對于某些類型的細胞如HEK-293,、HEK293T、NIH/3T3和COS細胞,,在轉(zhuǎn)染前兩天鋪板可顯著提高轉(zhuǎn)入基因的表達水平,。如果選擇轉(zhuǎn)染前兩天鋪板,可適當降低鋪板密度,,以確保轉(zhuǎn)染時細胞的匯合度仍為70~80%,。2.對于接觸抑制敏感的細胞,可適當降低鋪板密度,。3.即使在有蛋白(如10%的血清)存在的情況下,,DNA-PEI復合物仍能轉(zhuǎn)染細胞,但是DNA-PEI復合物必須在無蛋白存在的條件下形成,。我們推薦使用Opti-MEMITM培養(yǎng)基以達到*轉(zhuǎn)染效率,。其他的無蛋白培養(yǎng)基則需測試與線性PEI轉(zhuǎn)染試劑的兼容性。更多關于PEI轉(zhuǎn)染試劑相關產(chǎn)品技術問題,,歡迎咨詢上海曼博生物!也歡迎關注我們的公眾號:Mine-Bio,,查看更多技術文章!PEI轉(zhuǎn)染試劑有沒有毒性,?福建細胞擴增PEI轉(zhuǎn)染試劑
1.對于某些類型的細胞如HEK-293,、HEK293T、NIH/3T3和COS細胞,,在轉(zhuǎn)染前兩天鋪板可顯著提高轉(zhuǎn)入基因的表達水平,。如果選擇轉(zhuǎn)染前兩天鋪板,可適當降低鋪板密度,,以確保轉(zhuǎn)染時細胞的匯合度仍為70~80%,。2.對于接觸抑制敏感的細胞,可適當降低鋪板密度,。3.即使在有蛋白(如10%的血清)存在的情況下,,DNA-PEI復合物仍能轉(zhuǎn)染細胞,但是DNA-PEI復合物必須在無蛋白存在的條件下形成,。我們推薦使用Opti-MEMITM培養(yǎng)基以達到*轉(zhuǎn)染效率,。其他的無蛋白培養(yǎng)基則需測試與線性PEI轉(zhuǎn)染試劑的兼容性。4.對大多數(shù)細胞來而言,,每1μgDNA使用3.0μLEndoFectinTM試劑都能獲得較高轉(zhuǎn)染效率,。使用者也可嘗試每1μgDNA使用1~4μL體積線性PEI轉(zhuǎn)染試劑進行優(yōu)化。若有更多關于Polysciences 轉(zhuǎn)染試劑相關技術問題,,歡迎咨詢上海曼博生物,。歡迎關注曼博生物公眾號:Mine-bio福建細胞擴增PEI轉(zhuǎn)染試劑用PEI轉(zhuǎn)染時,,一般和DNA的比例會是多少?
對于某些類型的細胞如HEK-293、HEK293T,、NIH/3T3和COS細胞,,在轉(zhuǎn)染前兩天鋪板可顯著提高轉(zhuǎn)入基因的表達水平。如果選擇轉(zhuǎn)染前兩天鋪板,,可適當降低鋪板密度,,以確保轉(zhuǎn)染時細胞的匯合度仍為70~80%。2.對于接觸抑制敏感的細胞,,可適當降低鋪板密度,。3.即使在有蛋白(如10%的血清)存在的情況下,,DNA-PEI復合物仍能轉(zhuǎn)染細胞,,但是DNA-PEI復合物必須在無蛋白存在的條件下形成。我們推薦使用Opti-MEMITM培養(yǎng)基以達到宜轉(zhuǎn)染效率,。其他的無蛋白培養(yǎng)基則需測試與線性PEI轉(zhuǎn)染試劑的兼容性,。4.對大多數(shù)細胞來而言,每1μgDNA使用3.0μLPEIMAX轉(zhuǎn)染試劑都能獲得較高轉(zhuǎn)染效率,。使用者也可嘗試每1μgDNA使用1.5~4μL體積線性PEIMAX轉(zhuǎn)染試劑進行優(yōu)化,。更多產(chǎn)品信息,歡迎咨詢上海曼博生物,!
抗體藥物研發(fā)客戶提供小眾創(chuàng)新產(chǎn)品,,包括從Researchgrade到cGMP等級的無動物源培養(yǎng)基質(zhì),轉(zhuǎn)染試劑,、病毒轉(zhuǎn)導試劑,、基因編輯工具等產(chǎn)品和定制服務,支持ATMP(AdvanceTherapyMedicinalProducts)藥物研發(fā)從R&D到Clinicaltrial以及后期商業(yè)化的無縫轉(zhuǎn)化,;以及提供藥物開發(fā)和探索的抗體文庫定制和商業(yè)授權(quán)靈活的CHO工程細胞株以支持抗體藥物的商業(yè)化生產(chǎn),,以此希望幫助國內(nèi)科研工作者快速地接觸世界范圍內(nèi)的技術,分享研發(fā)工具進步帶來的技術紅利,,終為細胞,、基因產(chǎn)業(yè)以及再生醫(yī)學行業(yè)等乃至整個生命科學行業(yè)賦能!更多關于PEI轉(zhuǎn)染試劑相關產(chǎn)品問題,,歡迎咨詢上海曼博生物,!PEI轉(zhuǎn)染試劑和脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染試劑的區(qū)別?
瞬時轉(zhuǎn)染方法:1.接種細胞:轉(zhuǎn)染前一晚,,用膠原酶(WORTHINGTONG公司LS004196)消化細胞并計數(shù)(不建議用胰酶),。調(diào)整細胞濃度,將細胞鋪入細胞培養(yǎng)的器皿,,每個孔置入的細胞量應能使轉(zhuǎn)染時細胞匯合度達到70~80%,。2.準備DNA-PEI復合物:DNA、PEI試劑和稀釋劑在進行以下步驟前需先使其升至室溫。,,用Opti-MEMITM(Invitrogen)或其他適合的無蛋白培養(yǎng)基稀釋適量DNA,。用同樣的培養(yǎng)基稀釋PEI試劑。每1μgDNA需用1.5-5μL線性PEI轉(zhuǎn)染試劑,。一邊輕輕渦旋裝有DNA溶液的試管,,一邊將稀釋的線性PEI轉(zhuǎn)染試劑滴加至試管中(注意:請勿顛倒添加順序)。充分混勻后,,室溫靜置10~25min以形成DNA-PEI復合物,。當溶液體積較大時,請用圓底聚丙烯管,,例如NEST5mL/14mL離心管,。3.轉(zhuǎn)染細胞:直接向每個孔中加入DNA-PEI復合物并輕輕渦旋培養(yǎng)板/培養(yǎng)皿。在無血清條件下轉(zhuǎn)染時,,去除生長培養(yǎng)基,,替換成無血清培養(yǎng)基,然后滴DNA-PEI復合物,。轉(zhuǎn)染1.5h后,,添加?體積的包含30%血清的生長培養(yǎng)基。4.孵育細胞和分析結(jié)果:在CO2培養(yǎng)箱中37℃下孵育細胞至可以分析檢測,。轉(zhuǎn)染后5h即可檢測到轉(zhuǎn)入基因的表達,。請自行確定適合檢測時間。更多關于PEI轉(zhuǎn)染試劑相關產(chǎn)品信息,,歡迎咨詢上海曼博生物,!用PEI轉(zhuǎn)染時,一般和DNA的比例是多少?上海細胞擴增PEI轉(zhuǎn)染試劑
PEI轉(zhuǎn)染試劑是一種陽離子聚合物轉(zhuǎn)染試劑,。福建細胞擴增PEI轉(zhuǎn)染試劑
PEIMAX——高產(chǎn)工業(yè)化轉(zhuǎn)染試劑-高度濃縮,,可制備大量轉(zhuǎn)染試劑Polysciences轉(zhuǎn)染試劑系列是基于聚乙烯亞胺(Polyethylenimine,PEI)的產(chǎn)品,,因其較高的轉(zhuǎn)染效果,,已廣泛應用于工業(yè)化生產(chǎn)。聚乙烯亞胺是一種具有較高的陽離子電荷密度的有機大分子,,每相隔二個碳原子,,即每“第三個原子都是質(zhì)子化的氨基氮原子,使得聚合物網(wǎng)絡在任何pH下都能充當有效的“質(zhì)子海綿”(protonsponge)體,。PEI可用作轉(zhuǎn)染試劑,,它可以縮聚DNA分子形成顆粒并轉(zhuǎn)染真核細胞。PEIMAX40K是由Polysciences出品的全合成線性聚乙烯亞胺瞬時轉(zhuǎn)染試劑,。PEIMAX是一款高度濃縮的粉劑,,大量科學家選擇PEIMAX,,在內(nèi)部自行制備低成本高效益的PEI轉(zhuǎn)染試劑。多年以來,,經(jīng)過眾多業(yè)內(nèi)人士評審的公開研究和出版文獻表明,,在HEK293、CHO和Sf9系統(tǒng)中可獲得很高的轉(zhuǎn)染效率,,在重組抗體和病毒載體生產(chǎn)中穩(wěn)定性高,,可靠性強。PEIMAX提供從96孔板到200L生物反應器持續(xù)的高基因表達細胞體系,,實現(xiàn)從新藥研發(fā)到工業(yè)化生產(chǎn)的輕松過度,。而且與大多數(shù)細胞轉(zhuǎn)染方案相比,使用PEIMAX至少可降低40%轉(zhuǎn)染成本(部分案例可降低90%轉(zhuǎn)染成本),。更多PEI MAX相關產(chǎn)品信息,,歡迎咨詢上海曼博生物!福建細胞擴增PEI轉(zhuǎn)染試劑