當(dāng)你應(yīng)用像肽圖這樣的方法時(shí),，你可以從Genovis中級方法中獲得的信息量就沒有那么多了,。一個(gè)主要的區(qū)別是你不能像在肽水平上那樣將修改定位到單個(gè)氨基酸。然而,，中級分析比肽圖譜具有快速和簡單的巨大優(yōu)勢,，因?yàn)樾枰治龅纳V峰要少得多,，數(shù)據(jù)處理任務(wù)要簡單得多。此外,，在中級實(shí)驗(yàn)中,，手工實(shí)驗(yàn)步驟要少得多，F(xiàn)abALACTICA（IdeS）酶切消化方法不需要針對不同的人體IgG1進(jìn)行優(yōu)化,。一旦在氨基酸水平上進(jìn)行了PTM表征,，我們非常認(rèn)為中級表征肽圖的一種補(bǔ)充方法，可以在更常規(guī)的基礎(chǔ)上應(yīng)用,。中級分析更適用于高通量或監(jiān)測類型的方法,，并可用于支持肽圖分析?？稍谥劓溨?CH2 結(jié)構(gòu)域下方的一個(gè)特定位點(diǎn)消化人 IgM,，產(chǎn)生均質(zhì)的 F（ab'）2 和 Fc 片段。甘肅FabALACTICAIdeS蛋白酶抗體酶切

Genovis提供FabRICATOR（IdeS）驗(yàn)證包,。三種不同批次的凍干酶,，用于驗(yàn)證基于FabRICATOR的分析方法。FabRICATOR（IdeS）是一種IgG特異性半胱氨酸蛋白酶，可消化鉸鏈下方單個(gè)氨基酸位點(diǎn)的抗體,，產(chǎn)生均質(zhì)的F（ab'）2和Fc片段,。FabRICATOR酶已成為生物制藥行業(yè)中使用的工具，用于表征用于zhiliao用途的單克隆抗體,、Fc融合蛋白,、ADC和生物仿制藥。每批FabRICATOR酶在釋放前都經(jīng)過嚴(yán)格的酶活性,、特性和純度測試,。FabRICATOR驗(yàn)證試劑盒由三批凍干酶組成，使方法驗(yàn)證更容易,。每批都附有一份分析證書,。QC應(yīng)用的簡化方法驗(yàn)證；批次間變異性評估的理想形式,；提高批量放行檢測性能的可信度,。福建FabRICATORIdeS蛋白酶蛋白組學(xué)GingisKHAN用于LC-MS表征基于抗體的生物藥研究。

其他基于 IgG 的生物制藥需要仔細(xì)表征和監(jiān)測關(guān)鍵質(zhì)量屬性,，例如氧化,、糖基化和其他翻譯后修飾。與抗體的克隆選擇,、工藝開發(fā)和穩(wěn)定性研究相關(guān)的大量樣品通常通過液相色譜質(zhì)譜 （LC-MS） 進(jìn)行分析,。然而，在LC-MS之前進(jìn)行足夠規(guī)模的樣品制備通常具有挑戰(zhàn)性,。為了解決樣品制備的挑戰(zhàn),，Genovis將半胱氨酸蛋白酶FabRICATOR（IdeS）固定在磁性瓊脂糖珠上,，現(xiàn)在稱為FabRICATOR MagIC,。FabRICATOR固定在磁珠上，可同時(shí)快速自動(dòng)消化多種抗體,，促進(jìn)中級表征工作流程,。Genovis的FabRICATOR MagIC 如何以較少的用戶交互減少實(shí)驗(yàn)和操作時(shí)間，降低樣品處理錯(cuò)誤的風(fēng)險(xiǎn),，同時(shí)提高通量,。

Genovis的FabDELLO在鉸鏈上方的單個(gè)位點(diǎn)消化人IgG1，并在兩小時(shí)內(nèi)生成均質(zhì)的Fab和Fc片段（Genovis的IdeS在鉸鏈區(qū)下方的單個(gè)位點(diǎn)進(jìn)行消化）,。生成的片段可用于結(jié)晶和高階結(jié)構(gòu)（HOS）的NMR研究,、結(jié)合研究等。突變的鉸鏈區(qū)域是zhiliao性候選抗體的常見修飾,，以降低效應(yīng)器功能,。這些突變可能會(huì)影響具有高底物特異性的酶的抗體消化效率。例如，高度特異性的FabRICATOR（IdeS）消化效率對含有常見LALA突變的抗體產(chǎn)生負(fù)面影響,。FabDELLO作用于人IgG1鉸鏈上方的單個(gè)暴露賴氨酸殘基,，能夠?qū)哂型蛔冦q鏈區(qū)域的抗體進(jìn)行流行的中級LC-MS分析。例如,，用FabDELLO消化市售的IgG1risankizumab,，在下鉸鏈區(qū)域具有LALA突變，并通過反相LC-MS進(jìn)行分析,。消化產(chǎn)生均勻的Fab和Fc片段,。用20mMDTT還原片段，用于中級LC-MS分析,，發(fā)現(xiàn)產(chǎn)生了均相的Fc/2,、輕鏈（LC）和Fd片段。用FabDELLO消化后觀察到的定義峰顯示出均勻的片段生成和酶的穩(wěn)健性能,。也不需要任何額外的輔助因子,，它將在不同生理緩沖中發(fā)揮作用。

與IdeS不同,，度拉糖肽由兩個(gè)胰高xue糖素樣肽-1 （GLP-1） 分子組成,，它們通過柔性 GS 接頭連接到人 IgG4 的 Fc 區(qū)域。為了分別研究肽和 Fc 區(qū)域,，從而鑒定結(jié)構(gòu)域特異性 PTM,，用 Genovis的GlySERIAS 在 37°C 下凍干消化度拉糖肽 1 小時(shí)。為了降低樣品復(fù)雜性,，使用內(nèi)切糖苷酶GlycINATOR Lyophilized去除Fc聚糖,，并用DTT還原鏈間二硫鍵。反相LC-MS對樣品的分析表明,，使用GlySERIAS進(jìn)行連接子消化后,，肽從Fc區(qū)域完全去除。連接子中的大量甘氨酸殘基為GlySERIAS提供了許多不同的潛在消化位點(diǎn),，這就是為什么Fc/2和GLP-1肽都被檢測為幾種變體,，其中不同數(shù)量的甘氨酸和絲氨酸殘基仍然連接。此外,，還鑒定了GLP-1肽的氧化,。盡管GlySERIAS同時(shí)在多個(gè)位點(diǎn)進(jìn)行消化，但一式三份的酶解在獲得的不同F(xiàn)c/2變體的相對量中顯示出可重復(fù)的結(jié)果,。Genovis的GlySERIAS 是一種獨(dú)特的酶,。甘肅FabALACTICAIdeS蛋白酶抗體酶切

如FabRICATOR Immobilized，可快速輕松地生成均質(zhì) F（ab'）2 和 Fc/2 片段,。甘肅FabALACTICAIdeS蛋白酶抗體酶切

為什么客戶想在他們的工作試用Genovis的FabRICATOR（IdeS）,。FabRICATOR的高特異性(在鉸鏈下方有單個(gè)消化位點(diǎn))以及它對IgG種和亞類表現(xiàn)出活性的事實(shí)使其成為高效表征一系列不同分子的理想工具,。FabRICATOR的另一大優(yōu)勢是速度。在大多數(shù)IgG上,，您可以在短短30分鐘內(nèi)生成F(ab’)2和Fc/2片段,，這一速度簡化了方法開發(fā)，并允許快速有效的中層表征,，使客戶能夠在不比做完整質(zhì)量實(shí)驗(yàn)長太多的時(shí)間內(nèi)獲得更多關(guān)于分子的信息,。Genovis發(fā)現(xiàn)更多的緩沖液與溶液中的FabRICATOR消解相容（更多信息）。Genovis已經(jīng)測試了PBS和150mM醋酸銨,，pH7,，結(jié)果良好。并且應(yīng)該也適用于FabRICATORHPLC,。然而,，緩沖液的離子強(qiáng)度會(huì)影響抗體片段在FabRICATORHPLC（IdeS）色譜柱上的保留，并且IgG1亞基需要至少100-150mM鹽才能洗脫為單個(gè)窄峰,。其他IgG亞類或融合蛋白可能需要對緩沖液組成進(jìn)行一些優(yōu)化,。甘肅FabALACTICAIdeS蛋白酶抗體酶切