生產(chǎn)上一般采用冷水噴淋冷卻，冷卻到40-50℃后,，輸送到預(yù)先已經(jīng)**過(guò)的罐內(nèi),。（四）、間歇**與連續(xù)**的比較1,、歇**的***和缺點(diǎn)***是設(shè)備要求低,，不需另外設(shè)置加熱、冷卻裝置,；操作要求低,，適于手動(dòng)操作，適合于小批量生產(chǎn)規(guī)模,；適合于含有大量固體物質(zhì)的培養(yǎng)基的**,。缺點(diǎn)是培養(yǎng)基的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)損失較多，**后培養(yǎng)基的質(zhì)量下降,；需進(jìn)行反復(fù)的加熱和冷卻,，能耗較高；不適合于大規(guī)模生產(chǎn)過(guò)程的**,；發(fā)酵罐的利用率較低,。2、連續(xù)**的***和缺點(diǎn)***是**溫度高,，可減少培養(yǎng)基中營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的損失,；操作條件恒定,，**質(zhì)量穩(wěn)定；易于實(shí)現(xiàn)管道化和自控操作,；避免了復(fù)的加熱和冷卻,，提高了熱的利用率；發(fā)酵設(shè)備利用率高,。缺點(diǎn)是對(duì)設(shè)備的要求高，需另外設(shè)置加熱,、冷卻裝置,；操作較麻煩；染菌的機(jī)會(huì)較多,；不適合于含大量固體物料的**,；對(duì)蒸汽的要求高。由此可見(jiàn),，無(wú)論在理論上或者在實(shí)踐上,，與間歇**過(guò)程相比，連續(xù)**的***十分明顯,。因此,，連續(xù)**越來(lái)越多地被用培養(yǎng)基的**。減血清培養(yǎng)基減少了血清中的未知因素對(duì)細(xì)胞的影響,。山西DMEM高糖培養(yǎng)基有哪些

    1),、初代培養(yǎng)：繡球外植體，將葉片剪去,，自來(lái)水沖洗干凈,。在超凈工作臺(tái)上把已經(jīng)沖洗干凈的外植體浸入75％酒精中消毒30s，用無(wú)菌水沖洗3～4次,。使用白貓漂白水和無(wú)菌水按1：4的體積比配制消毒液,，將外植體放入消毒液浸泡40min，其中白貓漂白水為上海白貓(集團(tuán))有限公司生產(chǎn)的“白貓”牌家用漂白水,。消毒完成,，將外植體接種到誘導(dǎo)培養(yǎng)基中培養(yǎng)，建立無(wú)菌再生系統(tǒng),，誘導(dǎo)培養(yǎng)環(huán)境為光照強(qiáng)度1500lx條件下,，溫度25℃，光照時(shí)間16h,；黑暗條件下,，溫度23℃，光照時(shí)間8h,，培養(yǎng)6～8周,。其中誘導(dǎo)培養(yǎng)基為ms+～～,，誘導(dǎo)培養(yǎng)基的ph值為。(2),、繼代培養(yǎng)：以建立的無(wú)菌再生系統(tǒng)為對(duì)象,，將無(wú)菌外植體轉(zhuǎn)接到增殖培養(yǎng)基，其中增殖培養(yǎng)基為ms+～～,，培養(yǎng)環(huán)境為光照強(qiáng)度1500lx條件下,，溫度25℃，光照時(shí)間16h,；黑暗條件下,，溫度23℃，光照時(shí)間8h,，培養(yǎng)8～12周,。每隔8～12周轉(zhuǎn)接入新的增殖培養(yǎng)基，增殖培養(yǎng)基的ph值為,。(3),、生根培養(yǎng)：經(jīng)過(guò)繼代培養(yǎng)的繡球組培苗，取2～3cm的頂芽,，放入生根培養(yǎng)基,，其中生根培養(yǎng)基為1/2ms+～～，生根培養(yǎng)基的ph值為,。誘導(dǎo)培養(yǎng)環(huán)境為光照強(qiáng)度1500lx條件下,，溫度25℃，光照時(shí)間16h,；黑暗條件下,，溫度23℃，光照時(shí)間8h,，培養(yǎng)8～12周,。。培養(yǎng)基價(jià)目表MEM培養(yǎng)基提供了細(xì)胞生長(zhǎng)所需的基本營(yíng)養(yǎng)成分,。

    按中華******典2005年版二部附錄ⅧL干燥失重測(cè)定法進(jìn)行,。滲透壓溶劑通過(guò)半透膜由低濃度向高濃度溶液擴(kuò)散的現(xiàn)象稱(chēng)為滲透，阻止?jié)B透所需施加的壓力,，稱(chēng)為滲透壓,。細(xì)胞必須生活在等滲環(huán)境中，動(dòng)物細(xì)胞借助K＋,、Na＋維持滲透平衡,。大多數(shù)細(xì)胞對(duì)滲透壓有一定的耐受性。但是培養(yǎng)液滲透壓過(guò)高容易使細(xì)胞脫水萎縮，培養(yǎng)液滲透壓過(guò)低容易使細(xì)胞膨脹破裂,，因此要控制培養(yǎng)基的滲透壓范圍,。按中華******典2005年版二部附錄ⅨG滲透壓摩爾濃度測(cè)定法進(jìn)行。**內(nèi)*****內(nèi)***是許多病原性**所產(chǎn)生的***,。它的特殊性在于不是**或**的代謝產(chǎn)物,，而是**死亡或解體后才釋放出來(lái)的一種具有生物活性的物質(zhì)。培養(yǎng)基**內(nèi)***過(guò)高,，對(duì)生物制品*苗（如狂犬,、乙肝*苗）、基因工程*品等注射用的*品都需要檢查**內(nèi)***,。因此本項(xiàng)目的檢驗(yàn)符合生物制品質(zhì)量控制要求,。常規(guī)細(xì)胞培養(yǎng)基的**內(nèi)***標(biāo)準(zhǔn)定為＜10EU/ml。稱(chēng)取本品規(guī)定量（見(jiàn)表4-12）的1/100,，加入**內(nèi)***檢查用水10mL溶解，吸取該溶液mL加**內(nèi)***檢查用水mL,，混勻即得試樣,。按中華******典2005年版二部附錄ⅪE**內(nèi)***檢查法中的凝膠法進(jìn)行。微生物限度細(xì)胞培養(yǎng)基不是無(wú)菌產(chǎn)品,，其中的微生物在一定條件下會(huì)吸收細(xì)胞培養(yǎng)基中的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)滋生繁殖,。

    K+主要分布在細(xì)胞內(nèi)液，細(xì)胞內(nèi)K+對(duì)于***某些酶是必需的,，并在調(diào)節(jié)細(xì)胞內(nèi)環(huán)境的酸堿平衡上也有極重要意義,。Ca2+在細(xì)胞外液中的作用是將**內(nèi)部細(xì)胞之間相互粘著，在細(xì)胞內(nèi)參與許多重要的細(xì)胞生理活動(dòng),，如傳導(dǎo),、參與肌肉細(xì)胞收縮等。在懸浮培養(yǎng)時(shí),，為了減少細(xì)胞的聚集和附著,，要減少Ca2+的濃度。Mg2+是構(gòu)成細(xì)胞間質(zhì)的重要成分,，對(duì)于細(xì)胞間相互穩(wěn)定結(jié)合有很重要的意義,。磷的化合物對(duì)細(xì)胞物質(zhì)代謝和生理功能調(diào)控有重要作用。其他成分：肽,、核苷,、嘌呤等?？蓭椭?xì)胞的克隆化培養(yǎng)及維持某些特殊細(xì)胞系的生長(zhǎng),。分類(lèi)低血清細(xì)胞培養(yǎng)基概述營(yíng)養(yǎng)豐富的培養(yǎng)基是維持細(xì)胞活性及高密度生長(zhǎng)的基礎(chǔ)，營(yíng)養(yǎng)缺乏容易引起細(xì)胞凋亡，新生牛血清中所含大部分營(yíng)養(yǎng)成分可以通過(guò)化學(xué)成分明確的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)如氨基酸維生素等成分組合取代,。低血清培養(yǎng)基營(yíng)養(yǎng)成分大優(yōu)于基礎(chǔ)培養(yǎng)基,，*需添加1％～5％新生牛血清，而對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng),、增殖,、形態(tài)、活性和功能沒(méi)有影響甚至有所改善,。在國(guó)外低血清培養(yǎng)基早已有之,，如Gibco等。但是他們的低血清培養(yǎng)基是在基礎(chǔ)培養(yǎng)基中選擇性的加入重組胰島素（recombinantinsulin）,、人源轉(zhuǎn)鐵蛋白（human(holo)tran-sferrin）以及牛血清白蛋白等,，有些還包含一些生長(zhǎng)因子。MEM培養(yǎng)基常用于多種哺乳動(dòng)物細(xì)胞的體外培養(yǎng),。

    這些重組蛋白和動(dòng)物來(lái)源成分對(duì)生物制品的安全性有很大影響,。成本低。主要用途應(yīng)用案例采用199(SLM),、MEM(SLM)和DMEM（SLM）低血清培養(yǎng)基分別培養(yǎng)Vero細(xì)胞,、BHK21細(xì)胞和CHO細(xì)胞，新生牛血清用量可以從10％降至3％,，減少新生牛血清使用批次和批間差的影響,，減少生物制品純化損失，減少由于不確定蛋白或者其它血清組分帶來(lái)干擾和差異的風(fēng)險(xiǎn),，提高制品安全性,。低血清培養(yǎng)基可以在方瓶、3L轉(zhuǎn)瓶,、15L轉(zhuǎn)瓶及生物反應(yīng)器中培養(yǎng)細(xì)胞,，在*苗生產(chǎn)中可以達(dá)到低血清高密度的培養(yǎng)效果。低血清培養(yǎng)基營(yíng)養(yǎng)成分優(yōu)于基礎(chǔ)培養(yǎng)基,，易使細(xì)胞增殖迅速,，代謝旺盛，代謝產(chǎn)物對(duì)細(xì)胞有不良影響,，易產(chǎn)生細(xì)胞老化脫落現(xiàn)象,。因此需要適當(dāng)增加換液次數(shù)，增加傳代頻率,。獲取同樣的細(xì)胞量,，用低血清培養(yǎng)基將比用傳統(tǒng)培養(yǎng)基縮短近1/3的時(shí)間，可提高生產(chǎn)效率,。采用199(SLM)低血清培養(yǎng)基培養(yǎng)Vero細(xì)胞分泌狂犬*苗病毒,，滴度明顯高于采用199培養(yǎng)基傳統(tǒng)培養(yǎng)獲得的滴度。采MEM(SLM)低血清培養(yǎng)基BHK21細(xì)胞，在本實(shí)驗(yàn)情況下12代內(nèi)細(xì)胞形態(tài)和致密度均優(yōu)于MEM培養(yǎng)基傳統(tǒng)培養(yǎng)情況,，因而可以預(yù)期其產(chǎn)生的口蹄*,、甲肝等*苗生產(chǎn)的病毒產(chǎn)量將提高。低血清培養(yǎng)基用于反應(yīng)器Vero細(xì)胞狂犬*苗的生產(chǎn),，實(shí)踐證明效果良好,。采DMEM。減血清培養(yǎng)基減少了血清成分的變異性,。河南無(wú)血清培養(yǎng)基常用知識(shí)

使用減血清培養(yǎng)基減少了實(shí)驗(yàn)中血清帶來(lái)的變異性,。山西DMEM高糖培養(yǎng)基有哪些

    已發(fā)現(xiàn)當(dāng)培養(yǎng)基中的血清濃度減少時(shí)，這些成分都是必需的,。既使在使用血清的情況下,，這些成分也可幫助細(xì)胞的克隆化培養(yǎng)及維持某些特殊細(xì)胞系的生長(zhǎng)。***和生長(zhǎng)因子在大多數(shù)常規(guī)培養(yǎng)基的配方中都沒(méi)有注明,，但在無(wú)血清培養(yǎng)基中通常要加入它們,，用其來(lái)代替血清中的***能增加多種不同類(lèi)型細(xì)胞的貼瓶率；生長(zhǎng)因子包括FGF家族,、EGF,、PDGF、IGF－1和IGF－2及白介素等,，生長(zhǎng)因子和細(xì)胞因子有著***的特異性，一般與***或其它物質(zhì)起相互協(xié)同或加成作用,。另一種常見(jiàn)的添加物就是血清替代物,，目前已有許多可完全或部分替代傳統(tǒng)培養(yǎng)液中血清成分的商業(yè)產(chǎn)品，其穩(wěn)定性較好,，但批次間仍有差別,，產(chǎn)品的成分也不很確定。干粉培養(yǎng)基原倍液的配制1）配制過(guò)濾**的細(xì)胞培養(yǎng)基(1)閱讀培養(yǎng)基使用說(shuō)明,，確定需要添加何種添加劑（如NaHCO3,、L-谷氨酰胺、**酸鈉,、HEPES等）,。(2)根據(jù)所需將培養(yǎng)基全部倒入一容器中，用少量注射用水（20℃～30℃）將袋內(nèi)殘留培養(yǎng)基洗下,，并入容器,。加注射用水至總體積的95％，輕微攪拌溶解,。(3)加入規(guī)定量的碳酸氫鈉及所要添加的物質(zhì),。(4)輕微攪拌溶解，加注射用水至規(guī)定體積。(5)用1mol/L氫氧化鈉溶液或1mol/L鹽酸溶液調(diào)pH至所需值,。(6)用μm濾膜正壓過(guò)濾**,。。山西DMEM高糖培養(yǎng)基有哪些