采用酶法提取膠原蛋白時,，必須嚴格控制提取條件：首先，酶作用時間必須適當,。如果時間過短,，膠原蛋白就不能充分釋放到提取液中，影響提取率,；如果酶作用時間過長,，膠原蛋白會水解過度，產(chǎn)生過多的苦味小分子低聚肽，不僅會增加分離純化的難度,，也會影響膠原蛋白的功能特性和生物活性,。其次，酶解溫度要適宜,。溫度過低,，酶的作用效果不明顯；溫度過高會引起酶的失活和膠原蛋白的變性,。據(jù)報道，當介質(zhì)pH略低于中性時,，膠原蛋白的變性溫度為40～41℃,，當介質(zhì)pH為酸性時,，膠原蛋白的變性溫度為38～39℃，而且魚皮膠原蛋白的變性溫度要比豬皮膠原蛋白的變性溫度低7～12℃,。所以,，如果要使提取的膠原蛋白具有良好的生物活性，在提取過程中應(yīng)使提取溫度低于變性溫度,。第三，需選用適當?shù)拿?。一般從陸生哺乳動物組織中提取膠原蛋白時,，采用胃蛋白酶在其較適作用溫度下進行提取是合理的,，但對于魚類等水生動物，由于其膠原蛋白的變性溫度比陸生哺乳動物低,，因此許多蛋白酶便不適用，如果在這些酶的較適作用溫度下提取可能會破壞膠原蛋白的某些功能特性和生物活性,。采用酶法提取膠原蛋白及其多肽的研究主要是從動物皮及其加工副產(chǎn)物中,。 在這些酶的較適作用溫度下提取可能會破壞膠原蛋白的某些功能特性和生物活性,。河南口服膠原蛋白肽原液

    有人以豬骨為原料，用蛋白酶的酶解反應(yīng)代替?zhèn)鹘y(tǒng)制膠工藝,，對骨膠原的酶解反應(yīng)與酶法制膠工藝進行了試驗研究,。結(jié)果表明：以胃蛋白酶對骨膠原的提取率比較高（），其次是胰蛋白酶（）,，接下來是中性蛋白酶（），現(xiàn)在是堿性蛋白酶（）,。并且通過單因素和正交試驗對胃蛋白酶酶解反應(yīng)中各主要影響因素進行了優(yōu)化,。試驗結(jié)果表明，胃蛋白酶提取的比較好條件是,，胃蛋白酶的濃度是1%,，在,，然后在濃度為10%（w/v）的NaCL溶液中鹽析24h,，現(xiàn)在骨膠原的回收率為,，骨膠原的提取率為,。還有人用胃蛋白酶提取豬皮膠原蛋白,，分別在水解0,、2、6,、10,、14,、18,、22,、26h時對四種不同胃蛋白酶用量（分別為1%,、2%,、,、3%）的試樣取樣檢測，采用一階HILL方程模擬胃蛋白酶提取豬皮膠原蛋白的進程以及胃蛋白酶水解速率的衰減過程,，現(xiàn)在得出2%的胃蛋白酶用量和6-7h的水解時間提取率比較大,。還有人用以新鮮豬皮為原料,，在50-52℃的條件下用胰酶進行水解，在酶用量為5000：1～10000：1,，pH值為9,，反應(yīng)2－3h,，原料：水為1：2的條件下酶解,。結(jié)果表明：總蛋白質(zhì)的提取率≥80%,。 北京玻尿酸膠原蛋白肽原液膠原蛋白保持角質(zhì)層水分及纖維結(jié)構(gòu)的完整性,，改善皮膚細胞生存環(huán)境和促進皮膚組織的新陳代謝,。

    膠原蛋白的熱變性溫度可以通過測定膠原蛋白溶液增比黏度的變化來確定。其方法是將膠原蛋白樣品溶于一定量的緩沖溶液中,，并配制成一定濃度的溶液,，然后用烏式黏度計測量溶液在一定溫度區(qū)間內(nèi)保持一定時間后的增比黏度，以增比黏度對溫度作圖,，當增比黏度變化50%時所對應(yīng)的溫度即為熱變性溫度,。熱變性溫度還可通過拉曼光譜和差示掃描量熱法等進行測定。有人測得鱸魚,、鯽魚和鳙魚魚皮膠原蛋白的熱變性溫度分別為25,、27和30℃，它們的棲息水溫分別為26～27,、29和32℃,，亞氨基酸含量分別為、,，與3種魚皮膠原的熱變性溫度相吻合Ⅱ型膠原和Ⅺ型膠原Ⅱ型膠原由三條α1肽鏈組成，即[α1(Ⅱ)]3,，富含羥賴氨酸,，并且糖化率高,，含糖量可達4%,，是軟骨中的主要膠原。另外,，即使同一生物，皮和骨膠原蛋白的熱變形溫度也可能不一,，像來自日本海鱸、鮐魚,、大頭鯊和眼斑鲀的皮膠原蛋白的變性溫度為℃，而骨膠原蛋白的變性溫度則為℃,。附帶結(jié)論是骨膠原蛋白的變性溫度范圍整體上比皮膠原蛋白的變性溫度范圍要高,。而且骨膠原蛋白和皮膠原蛋白在不同pH時的溶解度不同,。這表明皮和骨膠原蛋白的分子特性和構(gòu)型存在差異,。

所以,，若想提取結(jié)構(gòu)完整、使用安全的膠原蛋白,，很少采用此方法,。有關(guān)單獨采用堿法提取膠原蛋白的報道不多，一般是堿法提取和酸法提法結(jié)合使用,。比如在4℃條件下,，魚骨用0.1moL/L的NaOH浸泡6h，再用2.5%NaCl浸泡6h去除雜蛋白,，用10%的異丙醇溶液去除脂肪，0.1moL/L的檸檬酸浸泡3d,，現(xiàn)在得到無色無味的膠原蛋白,，提取率為11.87%,。注意,，無論酸法或堿法,，均可有效地提取膠原蛋白，有人分別采用醋酸-鹽酸的混合酸液（pH3.0）和NaOH溶液（pH12.0）提取骨膠原蛋白,，提取率基本相當,。但是,，這兩種方法提取膠原蛋白不僅容易影響膠原蛋白的生物活性，而且提取后產(chǎn)生的酸性或堿性廢液必須進行適當處理,，以避免對環(huán)境造成污染。采用酶法提取膠原蛋白時,，必須嚴格控制提取條件,。

    在實際提取過程中,，不同提取方法之間往往相互結(jié)合,，可以得到較好的提取效果,。采用超高壓處理系統(tǒng)對原料給予高壓處理一段時間,，使其組織結(jié)構(gòu)和膠原蛋白的三股螺旋結(jié)構(gòu)發(fā)生松弛,、變性，便于分離提取,。熱水提取法是將原料經(jīng)過除雜蛋白等前處理之后,，在一定條件下直接用熱水浸提已經(jīng)變性了的膠原蛋白或膠原蛋白水解物，使用的溫度有100℃沸水浴,、60-70℃,、40-45℃,。膠原蛋白的提取一般有三種方法：一是高壓輔助的物理方法,；二是用溶劑預(yù)處理結(jié)合低溫或熱水抽提的化學方法，根據(jù)溶劑的不同,，可分為熱水浸提法,、酸法、堿法,、鹽法,；三是用酶的生物化學法。一般來說,，高壓輔助和熱水抽提針對明膠的提取,，而低溫抽提和酶法針對膠原的提取，但其基本原理都是根據(jù)膠原蛋白的特性改變蛋白質(zhì)所在的外界環(huán)境,，把膠原蛋白從其他蛋白質(zhì)中分離出來,。 氨基酸分子進入人體后，合成膠原蛋白,，較終被人體吸收,。廣東大豆膠原蛋白粉

酶解膠原蛋白的工藝主要分為單酶水解法和多酶水解法。河南口服膠原蛋白肽原液

    在水產(chǎn)動物體內(nèi)膠原蛋白含量高于陸生動物,，如鰱魚,、鳙魚和草魚魚皮的蛋白質(zhì)含量分別為、,，均高于各自相應(yīng)魚肉的蛋白質(zhì)含量：,、。而魚皮中的膠原含量比較高可超過其蛋白質(zhì)總量的80%，較魚體的其它部位要高許多,，有研究報道真鯛魚皮中膠原蛋白占粗蛋白的,，鰻鱺則高達。如此高的含量意味著得率也高,，如小鮪鰹,；日本海鱸；香魚,；黃海鯛,；竹莢魚（均以干重計）。但膠原蛋白的種類要少得多,，已從魚類中分離鑒定出的膠原類型有：比較廣分布在真皮,、骨、鱗,、鰾,、肌肉等處的I型、軟骨和脊索的Ⅱ型和Ⅺ型以及肌肉的V型,。而魚皮和魚骨所含的Ⅰ型膠原蛋白是其主要膠原蛋白,。此外，還發(fā)現(xiàn)ⅩⅧ型膠原,，然而哺乳動物中含量比較豐富的Ⅲ型膠原,，在水產(chǎn)動物中尚未發(fā)現(xiàn)。其中只有Ⅰ型膠原蛋白的價格人們才可以接受,；其它類型的膠原如Ⅲ,、Ⅳ、Ⅴ等只在研究中制備,，由于價格昂貴都不宜于大量生產(chǎn),。 河南口服膠原蛋白肽原液

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