大規(guī)模生產(chǎn)階段,，AAV/LV載體生產(chǎn)流程跟抗體、疫苗類藥物的生產(chǎn)類似,，主要包含上游培養(yǎng),、下游純化及制劑部分。上游培養(yǎng)分為質粒開發(fā),、細胞擴增,、三質粒共轉染及病毒載體生產(chǎn)等步驟。下游純化分為細胞裂解釋放AAV病毒顆粒（可以通過去污劑,、機械作用,、高滲或凍融操作等）or收獲細胞上清液得到含LV病毒原液、加入核酸酶以減少宿主細胞核酸污染,、澄清是通過離心或過濾等方法去除細胞碎片和雜質等,、超濾濃縮以減少后續(xù)色譜純化體系、親合及離子交換等純化得到高純度病毒載體,。制劑部分主要是超濾更換緩沖液,、過濾除菌及制劑灌裝等。相比全能核酸酶,，M-SAN HQ中鹽核酸酶能將HCD酶切成更小片段,，破壞核小體結構。福建等滲條件中鹽核酸酶70950-160

ArcticZymes Technologies于2019年推出了M-SAN HQ中鹽核酸酶，2021年推出對應的M-SAN HQ ELISA kit,。該試劑盒原理是采用雙抗夾心法定量檢測各種生物制品的中間品,、半成品和成品中M-SAN HQ中鹽核酸酶的殘留含量，特異性的anti-M-SAN作為捕獲抗體偶聯(lián)在孔板上,，辣根過氧化酶HRP標記anti-M-SAN作為檢測抗體,，TMB是檢測反應底物。該試劑盒特異識別M-SAN HQ中鹽核酸酶,，對其它核酸酶沒有特異性結合,。它的定量范圍是0.12-7.5ng/ml；12*8strips的設計規(guī)格,，使用靈活,，更能降低使用成本。福建等滲條件中鹽核酸酶70950-160M-SAN HQ中鹽核酸酶是用Pichia pastoris表達的重組非特異內(nèi)切核酸酶,。

大多數(shù)研究級別的慢病毒是通過批次濃縮而不是粗制劑之后應用的,，濃縮基本上是通過兩步離心法產(chǎn)生的。在70000g通過超速離心濃縮后的慢病毒再通過蔗糖緩沖(50000g)純化,，然后溶解在配方緩沖液中,。一種改進，特別是純度方面的改進,，基于離心/色譜聯(lián)用的純化方法,。例如，Kutner等評估了組合純化/濃縮方法,。蔗糖緩沖的超速離心結合陰離子交換層析獲得了88.2%的收率,，而相反的組合則獲得了77.6%的收率。在兩種方法中,，濃縮都超過了100倍,，病毒滴度都超過了1010TU/ml(VSV-g包被的慢病毒)。

倫敦大學學院（UCL）的工藝開發(fā)團隊,，在細胞藥物Car-T涉及的慢病毒（Lentivirus,，LV）生產(chǎn)過程中，比較了Benzonase和M-SAN HQ中鹽核酸酶在酶活,、酶切時間,、各階段LV的穩(wěn)定性等方面的表現(xiàn)，發(fā)現(xiàn)在生理鹽條件下M-SAN HQ中鹽核酸酶酶活更高,、酶切時間更短,，同時用納米顆粒分析（NTA）技術確認M-SAN HQ組得到的LV病毒顆粒聚集更少、穩(wěn)定性更高,。他們會繼續(xù)探究HCD是否影響LV的穩(wěn)定性,，及對LV侵染效率和生命周期是否有影響,。通過更多研究，我們探究M-SAN HQ中鹽核酸酶助力LV生產(chǎn)的關鍵機制,。M-SAN HQ中鹽核酸酶的檢測標準,，都符合USP-EP要求。

在生物工藝流程中,，需要使用核酸酶去除終產(chǎn)品中的核酸污染,，而核酸酶作為外源成份,，也需要在生產(chǎn)流程中去除,。核酸酶去除工藝包括熱滅活法、酶抑制劑,、離子交換和親合層析法等,。慢病毒LV的pI在6.0-6.5左右，包裝了完整基因組DNA后的AAV病毒顆粒PI大致為5.9,，來自于S.marcescens的全能核酸酶pI 6.85左右,，M-SAN HQ中鹽核酸酶pI 8.7左右。因此,，在同樣的條件下,，從LV/AAV溶液中去除M-SAN HQ中鹽核酸酶比去除Benzonase全能核酸酶更容易、更徹底,。染色質的雙螺旋結構影響DNA的檢測與酶切處理,，而中鹽核酸酶降解染色質效率更高。廣東ArcticZymes中鹽核酸酶70950

M-SAN HQ中鹽核酸酶兼容常見細胞培養(yǎng)基,，在多種培養(yǎng)基條件下去除核酸污染效率更高,；福建等滲條件中鹽核酸酶70950-160

病毒載體作為細胞藥物生產(chǎn)的關鍵原材料，直接關系到細胞產(chǎn)品質量,。載體質量的控制和工藝穩(wěn)定性和批間一致性都是關系到產(chǎn)品能否產(chǎn)業(yè)化的關鍵,。在生產(chǎn)純化過程中，需要去除上游過程中的培養(yǎng)基成分,、誘導劑,、宿主蛋白和核酸等雜質，但是由于逆轉錄病毒顆粒比較大,，高異質表面糖蛋白,，而且活性易于受剪切影響，對下游純化提出了巨大的挑戰(zhàn),。目前病毒載體純化方法包括超速離心,、離子交換層析、分子排阻層析,、親和層析,、滲濾等,。各種方法各有利弊，就產(chǎn)業(yè)化而言,，離子交換純化效果比較好,，條件易于摸索，易于規(guī)模放大,。福建等滲條件中鹽核酸酶70950-160