對(duì)單細(xì)胞形態(tài)與功能關(guān)系的研究,，將膜片鉗技術(shù)與單細(xì)胞逆轉(zhuǎn)錄多聚酶鏈?zhǔn)欠磻?yīng)技術(shù)結(jié)合,，在全細(xì)胞膜片鉗記錄下,，將單細(xì)胞內(nèi)容物或整個(gè)細(xì)胞（包括細(xì)胞膜）吸入電極中,，將細(xì)胞內(nèi)存在的各種mRNA全部快速逆轉(zhuǎn)錄成cDNA,，再經(jīng)常規(guī)PCR擴(kuò)增及待檢的特異mRNA的檢測(cè),，借此可對(duì)形態(tài)相似而電活動(dòng)不同的結(jié)果做出分子水平的解釋或?yàn)閱渭?xì)胞逆轉(zhuǎn)錄多聚酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)提供標(biāo)本,，為同一結(jié)構(gòu)中形態(tài)非常相似但功能不同的事實(shí)提供分子水平的解釋,。目前國際上掌握此技術(shù)的實(shí)驗(yàn)室較少,，我國北京大學(xué)神經(jīng)科學(xué)研究所于1994年在國內(nèi)率先開展,。屯流鉗素向細(xì)胞內(nèi)注入刺激電流，記錄膜電位對(duì)刺激電流的反應(yīng),。進(jìn)口雙電極膜片鉗實(shí)驗(yàn)操作

離子選擇性（selectivity）（大小和電荷）∶某一種離子只能通過與其相應(yīng)的通道跨膜擴(kuò)散（安靜∶K＞Na100倍,、興奮;Na＞K10-20倍）;各離子通道在不同狀態(tài)下，對(duì)相應(yīng)離子的通透性不同,。門控特性（Gating）∶失活狀態(tài)不僅是通道處于關(guān)閉狀態(tài),，而且只有在經(jīng)過一個(gè)額外刺激使通道從失活關(guān)閉狀態(tài)進(jìn)入靜息關(guān)閉狀態(tài)后，通道才能再度接受外界刺激而***開放,。離子通道的功能(FunctionoflonChannels)1.產(chǎn)生細(xì)胞生物電現(xiàn)象,，與細(xì)胞興奮性相關(guān)。2.神經(jīng)遞質(zhì)的釋放,、腺體的分泌,、肌肉的運(yùn)動(dòng)、學(xué)習(xí)和記憶3.維持細(xì)胞正常形態(tài)和功能完整性膜離子通道的基因變異及功能障礙與許多疾病有關(guān),，某些先天性與后天獲得性疾病是離子通道基因缺陷與功能改變的結(jié)果,，稱為離子通道病（ionchannelpathies）,。進(jìn)口單通道膜片鉗電流鉗制膜片鉗技術(shù)實(shí)現(xiàn)了小片膜的孤立和高阻封接的形成,。

不同的全自動(dòng)膜片鉗技術(shù)所采用的原理如PopulationPatchClamp技術(shù)∶同SealChip技術(shù)一樣，完全摒齊了玻璃電極,，而是采用PatchPlate平面電極芯片,。該芯片含有多個(gè)小室，每個(gè)小室中含有很多1-2μm的封接孔,。在記錄時(shí),，每個(gè)小室中封接成功的細(xì)胞|數(shù)目較多，獲得的記錄是這些細(xì)胞通道電流的平均值,。因此,，不同小室其通道電流的一致性非常好，變異系數(shù)很小,。美國Axon（MDS）公司采用這一技術(shù)研發(fā)出了全自動(dòng)高通量的lonWorksQuattro系統(tǒng),，成為藥物初期篩選的金標(biāo)準(zhǔn)

在膜片鉗技術(shù)的發(fā)展過程中主要形成了五種記錄模式，即細(xì)胞貼附模式（cell-attachedmode或loose-seal-cellattachedmode）,、膜內(nèi)面向外模式（inside-outmode）,、膜外面向外模式（outside-outmode）、常規(guī)全細(xì)胞模式（conventionalwhole-cellmode）和穿孔膜片模式（perforatedpatchmode）,。a.亞細(xì)胞水平：細(xì)胞貼附模式,，可記錄通過電極下膜片中通道蛋白的離子電流(紅色虛線箭頭)。在全細(xì)胞膜片鉗中,，膜片破裂,，因此可以記錄全細(xì)胞的宏觀電流,，它表示整個(gè)細(xì)胞的總和電流(藍(lán)色虛線箭頭)。b.細(xì)胞水平：來自神經(jīng)元不同部分的全細(xì)胞同步記錄可確定信號(hào)傳遞的方向,。c.神經(jīng)元網(wǎng)絡(luò)水平：全細(xì)胞記錄可以在一個(gè)連接神經(jīng)元的小網(wǎng)絡(luò)中進(jìn)行。d.活物水平：可以在執(zhí)行任務(wù)或自由走動(dòng)的動(dòng)物大腦中進(jìn)行全細(xì)胞記錄,。探索離子通道的舞動(dòng),，膜片鉗是您的科學(xué)利器！

膜片鉗技術(shù)的建立1.拋光及填充好玻璃管微電極,，并將它固定在電極夾持器中,。2.通過一個(gè)與電極夾持器連接的導(dǎo)管給微電極內(nèi)一個(gè)壓力，一直到電極浸入記錄槽溶液中,。3.當(dāng)電極浸沒在溶液中時(shí)給電極一個(gè)測(cè)定脈沖（命令電壓,，如5-10ms，10mV）讀出電流,，按照歐姆定律計(jì)算電阻,。4.通過膜片鉗放大器的控制鍵將微電極前列的連接電位（junctionpotentials）調(diào)至零位，這種電位差是由于電極內(nèi)填充溶液與浸浴液不同離子成分的遷移造成的,。5.用微操縱器將微電極前列在直視下靠近要記錄的細(xì)胞表面,，并觀察電流的變化，直至阻抗達(dá)到1GΩ以上形成"干兆封接"6.調(diào)整靜息膜電位到期望的鉗位電壓的水平,，使放大器從"搜尋"轉(zhuǎn)到"電壓鉗"時(shí)細(xì)胞不至于鉗位到零,。滔博生物TOP-Bright專注基于多種離子通道靶點(diǎn)的化合物體外篩選,服務(wù)于全球藥企的膜片鉗公司,快速獲得實(shí)驗(yàn)結(jié)果,專業(yè)團(tuán)隊(duì),7*36小時(shí)隨時(shí)人工在線咨詢.典型的單通道電流呈一種振幅相同而持續(xù)時(shí)間不等的脈沖樣變化。美國單電極膜片鉗系統(tǒng)

這是一種以記錄通過離子通道的離子電流來反映細(xì)胞膜單一的或多個(gè)的離子通道分子活動(dòng)的技術(shù),。進(jìn)口雙電極膜片鉗實(shí)驗(yàn)操作

資料分析：一般電學(xué)性質(zhì)∶通過I/V關(guān)系計(jì)算得到單通道電導(dǎo),，觀察通道有無整流。通過離子選擇性,、翻轉(zhuǎn)電位或其它通道的條件初步確定通道類型,。通道動(dòng)力學(xué)分析∶開放時(shí)間、開放概率,、關(guān)閉時(shí)間,、通道的時(shí)間依賴性失活、開放與關(guān)閉類型（簇狀猝發(fā),，Burst）樣開放與閃動(dòng)樣短暫關(guān)閉（flickering）,，化學(xué)門控性通道的開、關(guān)速率常數(shù)等數(shù)據(jù),。藥理學(xué)研究∶研究的藥物,，阻斷劑、激動(dòng)劑或其它調(diào)制因素對(duì)通道活動(dòng)的影響情況,。綜合分析得出結(jié)淪,。進(jìn)口雙電極膜片鉗實(shí)驗(yàn)操作