瞬時轉(zhuǎn)染方法1.接種細胞:轉(zhuǎn)染前,,用膠原酶消化細胞并計數(shù)(不建議用胰酶),。調(diào)整細胞濃度,將細胞鋪入細胞培養(yǎng)的器皿,,總體積如表1所示,每個孔置入的細胞量應能使轉(zhuǎn)染時細胞匯合度達到70~80%。2.準備DNA-PEI復合物:DNA,、PEI試劑和稀釋劑在進行以下步驟前需先使其升至室溫,。依據(jù)表1所示,用Opti-MEMITM(Invitrogen)或其他適合的無蛋白培養(yǎng)基稀釋適量DNA,。用同樣的培養(yǎng)基稀釋PEI試劑,。每1μgDNA需用2-5μL線性PEI轉(zhuǎn)染試劑。一邊輕輕渦旋裝有DNA溶液的試管,,一邊將稀釋的線性PEI轉(zhuǎn)染試劑滴加至試管中(注意:請勿顛倒添加順序),。充分混勻后,室溫靜置10~25min以形成DNA-PEI復合物,。當溶液體積較大時,,請用圓底聚丙烯管,例如Falcon5mL/14mL離心管,。3.轉(zhuǎn)染細胞:直接向每個孔中加入DNA-PEI復合物并輕輕渦旋培養(yǎng)板/培養(yǎng)皿,。在無血清條件下轉(zhuǎn)染時,去除生長培養(yǎng)基,,替換成無血清培養(yǎng)基,,然后滴DNA-PEI復合物。轉(zhuǎn)染3h后,,添加?體積的包含30%血清的生長培養(yǎng)基,。4.孵育細胞和分析結(jié)果:在CO2培養(yǎng)箱中37℃下孵育細胞至可以分析檢測。轉(zhuǎn)染后快7h即可檢測到轉(zhuǎn)入基因的表達,。請自行確定檢測時間,。更多關(guān)于Polysciences PEI轉(zhuǎn)染試劑相關(guān)內(nèi)容歡迎咨詢上海曼博生物!PEI轉(zhuǎn)染試劑和其他轉(zhuǎn)染試劑相比有什么優(yōu)勢呢,?線性PEI轉(zhuǎn)染試劑蛋白產(chǎn)量
1.對于某些類型的細胞如HEK-293,、HEK293T、NIH/3T3和COS細胞,,在轉(zhuǎn)染前兩天鋪板可顯著提高轉(zhuǎn)入基因的表達水平,。如果選擇轉(zhuǎn)染前兩天鋪板,可適當降低鋪板密度,,以確保轉(zhuǎn)染時細胞的匯合度仍為70~80%,。2.對于接觸抑制敏感的細胞,可適當降低鋪板密度,。3.即使在有蛋白(如10%的血清)存在的情況下,,DNA-PEI復合物仍能轉(zhuǎn)染細胞,但是DNA-PEI復合物必須在無蛋白存在的條件下形成,。我們推薦使用Opti-MEMITM培養(yǎng)基以達到*轉(zhuǎn)染效率,。其他的無蛋白培養(yǎng)基則需測試與線性PEI轉(zhuǎn)染試劑的兼容性,。4.對大多數(shù)細胞來而言,每1μgDNA使用3.0μLEndoFectinTM試劑都能獲得較高轉(zhuǎn)染效率,。使用者也可嘗試每1μgDNA使用1~4μL體積線性PEI轉(zhuǎn)染試劑進行優(yōu)化,。更多產(chǎn)品信息,歡迎咨詢上海曼博生物,!線性PEI轉(zhuǎn)染試劑蛋白產(chǎn)量PEI轉(zhuǎn)染試劑用什么溶劑配制,?
PEI在于可以應用于體內(nèi)試驗。當初試驗經(jīng)費很有限,,被逼無奈只能放棄脂質(zhì)體2000,,選擇PEI,以至于相當長的時間內(nèi),,轉(zhuǎn)染試驗都不順利,。下面是幾點關(guān)于PEI轉(zhuǎn)染的注意要點:1.PEI的使用量可以參照脂質(zhì)體2000的說明書,所用質(zhì)粒盡量去內(nèi)2.轉(zhuǎn)染時,,一定要把PEI+DMEM加入到質(zhì)粒+DMEM中,,順序不可錯,輕微混勻,,靜止20min3.轉(zhuǎn)染后4小時,,一定要換液!換含有FBS的完全培養(yǎng)液,!因為PEI對細胞毒性太大4.如果后續(xù)試驗涉及到穩(wěn)定篩選,,建議把血清濃度適當提高。PS:事實證明,,PEI是可行的,,已經(jīng)做出穩(wěn)定細胞系了。Polysciences轉(zhuǎn)染與遞送相關(guān)產(chǎn)品已正式移交KyforaBio,,相關(guān)產(chǎn)品標簽將變更為KyforaBiobyPolysciences,,后續(xù)購買請認準備新品牌。更多關(guān)于PEI轉(zhuǎn)染試劑相關(guān)的信息,,可咨詢上海曼博生物醫(yī)藥科技有限公司,!
接種細胞:轉(zhuǎn)染前,用膠原酶(WORTHINGTONG公司LS004196)消化細胞并計數(shù)(不建議用胰酶),。調(diào)整細胞濃度,,將細胞鋪入細胞培養(yǎng)的器皿,每個孔置入的細胞量應能使轉(zhuǎn)染時細胞匯合度達到70~80%,。2.準備DNA-PEI復合物:DNA,、PEI試劑和稀釋劑在進行以下步驟前需先使其升至室溫。依據(jù)表1所示,,用Opti-MEMITM(Invitrogen)或其他適合的無蛋白培養(yǎng)基稀釋適量DNA,。用同樣的培養(yǎng)基稀釋PEI試劑,。每1μgDNA需用1.5-5μL線性PEI轉(zhuǎn)染試劑(這個需要客戶自行摸索配比,每一批轉(zhuǎn)染試劑和每一批DNA比例可能會稍有不同),。一邊輕輕渦旋裝有DNA溶液的試管,,一邊將稀釋的線性PEI轉(zhuǎn)染試劑滴加至試管中(注意:請勿顛倒添加順序)。充分混勻后,,室溫靜置10~25min以形成DNA-PEI復合物。當溶液體積較大時,,請用圓底聚丙烯管,,例如NEST5mL/14mL離心管。3.轉(zhuǎn)染細胞:直接向每個孔中加入DNA-PEI復合物并輕輕渦旋培養(yǎng)板/培養(yǎng)皿,。在無血清條件下轉(zhuǎn)染時,,去除生長培養(yǎng)基,替換成無血清培養(yǎng)基,,然后滴DNA-PEI復合物,。轉(zhuǎn)染1.5h后,添加?體積的包含30%血清的生長培養(yǎng)基,。更多關(guān)于Polysciences PEI轉(zhuǎn)染試劑相關(guān)問題,,歡迎咨詢上海曼博生物!線性的和分支的PEI轉(zhuǎn)染試劑哪個好,?
產(chǎn)品特點:PEIMAX40K是線性聚乙烯亞胺鹽酸鹽形式(LinearPolyethylenimineHydrochloride),,是線性化聚乙烯亞胺PEI25K的升級產(chǎn)品。相比于PEI25K,,PEIMAX40K:1.完全水解(去乙?;?.鹽酸鹽形式,,具更高的水溶特性,;3.含更長連續(xù)性乙烯亞胺片段,其質(zhì)子化氮水平比PEI25K提高11%以上,。應用領(lǐng)域:PEIMAX40K(cat#24765)是一款非GMP等級的PEI轉(zhuǎn)染試劑,,適用于基礎(chǔ)學術(shù)研究和藥物研發(fā)早期階段,以固體粉末形式提供,,需用戶自行配置(詳情見使用方法),。歡迎關(guān)注曼博生物公眾號:Mine-bioPEI轉(zhuǎn)染試劑和脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染試劑的區(qū)別?In vivoPEI轉(zhuǎn)染試劑優(yōu)化方案
有人知道PEI轉(zhuǎn)染試劑的價格嗎,?線性PEI轉(zhuǎn)染試劑蛋白產(chǎn)量
1.對于某些類型的細胞如HEK-293,、HEK293T、NIH/3T3和COS細胞,,在轉(zhuǎn)染前兩天鋪板可顯著提高轉(zhuǎn)入基因的表達水平,。如果選擇轉(zhuǎn)染前兩天鋪板,,可適當降低鋪板密度,以確保轉(zhuǎn)染時細胞的匯合度仍為70~80%,。2.對于接觸抑制敏感的細胞,,可適當降低鋪板密度。3.即使在有蛋白(如10%的血清)存在的情況下,,DNA-PEI復合物仍能轉(zhuǎn)染細胞,,但是DNA-PEI復合物必須在無蛋白存在的條件下形成。我們推薦使用Opti-MEMITM培養(yǎng)基以達到*轉(zhuǎn)染效率,。其他的無蛋白培養(yǎng)基則需測試與線性PEI轉(zhuǎn)染試劑的兼容性,。4.對大多數(shù)細胞來而言,每1μgDNA使用3.0μLEndoFectinTM試劑都能獲得較高轉(zhuǎn)染效率,。使用者也可嘗試每1μgDNA使用1~4μL體積線性PEI轉(zhuǎn)染試劑進行優(yōu)化,。更多關(guān)于PEI轉(zhuǎn)染試劑相關(guān)產(chǎn)品問題,歡迎咨詢上海曼博生物,!歡迎關(guān)注我們的公眾號Mine-bio線性PEI轉(zhuǎn)染試劑蛋白產(chǎn)量