已有文獻(xiàn)表明,，高鹽濃度能夠破壞染色質(zhì)結(jié)構(gòu),，讓核小體解聚。在能耐受高鹽條件的病毒載體（如AdV/AAV等）生產(chǎn)中,，高鹽濃度使宿主細(xì)胞DNA（HCD）解聚,，讓核酸片段暴露，提高了核酸片段的可及性,。而ArcticZymes的SAN HQ高鹽核酸酶能夠在高鹽條件下更好發(fā)揮酶切活性,，作為高鹽條件下去除HCD的更好選擇。SAN HQ高鹽核酸酶的出現(xiàn),，讓一些通過常規(guī)方法很難解決的工藝問題得到高效解決,，不僅提高了生產(chǎn)效率，降低了藥物生產(chǎn)成本,，更拓寬了生物工藝生產(chǎn)的邊界,。SAN HQ高鹽核酸酶在鹽濃度400-650mM條件下活性達(dá)到峰值。海南高鹽條件高鹽核酸酶70921

ArcticZymes廠家對(duì)鹽活性核酸酶系列產(chǎn)品（Salt Active Nucleases,，SANs）的生產(chǎn)及質(zhì)控，在符合ISO13485:2016體系基礎(chǔ)上,，增加了cGMP質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn),，如microbes、endotoxin,、蛋白酶等,，符合USP-EP要求。廠家提供HQ級(jí)別和GMP級(jí)別的SAN HQ高鹽核酸酶和M-SAN HQ中鹽核酸酶,，從成本角度分別滿足臨床前和早期臨床階段,、商業(yè)化大規(guī)模生產(chǎn)階段的需求；且GMP級(jí)SAN HQ高鹽核酸酶已完成在FDA的藥物主文件（Drug Master File, DMF）申報(bào)備案,，助力加快藥物申報(bào)流程,。天津基因藥物生產(chǎn)用高鹽核酸酶70921ArcticZymes所有產(chǎn)品的開發(fā)、生產(chǎn)及銷售等都符合ISO13485:2016質(zhì)量管理體系標(biāo)準(zhǔn)。

相比傳統(tǒng)的Benzonase核酸酶,，SAN HQ高鹽核酸酶的優(yōu)勢是在400mM-600mM鹽濃度條件下具有適宜酶活性,。在這個(gè)條件下，AAV病毒載體聚集更少,、更加穩(wěn)定,；SAN HQ的使用能夠簡化生產(chǎn)工藝、降低酶用量及成本,，不需額外脫鹽操作,；AAV病毒載體得率更高，且HCD殘留更少,、AAV產(chǎn)物更穩(wěn)定,。曲光教授在2005年發(fā)表的文章中，以AAV2為例探討了引起AAV病毒聚集的因素,，并探索了AAV病毒純化和制劑過程中抑制聚集的方法,。該文章通過篩選發(fā)現(xiàn)，高鹽濃度能夠抑制AAV病毒團(tuán)聚,，讓AAV病毒更加穩(wěn)定,，且高鹽濃度并不削弱AAV病毒的侵染活性。

近年來,，AAV在cancer疾病的醫(yī)治中顯示出巨大的價(jià)值,。AAV作為基因藥物的載體已在肺、肝,、眼,、腦、肌肉等多個(gè)臨床試驗(yàn)(超過100次)中得到應(yīng)用,，并在盲癥和血友病方面取得了巨大成功,。2012年，AAV1載體編碼的脂蛋白脂肪酶成為歐盟批準(zhǔn)的shou個(gè)用于醫(yī)治脂蛋白脂肪酶缺乏癥的基因產(chǎn)物(Glybera),。5年后,，另一種AAV介導(dǎo)的基因藥物(Luxturna)隨后獲準(zhǔn)在美國上市?；贏AV9的基因療(Zolgensma)也被用于醫(yī)治脊髓性肌肉萎縮,。腺病毒在基礎(chǔ)和實(shí)驗(yàn)研究有這么強(qiáng)的生命力原因在于：宿主范圍廣，對(duì)人致病率低,；腺病毒粒子相對(duì)穩(wěn)定,，病毒基因重排頻率低；安全性高,，不整合到染色體中,，無插入致病基因,，不干擾其他宿主基因。ArcticZymes Technologies的研發(fā)基于北極海洋區(qū)的自然資源,。

桿狀病毒表達(dá)載體體系Baculovirus/Sf9(Baculovirusexpression vector,，BEV)，是應(yīng)用桿狀病毒表達(dá)載體(BEV)系統(tǒng)infect昆蟲細(xì)胞Sf9,，是一種替代哺乳動(dòng)物包裝細(xì)胞系的生產(chǎn)方案,。整個(gè)系統(tǒng)包含兩種BEV，其中一個(gè)BEV攜帶兩側(cè)有ITRs的目的基因,，另一BEV則攜帶rep/cap基因,。這兩種BEV同時(shí)infectSf9即可組裝AAV。由于桿狀病毒具有輔助功能,，因此BEV系統(tǒng)與可以穩(wěn)定表達(dá)rep的Sf9細(xì)胞相結(jié)合,，可用于靈活的、高滴度的大規(guī)模載體生產(chǎn),。BEV體系安全性好,infection效率高,生產(chǎn)工藝較之sTT更易放大,，有更高的體積生產(chǎn)率優(yōu)勢。SAN HQ高鹽核酸酶在高鹽濃度下活性更適,，DNA去除效率更高,。河北SAN HQ高鹽核酸酶70921

高鹽能夠抑制AAV病毒載體聚集，提高AAV病毒載體產(chǎn)量,。海南高鹽條件高鹽核酸酶70921

Mayer等（2023）以measles virus(麻疹病毒,，MV)為例，評(píng)估了四種不同核酸酶（BenzonaseTM,、DeneraseTM,、M-SAN HQ中鹽核酸酶及SAN HQ高鹽核酸酶）對(duì)于染色質(zhì)DNA去除的效果。Vero細(xì)胞通過微載體貼壁培養(yǎng)來生產(chǎn)麻疹病毒MV,，72hr后收獲上清液,，使用3μm cellulose filter(Sartorius)過濾后分裝多份，置于-80℃保存便于后續(xù)使用,。在解凍后的上清中調(diào)節(jié)對(duì)應(yīng)鹽濃度,，并加入50 U/ml核酸酶，37℃孵育2hr進(jìn)行消化,，消化后留樣；將消化后上清液過Capto Core 700 (Cytiva)柱子,，收集流穿液,，之后洗雜、洗脫,，并分別留樣,。通過SDS-PAGE分析發(fā)現(xiàn),，相比Benzonase等傳統(tǒng)核酸酶，在生理鹽條件下M-SAN HQ中鹽核酸酶更高效將染色質(zhì)DNA剪切成更小片段,，甚至將核小體DNA剪切更徹底,。海南高鹽條件高鹽核酸酶70921