ArcticZymes Technologies提供獨特特性的鹽活性核酸酶(Salt Active Nucleases,,SANs)系列產品,主要包含SAN HQ高鹽核酸酶和M-SAN HQ中鹽核酸酶,。這兩款酶都是非特異核酸內切酶,,跟Benzonase一樣能高效降解任何形式(雙鏈、單鏈,、線狀,、環(huán)狀)的DNA和RNA;都來自于深海microbes,,通過Pichia pastoris發(fā)酵生產得到,。這兩款酶的區(qū)別在于發(fā)揮酶活的適宜鹽濃度不同,——M-SAN HQ中鹽核酸酶的適宜鹽濃度在175mM-250mM,,而SAN HQ高鹽核酸酶的適宜鹽濃度在400mM-600mM,。M-SAN HQ中鹽核酸酶的檢測標準,都符合USP-EP要求,。上海上海倍篤生物中鹽核酸酶70950-160
Medium-Salt Active Nuclease High Quality (M-SAN HQ,,中鹽核酸酶),是用Pichia pastoris表達的重組非特異內切核酸酶,,廣泛應用于生產工藝流程中,,在生理鹽條件下去除雙鏈及單鏈的DNA及RNA。這款核酸酶的適宜pH范圍很廣(pH 7.2-8.7),,且在125-250 mM鹽濃度內具有適宜活性,。在細胞培養(yǎng)液或收獲的培養(yǎng)上清中,不需調整任何組分,,直接加入M-SAN HQ即可表現(xiàn)高核酸酶活性,。相比傳統(tǒng)的全能核酸酶,M-SAN HQ中鹽核酸酶在生理鹽條件下,,對HCD的去除更高效,、更徹底。因此,,M-SAN HQ中鹽核酸酶非常適合部分病毒載體(如慢病毒,、逆轉錄病毒及溶瘤病毒等)的生產。海南等滲條件中鹽核酸酶70950-202M-SAN HQ中鹽核酸酶的生產用原輔料是Non-animal和Non-plant來源的,。
此外,,文章作者對每個步驟的樣品進行納米顆粒分析(NTA),結果發(fā)現(xiàn):澄清環(huán)節(jié)后,,M-SAN HQ中鹽核酸酶和Benzonase處理組才出現(xiàn)比較明確的LV病毒顆粒峰,;TFF處理后,回流液樣品的LV病毒顆粒峰更加尖銳,,表明病毒顆粒分散度更好,、穩(wěn)定性更高?;亓饕旱腘TA結果進一步表明,,M-SAN HQ中鹽核酸酶處理組只有一個病毒顆粒峰,而Benzonase處理組的回流液中有三個峰,。作者推測Benzonase處理組的病毒顆粒還有嚴重的病毒團聚現(xiàn)象,,而呈現(xiàn)多峰現(xiàn)象。
ArcticZymes Technologies成立于20世紀80年代后期,,總部位于挪威北部的特羅姆瑟(Troms?),;立足北極海洋區(qū),致力于從海洋生物中識別新的冷適應酶,,用于分子研究,、體外診斷和藥物領域。以其產品的獨特性質及超過30年的生產經(jīng)驗積淀,,ArcticZymes Technologies得到國際分子診斷及生物藥物領域客戶的肯定及大力支持,,ArcticZymes產品線已用于診斷產品及生物藥物生產中。2005年,,ArcticZymes在Olso證券交易所上市,,并且持續(xù)得到挪威國家基金的支持。M-SAN HQ中鹽核酸酶終產品放行檢測包括microbe,、Fungus及內毒檢測等,;
染色質由組蛋白和DNA組成,——147個堿基對的DNA纏繞在8個組蛋白(由H2A,、H2B,、H3和H4形成的八聚體)周圍,形成基本的染色質單位,,即核小體,。核小體像珠串一樣串連在一起,并被包裝成更高階的染色質結構,。DNA帶負電荷,,富含堿性氨基酸的組蛋白帶正電荷,且組蛋白多聚物有很多疏水區(qū)段,。所有這些特點導致宿主DNA殘留(HCD)能吸附很多物質,,包括宿主蛋白殘留(HCD)、色譜填料,、目的病毒顆粒等,,因此,,HCD的存在增加了工藝流程的復雜度,同時也降低了病毒顆粒的穩(wěn)定性,。M-SAN HQ中鹽核酸酶用在生產工藝流程中,,在生理鹽條件下去除雙鏈及單鏈的DNA及RNA。湖南等滲條件中鹽核酸酶70950-150
在150mM NaCl條件下,,M-SAN HQ中鹽核酸酶的酶切活性達到常規(guī)核酸酶的5倍左右,。上海上海倍篤生物中鹽核酸酶70950-160
在生物工藝中,核酸酶的主要作用是高效消化宿主細胞DNA(HCD),,并將其分解成足夠小的片段,,以便在下游純化過程中去除。雖然大多數(shù)核酸酶可以在生理鹽條件下高效地將裸DNA降解成微小片段,,比如Benzonase和SANs都可以把dsDNA分解成小于8nt的寡核苷酸鏈,,但實際生產中的核酸污染情況更加復雜。HCD通常以染色質形式存在,,與細胞裂解碎片,、病毒顆粒等結合在一起,影響核酸酶的識別及剪切,。因此,,HCD去除的關鍵在于——核酸酶如何在復雜的生產體系中識別并剪切HCD。上海上海倍篤生物中鹽核酸酶70950-160