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四川PEI轉染試劑試用裝申請

來源: 發(fā)布時間:2024-07-06

產(chǎn)品簡介Transporter5轉染試劑是一種非GMP等級的即用型線性聚乙烯亞胺(PEI轉染試劑)溶液,由PEIMAX配置而成,,采用0.1umPES無菌過濾器,,完全消除支原體污染風險。Transporter5將DNA縮聚成帶正電荷的復合物,,這些復合物很容易通過內(nèi)吞作用進入細胞,,并且Transporter5-DNA復合物能很好地抵御溶酶體的降解作用,有效提高轉染效率,。適用于工藝開發(fā),、臨床前和早期臨床研究,可無縫過渡到MAXgeneGMP用于商業(yè)化生產(chǎn),。Transporter5轉染試劑能高效地將DNA轉染入HEK-293,、CHO、COS,、HELA,、昆蟲(SF9、SF21)等真核細胞系,,可作用于大到135,000個核苷酸的質(zhì)粒,,所以較大的質(zhì)粒也可以成功地轉染。Transporter5可節(jié)省試劑準備時間,,加快項目進度,。經(jīng)過嚴格的性能檢測,,確保品質(zhì),在新藥研發(fā)過程中是一款快速,、重復性好,、可用于批量產(chǎn)的轉染試劑。Polysciences轉染與遞送相關產(chǎn)品已正式移交Kyfora Bio,,相關產(chǎn)品標簽將變更為Kyfora Bio by Polysciences,,后續(xù)購買請認準備新品牌。用PEI轉染試劑時,,一般和DNA的比例是多少,?四川PEI轉染試劑試用裝申請

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接種細胞:轉染前,用膠原酶(WORTHINGTONG公司LS004196)消化細胞并計數(shù)(不建議用胰酶),。調(diào)整細胞濃度,,將細胞鋪入細胞培養(yǎng)的器皿,每個孔置入的細胞量應能使轉染時細胞匯合度達到70~80%,。2.準備DNA-PEI復合物:DNA,、PEI試劑和稀釋劑在進行以下步驟前需先使其升至室溫。依據(jù)表1所示,,用Opti-MEMITM(Invitrogen)或其他適合的無蛋白培養(yǎng)基稀釋適量DNA,。用同樣的培養(yǎng)基稀釋PEI試劑。每1μgDNA需用1.5-5μL線性PEI轉染試劑(這個需要客戶自行摸索配比,,每一批轉染試劑和每一批DNA比例可能會稍有不同),。一邊輕輕渦旋裝有DNA溶液的試管,一邊將稀釋的線性PEI轉染試劑滴加至試管中(注意:請勿顛倒添加順序),。充分混勻后,,室溫靜置10~25min以形成DNA-PEI復合物。當溶液體積較大時,,請用圓底聚丙烯管,,例如NEST5mL/14mL離心管。3.轉染細胞:直接向每個孔中加入DNA-PEI復合物并輕輕渦旋培養(yǎng)板/培養(yǎng)皿,。在無血清條件下轉染時,,去除生長培養(yǎng)基,替換成無血清培養(yǎng)基,,然后滴DNA-PEI復合物,。轉染1.5h后,添加?體積的包含30%血清的生長培養(yǎng)基,。更多關于Polysciences PEI轉染試劑相關問題,,歡迎咨詢上海曼博生物!申請PEI轉染試劑試用裝歷史悠久PEI轉染試劑是一種穩(wěn)定的具有較高的陽離子電荷密度的有機大分子,。

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PEIMAX——高產(chǎn)工業(yè)化轉染試劑-高度濃縮,,可制備大量轉染試劑Polysciences轉染試劑系列是基于聚乙烯亞胺(Polyethylenimine,,PEI)的產(chǎn)品,因其較高的轉染效果,,已廣泛應用于工業(yè)化生產(chǎn),。聚乙烯亞胺是一種具有較高的陽離子電荷密度的有機大分子,,每相隔二個碳原子,,即每“第三個原子都是質(zhì)子化的氨基氮原子,使得聚合物網(wǎng)絡在任何pH下都能充當有效的“質(zhì)子海綿”(protonsponge)體,。PEI可用作轉染試劑,,它可以縮聚DNA分子形成顆粒并轉染真核細胞。PEIMAX40K是由Polysciences出品的全合成線性聚乙烯亞胺瞬時轉染試劑,。PEIMAX是一款高度濃縮的粉劑,,大量科學家選擇PEIMAX,在內(nèi)部自行制備低成本高效益的PEI轉染試劑,。多年以來,,經(jīng)過眾多業(yè)內(nèi)人士評審的公開研究和出版文獻表明,在HEK293,、CHO和Sf9系統(tǒng)中可獲得很高的轉染效率,,在重組抗體和病毒載體生產(chǎn)中穩(wěn)定性高,可靠性強,。PEIMAX提供從96孔板到200L生物反應器持續(xù)的高基因表達細胞體系,,實現(xiàn)從新藥研發(fā)到工業(yè)化生產(chǎn)的輕松過度。而且與大多數(shù)細胞轉染方案相比,,使用PEIMAX至少可降低40%轉染成本(部分案例可降低90%轉染成本),。也歡迎關注我們的公眾號:Mine-bio查看更多文章

接種細胞:轉染前,用膠原酶(WORTHINGTONG公司LS004196)消化細胞并計數(shù)(不建議用胰酶),。調(diào)整細胞濃度,,將細胞鋪入細胞培養(yǎng)的器皿,每個孔置入的細胞量應能使轉染時細胞匯合度達到70~80%,。2.準備DNA-PEI復合物:DNA,、PEI試劑和稀釋劑在進行以下步驟前需先使其升至室溫。依據(jù)表1所示,,用Opti-MEMITM(Invitrogen)或其他適合的無蛋白培養(yǎng)基稀釋適量DNA,。用同樣的培養(yǎng)基稀釋PEI試劑。每1μgDNA需用1.5-5μL線性PEI轉染試劑(這個需要客戶自行摸索配比,,每一批轉染試劑和每一批DNA比例可能會稍有不同),。一邊輕輕渦旋裝有DNA溶液的試管,一邊將稀釋的線性PEI轉染試劑滴加至試管中(注意:請勿顛倒添加順序),。充分混勻后,,室溫靜置10~25min以形成DNA-PEI復合物,。當溶液體積較大時,請用圓底聚丙烯管,,例如NEST5mL/14mL離心管,。3.轉染細胞:直接向每個孔中加入DNA-PEI復合物并輕輕渦旋培養(yǎng)板/培養(yǎng)皿。在無血清條件下轉染時,,去除生長培養(yǎng)基,,替換成無血清培養(yǎng)基,然后滴DNA-PEI復合物,。轉染1.5h后,,添加?體積的包含30%血清的生長培養(yǎng)基。歡迎關注:Mine-bio,,回復“申請PEI”即可申領試用裝,!


PEI轉染試劑可以轉染哪些細胞?

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1.對于某些類型的細胞如HEK-293,、HEK293T,、NIH/3T3和COS細胞,在轉染前兩天鋪板可顯著提高轉入基因的表達水平,。如果選擇轉染前兩天鋪板,,可適當降低鋪板密度,以確保轉染時細胞的匯合度仍為70~80%,。2.對于接觸抑制敏感的細胞,,可適當降低鋪板密度。3.即使在有蛋白(如10%的血清)存在的情況下,,DNA-PEI復合物仍能轉染細胞,,但是DNA-PEI復合物必須在無蛋白存在的條件下形成。我們推薦使用Opti-MEMITM培養(yǎng)基以達到*轉染效率,。其他的無蛋白培養(yǎng)基則需測試與線性PEI轉染試劑的兼容性,。4.對大多數(shù)細胞來而言,每1μgDNA使用3.0μLEndoFectinTM試劑都能獲得較高轉染效率,。使用者也可嘗試每1μgDNA使用1~4μL體積線性PEI轉染試劑進行優(yōu)化,。



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注意事項質(zhì)粒質(zhì)量:請務必使用高質(zhì)量轉染級無內(nèi)質(zhì)粒(推薦使用QIAGEN或者MN公司去內(nèi)質(zhì)粒提取試劑盒),。通過260nm光吸收測定DNA濃度,260nm/280nm比值確定DNA純度(比值應該在1.8~2.0的范圍之內(nèi)),。如有可能,,請通過瓊脂糖凝膠電泳檢測質(zhì)粒的完整性。細胞條件:使用適當保存和經(jīng)常傳代的健康細胞。確保培養(yǎng)基沒有被細菌,、或支原體污染,。如果細胞是近期復蘇的液氮凍存細胞,請在轉染前至少傳代兩次,。建議使用GIBCO或者78bio公司血清培養(yǎng)細胞,。近期還有PEIfree申請活動,歡迎咨詢上海曼博生物,!如想申請PEI試用裝,,請關注我們:Mine-bio,回復關鍵詞“PEI申請”,,即可參加,!如有更多關于Polysciences轉染試劑相關技術問題,,歡迎咨詢上海曼博生物,!四川PEI轉染試劑試用裝申請