牛痘DNA拓?fù)洚悩?gòu)酶I（VacciniaVirusDNATopoisomeraseI）與細(xì)菌DNA拓?fù)洚悩?gòu)酶的主要區(qū)別如下：1.**來源不同**：-牛痘DNA拓?fù)洚悩?gòu)酶I來源于牛痘病毒，是一種真核生物病毒中的酶,。-細(xì)菌DNA拓?fù)洚悩?gòu)酶則來源于原核生物,，如大腸桿菌的ω蛋白等。2.**功能特性**：-牛痘DNA拓?fù)洚悩?gòu)酶I能夠解旋DNA的超螺旋結(jié)構(gòu),，并且識別并切割雙鏈DNA末端[5’C(T)CCTT],，與DNA形成共價連接形成穩(wěn)定復(fù)合物，遇到DNA的5’-OH基團(tuán)后,，重新連接形成完整DNA鏈,。-細(xì)菌DNA拓?fù)洚悩?gòu)酶，如大腸桿菌的ω蛋白,，主要功能是催化DNA鏈斷開和結(jié)合的偶聯(lián)反應(yīng),，以改變DNA的拓?fù)浣Y(jié)構(gòu)。3.**活性條件**：-牛痘DNA拓?fù)洚悩?gòu)酶I即使在Mg2+不存在的條件下也顯示活性,。-細(xì)菌DNA拓?fù)洚悩?gòu)酶可能需要Mg2+等金屬離子作為輔因子來發(fā)揮活性,。4.**作用的DNA鏈**：-牛痘DNA拓?fù)洚悩?gòu)酶I能使正負(fù)兩方的超螺旋分子均形成松散型。-原核生物由來的DNA拓?fù)洚悩?gòu)酶I只作用負(fù)鏈的超螺旋分子,。5.**共價鍵形成**：-牛痘DNA拓?fù)洚悩?gòu)酶I與DNA形成共價連接,，此酯鍵中所貯存的能量可能在切斷端的再結(jié)合上起著作用。-細(xì)菌DNA拓?fù)洚悩?gòu)酶在原核生物中是游離型的5′-OH末端扣3′-磷酸末端與酶形成共價鍵,。

UDG在結(jié)構(gòu)上屬于單功能DNA糖基化酶,，它通過沿著DNA鏈滑動，識別尿嘧啶分子,，進(jìn)行堿基切除,。Recombinant Biotinylated Human TPBG/5T4 Protein,His-Avi Tag

牛痘DNA拓?fù)洚悩?gòu)酶I（VacciniaVirusDNATopoisomeraseI）是一種來源于牛痘病毒的I型真核拓?fù)洚悩?gòu)酶,，具有以下功能和應(yīng)用：1.**功能**：-牛痘DNA拓?fù)洚悩?gòu)酶I可以催化雙鏈DNA分子中單鏈DNA特定序列位置的磷酸二酯鍵的斷開和連接,。-具有解超螺旋的酶(DNARelaxingEnzyme)活性，能夠通過快速的酶切和連接使雙鏈共價閉合環(huán)狀的正或負(fù)超螺旋DNA發(fā)生解超螺旋,，形成含有較少的正或負(fù)超螺旋的雙鏈環(huán)狀DNA分子,。-能夠使雙鏈DNA形成繩結(jié)(knotting)或解開繩結(jié)(unknotting)，聯(lián)結(jié)互補(bǔ)的單鏈環(huán)狀DNA成為雙鏈環(huán)狀DNA,。2.**應(yīng)用**：-作為一種DNA重組連接的新型工具酶,，用于DNA載體和重組片段的連接,、缺刻修復(fù)、接頭連接等,。-適用于TOPO克隆載體的制備,、NGS建庫中的接頭連接等。-在TOPO克隆技術(shù)中,，DNA拓?fù)洚悩?gòu)酶I同時具有限制酶和連接酶特性,，其生物學(xué)功能是在復(fù)制期間切割并重新連接DNA。3.**使用方法**：-用于DNA快速酶切流程,，包括配制體系反應(yīng)液,、輕柔混勻、37℃孵育15分鐘等步驟,。4.**儲存條件**：-建議在-25～-15℃保存,，有效期為3年。5.**注意事項**：-避免起泡或劇烈攪拌,、渦旋等操作,，以防止酶失活。牛痘DNA拓?fù)洚悩?gòu)酶I因其獨(dú)特的功能,，在分子生物學(xué)研究和基因工程中扮演著重要的角色,。XeninUBE2L3在調(diào)節(jié)NF-κB信號通路中的作用可能對免疫反應(yīng)和炎癥過程至關(guān)重要。

T5核酸外切酶在基因編輯中確實(shí)有應(yīng)用,，并且具有一些優(yōu)勢：1.**提高編輯效率**：根據(jù)一篇研究文章,，T5核酸外切酶可以與CRISPR/Cas系統(tǒng)共表達(dá)或融合，以提高基因編輯的效率,。這種共表達(dá)或融合可以增加indel（插入和缺失）頻率,，盡管增加的幅度可能不大。2.**增強(qiáng)基因編輯效果**：在另一項研究中,，通過使用螺旋-螺旋二聚體肽（coiled-coilpeptides）將T5核酸外切酶招募到Cas9或Cas12a蛋白上,，可以提高基因編輯的效率，這種方法被稱為CCExo（CRISPR-Coiled-coil-Exonuclease）,。這種招募方式優(yōu)于共表達(dá)和直接融合,，其中強(qiáng)的親和力CC對顯示出高的突變頻率和刪除長度。3.**應(yīng)用于多種細(xì)胞類型**：CCExo系統(tǒng)在多種細(xì)胞系和原代細(xì)胞中都能有效地提高基因失活效率,，并且在慢性髓性白血?。–ML）患者的原代細(xì)胞以及異種移植動物模型中展示了其應(yīng)用潛力，這表明CCExo方法可能成為CML和其他遺傳性疾病的潛在選擇,。T5核酸外切酶與CRISPR核酸酶蛋白進(jìn)行融合,，并引入了核定位信號（NLS）序列以構(gòu)建表達(dá)載體，用于基因編輯,。綜上所述,，T5核酸外切酶在基因編輯中的應(yīng)用可以增強(qiáng)編輯效率和效果,，尤其是在與CRISPR/Cas系統(tǒng)結(jié)合使用時。

CUT&RUN和ChIC是兩種用于研究蛋白質(zhì)-DNA相互作用的技術(shù),，它們有一些關(guān)鍵的區(qū)別：1.**技術(shù)原理**：-**ChIC（ChromatinImmunocleavage）**：ChIC技術(shù)利用抗體將感興趣的蛋白與ProteinA-MNase相結(jié)合來進(jìn)行DNA切割,。ChIC的優(yōu)勢在于使用TF特異性抗體系住MNase，并只在結(jié)合位點(diǎn)裂解,。-**CUT&RUN（CleavageUnderTargetsandReleaseUsingNuclease）**：CUT&RUN技術(shù)則是在核的輕微MNase處理后釋放單核小體和TF-DNA復(fù)合物,，留下寡核小體。CUT&RUN通過在冰上進(jìn)行簡短的消化反應(yīng),，在TF結(jié)合的MNase擴(kuò)散到周邊的基因組和裂解可接近的染色質(zhì)之前在上清中恢復(fù)TF-DNA復(fù)合物,。2.**操作步驟和簡便性**：-**ChIC**：ChIC可能需要甲醛固定操作，這可能重新引入了ChIP-seq的一些問題,，如交聯(lián)導(dǎo)致的DNA和蛋白質(zhì)的化學(xué)修飾,。-**CUT&RUN**：CUT&RUN簡化了操作步驟，使用磁珠固定細(xì)胞核,，適用于新鮮和冷凍組織樣本,，縮短了生成DNA測序文庫的時間（1-2天）。3.**背景信號和信噪比**：-**ChIC**：ChIC產(chǎn)生的背景信號可能較高,，因為它可能涉及到非特異性的DNA切割,。

BstDNAPolymerase,LargeFragment（嗜熱脂肪芽孢桿菌DNA聚合酶大片段）是一種經(jīng)過改造的酶，它來源于嗜熱脂肪芽孢桿菌（Bacillusstearothermophilus）DNA聚合酶I,，通過重組技術(shù)在大腸桿菌中表達(dá)并純化獲得,。這種酶具有5'→3'的DNA聚合酶活性，但不具有5'→3'的核酸外切酶活性,，因此它在等溫擴(kuò)增反應(yīng)中非常有用,，如環(huán)介導(dǎo)的等溫擴(kuò)增（LAMP）和滾環(huán)擴(kuò)增（RCA）等。以下是BstDNAPolymerase,LargeFragment的一些關(guān)鍵特點(diǎn)和應(yīng)用：1.**等溫擴(kuò)增**：BstDNAPolymerase,LargeFragment具有很強(qiáng)的鏈置換能力,，適用于多種等溫擴(kuò)增反應(yīng),，這些反應(yīng)通常在50-68°C之間進(jìn)行，比較好反應(yīng)溫度為65°C,。2.**快速測序**：由于其高聚合酶活性,，BstDNAPolymerase,LargeFragment可以用于快速測序，特別是對于高GC含量的DNA模板或微量（納克量級）DNA模板的測序,。3.**全基因組擴(kuò)增**：BstDNAPolymerase,LargeFragment也可用于全基因組擴(kuò)增（WGA）,，這是一種在不需要熱循環(huán)儀的情況下擴(kuò)增整個基因組DNA的技術(shù)。4.**高dUTP耐受性**：與BstDNAPolymerase2.0相比,，BstDNAPolymerase,LargeFragment在進(jìn)行等溫擴(kuò)增時不具有將dUTP摻入合成的DNA鏈的能力,，這使得它在某些應(yīng)用中更具優(yōu)勢。FnCas12a系統(tǒng)的脫靶效應(yīng)較低,，這對于減少非目標(biāo)效應(yīng)和提高物質(zhì)的安全性至關(guān)重要,。Recombinant Biotinylated Human TPBG/5T4 Protein,His-Avi Tag

在cDNA末端快速擴(kuò)增（RACE）技術(shù)中，Ultra-Long Master Mix 可以用來擴(kuò)增5'和3'末端的長片段cDNA,。Recombinant Biotinylated Human TPBG/5T4 Protein,His-Avi Tag

ExoIII（ExonucleaseIII）和Lambda核酸外切酶（λExonuclease）在DNA末端處理上的主要不同點(diǎn)如下：1.**作用方向**：-**ExoIII**：具有3'→5'外切脫氧核糖核酸酶活性,，它從DNA鏈的3'-OH末端逐步切去單核苷酸。-**Lambda核酸外切酶**：是一種5'→3'核酸外切酶,，能選擇性地沿5'→3'方向消化5'端磷酸化的雙鏈DNA,。2.**底物特異性**：-**ExoIII**：適底物是平末端或5'末端突出的DNA，但也可以作用于雙鏈DNA切刻位點(diǎn)產(chǎn)生單鏈缺口。由于對單鏈DNA無活性，因此難以切割3'突出末端,。-**Lambda核酸外切酶**：適底物是5'磷酸化的雙鏈DNA,，對單鏈DNA和5'端未磷酸化修飾的DNA的酶切活性較低，不能從DNA的切刻或缺口處起始消化,。3.**活性差異**：-**ExoIII**：對具有3'-突出末端(至少有4個堿基，且具有3'-末端C殘基)的DNA、單鏈DNA,、硫代磷酸酯連接的核苷酸無活性。-**Lambda核酸外切酶**：對5'-OH端的切割速度比5'-P端慢約20倍,；對單鏈DNA的酶切速度比雙鏈DNA慢約100倍,。4.**應(yīng)用場景**：-**ExoIII**：可以用于生產(chǎn)特定方向的單鏈DNA，將線性化DNA設(shè)計成為一端為不切割末端（3'突出端）,，另一端則設(shè)計為易切割末端（平端或5'突出端）,。