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③待分離膠完全聚合后,，傾去其頂部的去離子水,，用濾紙將水吸干,。④配制4％濃縮膠5mL,，加TEMED5μL、10％APS50μL,，混勻立即灌膠,，灌至頂部，并垂直插入Teflon齒梳,，室溫靜置20min待膠聚合,。⑤待膠完全聚合后拔出梳子，將凝膠置于電泳槽中,，加入電泳緩沖液,，用電泳緩沖液沖洗上時(shí)間就是金錢(qián)，效率就是生命唯有惜時(shí)才能成功,，唯有努力方可成就樣孔以去除氣泡,。2電泳①取各個(gè)處理組蛋白提取液，調(diào)整蛋白濃度為6μg/μL,，和等體積2上樣緩沖液混合,，即為上樣液。②將上樣液于100℃沸水中煮沸5min,，使蛋白變性,，冰上驟冷，3000轉(zhuǎn)/min離心1min,。③每孔加上樣液15μL,，留一孔加10μL預(yù)染的Marker。加滿(mǎn)電泳緩沖液，蓋上槽蓋,，接通電源,，先用80v恒壓電泳，約20min,，當(dāng)指示劑溴酚藍(lán)進(jìn)入分離膠后改用110v恒壓電泳,，當(dāng)指示劑到達(dá)距凝膠下端約處時(shí)關(guān)閉電源，取出膠板,。3轉(zhuǎn)印蛋白及免疫檢測(cè)①在電泳即將結(jié)束前,，預(yù)先將PVDF膜浸泡在甲醇中15s，然后用ddH2O漂洗2min,，浸泡于轉(zhuǎn)移緩沖液中5min后開(kāi)始后續(xù)操作,。②在水中撬膠，修膠后將膠浸泡于轉(zhuǎn)移緩沖液中平衡15min,。③按黑面（負(fù)極）→海綿→濾紙→膠→PVDF膜→濾紙→海綿→紅面（正極）的順序制備轉(zhuǎn)膜“三明治”,。第三方檢測(cè)機(jī)構(gòu)哪家比較靠譜？

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