作為單細(xì)胞測序的又一個重要里程碑,，BDRhapsody單細(xì)胞捕獲平臺整合了儀器,、試劑盒和基礎(chǔ)信息學(xué)軟件，能精確對接illumina測序儀,，因此可實現(xiàn)大量大細(xì)胞的快速高效標(biāo)記、測序和分析,，獲得單細(xì)胞水平的基因表達(dá)譜和差異情況,，并通過對復(fù)雜細(xì)胞群體進(jìn)行深入細(xì)致分析，繪制大規(guī)模單細(xì)胞表達(dá)圖譜,。以量化細(xì)胞內(nèi)的群體異質(zhì)性,，并逐個鑒定細(xì)胞類型、細(xì)胞狀態(tài)和動態(tài)細(xì)胞躍遷,。除了有望鑒定新的細(xì)胞亞型和稀有細(xì)胞群體,，單細(xì)胞技術(shù)還能更好地了解轉(zhuǎn)錄動態(tài)和基因調(diào)控關(guān)系。搭建多種測序數(shù)據(jù)的生物信息分析平臺,，5000+項目檢驗,，真實可信賴。BD VDJ單細(xì)胞實驗服務(wù)

據(jù)不完全統(tǒng)計，截至2022年6月,，烈冰生物助力發(fā)表單細(xì)胞文章近40篇,，從平臺應(yīng)用比例來看，應(yīng)用10XGenomics和BDRhapsody兩大平臺發(fā)文比例各占50%左右,，研究類型涵蓋疾病發(fā)展,，靶點探索，免疫研究,，神經(jīng)發(fā)育,，干細(xì)胞分化，植物發(fā)育,，退行病變,，糖尿病，COVID-19等等研究,；從發(fā)表期刊水平來看,，烈冰生物聯(lián)合發(fā)表的單細(xì)胞文章，CNS一區(qū)期刊占比在30%以上,，其中包括immunity三篇,，Nature子刊3篇（Naturecellbiology,NaturePlants，Naturecommunication）,風(fēng)濕類領(lǐng)域ARD期刊1篇,，CUT1篇,，AdvancedScience多篇，IF大于10分以上文章占比高達(dá)68.5%,，烈冰專屬單細(xì)胞測序服務(wù)團(tuán)隊,，將與您攜手譜寫下一篇“高分”新文章。杭州scRNA單細(xì)胞多組學(xué)測序烈冰實驗室包含從樣本處理到測序下機(jī)的全套實驗平臺,。

根據(jù)烈冰多年單細(xì)胞測序服務(wù)經(jīng)驗,，為什么不建議您一味的追求高細(xì)胞數(shù)量的捕獲：單細(xì)胞測序所有的分析都是基于細(xì)胞聚類進(jìn)行，而細(xì)胞聚類是在區(qū)分cell和non-cell后,，獲得細(xì)胞基因表達(dá)譜,，通過降維（pca），無監(jiān)督聚類以及可視化（t-SNE）得到的,。進(jìn)行細(xì)胞聚類時需要考慮到每個細(xì)胞的基因表達(dá)模式,，因此即使是相同的數(shù)據(jù)，在剔除幾個細(xì)胞的情況下,，前后獲得的聚類圖也會出現(xiàn)明顯不同,。而當(dāng)細(xì)胞捕獲數(shù)過多時，無論是假陰性和假陽性數(shù)據(jù)還是多細(xì)胞數(shù)據(jù),，都會對正常細(xì)胞聚類產(chǎn)生影響,，造成聚類結(jié)果失真,。這也是很多文章，特別是很多高分文章,，為什么單個樣本捕獲細(xì)胞數(shù)在2000-3000的原因了,。烈冰建議單個樣本捕獲細(xì)胞數(shù)在3000-5000個時，數(shù)據(jù)量在100G左右時,，可以滿足分析和文章發(fā)表的多重需求,。

針對單細(xì)胞測序的細(xì)胞上樣數(shù)，為什么不建議捕獲到的細(xì)胞數(shù)量越高越好,？一味地追求高數(shù)量的細(xì)胞捕獲可能會存在一些問題,。例如在上機(jī)細(xì)胞懸液濃度固定時，如果目標(biāo)細(xì)胞捕獲數(shù)增加到8000甚至10000,，上樣細(xì)胞懸液體積勢必增加,，在細(xì)胞懸液質(zhì)量不是很理想（細(xì)胞活性5%、結(jié)團(tuán)率均>5%）的情況下,，引入的背景信號會增加,，分析結(jié)果不理想的直接體現(xiàn)包括：cell、non-cell無法有效區(qū)分和Fractionreadsincells偏低,。當(dāng)cell和non-cell無法有效區(qū)分時,，會使得數(shù)據(jù)出現(xiàn)假陽性和假陰性結(jié)果！當(dāng)目標(biāo)細(xì)胞捕獲數(shù)很大時,，多細(xì)胞率會增加,，數(shù)據(jù)分析時，此部分“cell”表現(xiàn)為基因檢測數(shù)和UMI檢測數(shù)是正常cell的N倍（N是一個GEM包裹的細(xì)胞數(shù)）,，導(dǎo)致所有細(xì)胞的統(tǒng)計數(shù)據(jù)（單個細(xì)胞基因檢測中位數(shù),、單個細(xì)胞UMI檢測中位數(shù)）虛高。此部分“cell”雖然可以通過設(shè)置數(shù)據(jù)分析閾值進(jìn)行過濾,，但是容易會有此類數(shù)據(jù)的殘留和正常高基因檢測細(xì)胞的人為去除,！附加流式分選細(xì)胞表面Marker，對于較低分辨率的標(biāo)志物也能有效鑒定,，助力高要求測序項目,。

樣本制備后的保存為了盡可能地減少轉(zhuǎn)錄組的變化，在對細(xì)胞進(jìn)行清洗和計數(shù)后,，單細(xì)胞懸液應(yīng)當(dāng)保存于冰上，直至用于后續(xù)的上機(jī)和文庫制備步驟,。在理想狀況下,，一旦制備好樣本，應(yīng)當(dāng)在3min鐘內(nèi)將其用于下游步驟,。然而,，您還有必要了解各類細(xì)胞的不同性質(zhì),，因為這可能會影響細(xì)胞應(yīng)在冰上保存的時間，以及它們在制備后多久便應(yīng)當(dāng)被盡快使用,。例如,，有些細(xì)胞（如PBMC）如果在冰上放置一段時間，它們就開始形成團(tuán)塊,。這些團(tuán)塊很難解離,，增加了堵塞的風(fēng)險，而且每個團(tuán)塊被當(dāng)成單細(xì)胞計數(shù),，又降低了細(xì)胞計數(shù)的準(zhǔn)確性,。此外，有些細(xì)胞更加粘稠,，形成團(tuán)塊的速度更快,。對于這些細(xì)胞，必須盡量減少制備和使用之間的時間差,。全線搭建BD Rahpsody單細(xì)胞測序平臺,。南通BD VDJ單細(xì)胞測序公司

烈冰生物成立于2010年，專注于單細(xì)胞測序領(lǐng)域科研服務(wù),。BD VDJ單細(xì)胞實驗服務(wù)

關(guān)于BDRhapsody單細(xì)胞平臺的樣本類型和樣本制備：在上機(jī)前需要注意細(xì)胞消化后的細(xì)胞團(tuán)塊,，獲得分離良好的細(xì)胞懸液、且細(xì)胞活力高（＞70%）,；此外,，了解您所研究細(xì)胞的大小范圍也很重要。細(xì)胞大小通常與細(xì)胞表達(dá)的轉(zhuǎn)錄本數(shù)量有關(guān),。各種尺寸不同的細(xì)胞（一般直徑不大于50μm）均可與我們基因表達(dá)解決方案中使用的BDRhapsody平臺兼容,。一般來說，細(xì)胞制備方案將根據(jù)組織來源和細(xì)胞類型而變化,。每種組織類型都是獨特的,，因此，必須在開始任何單細(xì)胞實驗之前優(yōu)化樣本制備,，烈冰多年樣本解離消化經(jīng)驗,，累積10+物種、50+組織的消化protocol,，若您的樣本為組織,，且尚未成功將組織樣本消化成單細(xì)胞懸液，烈冰將盡可能提供技術(shù)及實驗上的幫助,。BD VDJ單細(xì)胞實驗服務(wù)

上海烈冰生物醫(yī)藥科技有限公司是一家有著雄厚實力背景,、信譽可靠、勵精圖治,、展望未來,、有夢想有目標(biāo),，有組織有體系的公司，堅持于帶領(lǐng)員工在未來的道路上大放光明,，攜手共畫藍(lán)圖,，在上海市等地區(qū)的醫(yī)藥健康行業(yè)中積累了大批忠誠的客戶粉絲源，也收獲了良好的用戶口碑,，為公司的發(fā)展奠定的良好的行業(yè)基礎(chǔ),，也希望未來公司能成為*****，努力為行業(yè)領(lǐng)域的發(fā)展奉獻(xiàn)出自己的一份力量,，我們相信精益求精的工作態(tài)度和不斷的完善創(chuàng)新理念以及自強不息,，斗志昂揚的的企業(yè)精神將**上海烈冰生物醫(yī)藥科技供應(yīng)和您一起攜手步入輝煌，共創(chuàng)佳績,，一直以來,，公司貫徹執(zhí)行科學(xué)管理、創(chuàng)新發(fā)展,、誠實守信的方針,，員工精誠努力，協(xié)同奮取,，以品質(zhì),、服務(wù)來贏得市場，我們一直在路上,！