰的其他物體分辨開來,。如果兩個相鄰微粒的圖像在光學(xué)顯微鏡下,，即使放大到很大，看到的可能卻是兩個相交的亮斑（艾里斑）,，而沒有明顯的界限（更不用說細節(jié)了）,，這表示是分辨率不夠。拋開分辨率談放大倍數(shù)是沒有意義的,。光學(xué)顯微鏡的分辨率極限是阿貝極限,，約等于光波波長的一半，通常被說成是光學(xué)顯微鏡放大極限,，其實準確地來說,，應(yīng)該叫做分辨率的極限。而其產(chǎn)生的原因是光的衍射,，根本原因是光的波粒二象性,。電子衍射實驗證明了電子的波動性，于是用電子代替光的電子顯微鏡成為可能,。電子顯微鏡也有多種,，題主說的是像REM的。電鏡也存在用衍射規(guī)則觀察的,，比如低能電子衍射（LEED）和透射電鏡（TEM）,。兩者主要用于觀察晶體,，根據(jù)其周期性的特點而生成倒易空間里的衍射圖像，借助elward球或者傅里葉變換就可以轉(zhuǎn)換到實空間,，得到真正的晶體表面圖像了,。bruker雙光子顯微鏡熒光探測雙光子顯微鏡能夠在細胞甚至是亞細胞水平上對神經(jīng)細胞的形態(tài)結(jié)構(gòu)、離子濃度,、細胞運動,、進行直接成像監(jiān)測。

從雙光子的原理和特點,，我們可以清楚地得出雙光子的優(yōu)點:☆光損傷小:由于雙光子顯微鏡采用可見光或近紅外光作為激發(fā)光源,，因此該波段的光對細胞和組織的光損傷很小，適合長期研究,；☆穿透能力強:與紫外光相比，可見光和近紅外光的穿透能力更強,，因此受生物組織散射的影響更小,，解決了生物組織深層物質(zhì)的層析成像問題；☆高分辨率:由于雙光子吸收的截面很小,，只能在焦平面很小的區(qū)域激發(fā)熒光,，雙光子吸收被限制在焦點處體積約為波長三次方的范圍內(nèi)；☆漂白區(qū)域小:由于激發(fā)只存在于交點處,，焦點外的區(qū)域不會發(fā)生光漂白,；☆熒光收集率高:與共焦成像相比，雙光子成像不需要濾光片(共焦),，提高了熒光收集率,，直接導(dǎo)致圖像對比度的提高；☆圖像對比度高:由于熒光波長小于入射波長,，瑞利散射產(chǎn)生的背景噪聲*為單光子激發(fā)產(chǎn)生的1/16,，減少了散射的干擾；光子躍遷具有很強的選擇性激發(fā),，因此可以用來對生物組織中的一些特殊物質(zhì)進行成像,；

雙光子熒光顯微鏡是激光掃描共聚焦顯微鏡和雙光子激發(fā)技術(shù)相結(jié)合的新技術(shù)。雙光子激發(fā)的基本原理是:在光子密度較高的情況下,，熒光分子可以同時吸收兩個波長較長的光子,，經(jīng)過短暫的所謂激發(fā)態(tài)壽命后，發(fā)射一個波長較短的光子,；效果和用波長為長波長一半的光子激發(fā)熒光分子是一樣的,。雙(多)光子成像的優(yōu)點是具有更深的組織穿透深度，紅外光可以在平面上探測到極限為1mm的組織區(qū)域,；因為信號背景比高,，所以具有更高的對比度,；由于激發(fā)體積小，具有定點激發(fā),、光毒性小的特點,；激發(fā)波長由紫外、可見光調(diào)整為紅外激發(fā),，更加安全,。雙光子顯微鏡的原理是什么？

雙光子熒光顯微鏡是結(jié)合了激光掃描共聚焦顯微鏡和雙光子激發(fā)技術(shù)的一種新技術(shù),。雙光子激發(fā)的基本原理是：在高光子密度的情況下,，熒光分子可以同時吸收2個長波長的光子，在經(jīng)過一個很短的所謂激發(fā)態(tài)壽命的時間后,，發(fā)射出一個波長較短的光子,；其效果和使用一個波長為長波長一半的光子去激發(fā)熒光分子是相同的。雙（多）光子成像優(yōu)勢在于,，具有更深的組織穿透深度,，利用紅外光，能夠在層面檢測極限達1mm的組織區(qū)域,；因信號背景比高,，而具有更高的對比度；因激發(fā)體積小,，具有定點激發(fā)的特性,，具有更少的光毒性；激發(fā)波長由紫外,、可見光調(diào)整為紅外激發(fā),，使其能夠更加安全。雙光子顯微鏡結(jié)合了雙光子激發(fā)技術(shù)和激光掃描共聚顯微鏡,。國外investigator雙光子顯微鏡應(yīng)用是什么

優(yōu)勢來源于其雙光子光源的非線性光學(xué)效應(yīng),。ultima2PPLUS雙光子顯微鏡應(yīng)用是什么

配合雙光子激發(fā)技術(shù)，激光共聚掃描顯微鏡則能更好得發(fā)揮功效,。那么,，什么是雙光子激發(fā)技術(shù)呢？在高光子密度的情況下,，熒光分子可以同時吸收2個長波長的光子使電子躍遷到較高能級,，經(jīng)過一個很短的時間后，電子再躍遷回低能級同時放出一個波長為長波長一半的光子（P=h/λ）,。利用這個原理,，便誕生了雙光子激發(fā)技術(shù)。雙光子顯微鏡使用長波長脈沖激光，通過物鏡匯聚,，由于雙光子激發(fā)需要很高的光子密度,，而物鏡焦點處的光子密度是比較高的，所以只有在焦點處才能發(fā)生雙光子激發(fā),，產(chǎn)生熒光,，該點產(chǎn)生的熒光再穿過物鏡，被光探頭接收,，從而達到逐點掃描的效果,。ultima2PPLUS雙光子顯微鏡應(yīng)用是什么