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黑龍江FabDELLOIdeS蛋白酶IgG特異性蛋白酶

來源: 發(fā)布時間:2024-10-16

Genovis將固定化酶固定在磁珠上,用于在鉸鏈下方自動消化IgG,。FabRICATOR(IdeS)是一種IgG特異性半胱氨酸蛋白酶,,可消化鉸鏈下方單個氨基酸位點的抗體,,產(chǎn)生均質(zhì)的F(ab')2和Fc片段。FabRICATORMagIC磁珠含有FabRICATOR固定化酶,。這些微球能夠在中級表征工作流程中并行快速自動酶解多種抗體,。它們專為自動化平臺而設計,但在無法實現(xiàn)自動化的情況下,,在振動臺上的表現(xiàn)同樣出色,。酶切消解后,樣品可直接轉(zhuǎn)移到LC-MS的自動進樣器進行快速色譜分析,,或轉(zhuǎn)移到其他分析方法進行分析,。自動平行抗體酶切和亞基生成允許處理與克隆選擇、工藝開發(fā)和潛在生物制藥穩(wěn)定性研究相關的大量樣品,。自動抗體亞基分析可減少操作人員的時間和樣品處理錯誤的風險,,并提高通量。孵育時間為過夜(16-18小時),,并且由于酶的特異性,,沒有過度消化的風險,。黑龍江FabDELLOIdeS蛋白酶IgG特異性蛋白酶

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與IdeS不同,為了獲得更均勻的度拉糖肽融合蛋白的消化產(chǎn)物,,用Genovis的GlySERIAS固定化蛋白質(zhì)消化該蛋白質(zhì),,該蛋白由與瓊脂糖珠共價偶聯(lián)的GlySERIAS酶組成。通過將酶偶聯(lián)到樹脂上,,可以增加酶與蛋白質(zhì)的比率,,從而可以進一步加速反應,,以獲得更完整的連接子消化,。此外,,該酶不會存在于樣品制備中,可能會干擾樣品分析,。為了進行比較,,度拉糖肽在37°C下用GlySERIAS固定化過夜,,或用GlySERIAS凍干1小時并在37°C下過夜消化,。 為了降低樣品復雜性,,使用內(nèi)切糖苷酶GlycINATOR凍干去除Fc聚糖,并減少鏈間二硫鍵,。通過反相LC-MS對樣品的分析表明,,GlySERIAS Immobilized幾乎完全消化了Fc結(jié)構(gòu)域中的連接子,,留下了接近均質(zhì)的Fc/2產(chǎn)物,,其中含有來自連接子的一個絲氨酸殘基。用 GlySERIAS 凍干 1 小時或過夜消化,,兩者都會產(chǎn)生幾種 Fc 產(chǎn)物,并附著不同數(shù)量的絲氨酸和甘氨酸殘基,。GLP-1肽在所有三個樣品中以兩種變體存在,。使用GlySERIAS固定化消化的均質(zhì)Fc/2能夠詳細研究特定于Fc區(qū)域的質(zhì)量屬性。此外,,在樣品中未觀察到干擾分析的酶峰。作為補充,,F(xiàn)c/2 產(chǎn)物在用 GlySERIAS 凍干消化后殘留部分連接子,,有助于研究位于 GS 連接子的修飾。安徽GingisREXIdeS蛋白酶蛋白組學并通過反相LC-MS進行分析,,消化產(chǎn)生均勻的Fab和Fc片段。

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Genovis提供凍干和固定化的FabRICATOR(IdeS),為客戶提供了許多選擇,,以滿足他們的需求。 凍干形式用于高度靈活的方法開發(fā)的目的,,并隨時準備使用,,只需重組和添加到IgG樣本。 凍干酶的靈活性也意味著它可以應用于更高的通量和自動化的工作流程,。 Genovis還提供了在瓊脂糖樹脂上固定化的酶,在隨時可用的旋轉(zhuǎn)柱中,,這可以極大限度地減少在樣品中殘留的酶,,這可能是有利的,。 對于更多的制備應用,,我們提供FabRICATOR Fab2試劑盒,,這是IgG片段生成和純化的強大工具,。 這包括FabRICATOR固定化柱和CaptureSelect Fc純化柱,用于亞基的親和純化,。 由于FabRICATOR在非還原條件下是活性的,,F(xiàn)(ab’)2片段保留其鏈間和鏈內(nèi)二硫鍵,,如果片段想用于結(jié)合研究,這一點尤為重要,因為結(jié)合效率和免疫反應性將被保留,。

Genovis的FabRICATOR(IdeS)酶 可用于 IgG 的所有人類亞類以及人源化和嵌合 IgG,。該酶對其他物種的 IgG 也有活性,,包括來自大鼠,、猴子,、兔子和綿羊的某些類別的 IgG,。因此,,F(xiàn)abRICATOR的高特異性在某些情況下會使其對鉸鏈區(qū)域的突變敏感,,并損害酶活性,。來自小鼠 IgG2a 和 IgG3 的片段可以由 FabRICATOR Z 生成,,與 FabRICATOR 相比,F(xiàn)abRICATOR Z 在消化這些 IgG 方面具有更高的效率,。然而,,小鼠 IgG1 在鉸鏈下方具有不同的序列,,并且不被 FabRICATOR Z 消化。對于這種抗體種類,,F(xiàn)abULOUS 和 FabULOUS Fab 試劑盒可用于制備 Fab 片段,。FabRICATOR(IdeS蛋白酶)的一大優(yōu)勢是速度!

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與IdeS不同。Genovis的IgASAPSub1是一種IgA1特異性酶,,可在鉸鏈上方的一個特定位點消化人IgA1,,產(chǎn)生完整且均質(zhì)的Fab和Fc片段,。IgASAPSub1可水解分泌物和血清IgA1。消化在1小時內(nèi)完成,,并且由于酶的特異性,,如果孵育時間延長,則不存在過度消化的風險,。該酶在pH值6.5至8.0下具有活性,,不需要還原條件或輔助因子即可發(fā)揮活性,?;钚允窃?7°C下,但也可以在室溫下使用增加孵育時間進行消化,。IgASAPSub1是從口腔鏈球菌克隆而來的,,并在大腸桿菌中表達,。該酶含有His標簽,,分子量為148kDa。IgASAPSub1凍干劑以凍干粉的形式提供,,裝在1000個單位的小瓶中,,用于消化1mgIgA1,。Genovis的GingisKHAN 可以消化單克隆人 IgG1 抗體和 Fc 融合蛋白。黑龍江FabDELLOIdeS蛋白酶IgG特異性蛋白酶

Genovis的FabRICATOR (IdeS) 酶已成為一種接受的快速表征單克隆抗體 (mAb) 的分析工具。黑龍江FabDELLOIdeS蛋白酶IgG特異性蛋白酶

Genovis集團由瑞典GenovisAB和美國全資子公司GenovisInc.組成。該公司在納斯達克上市,。如需了解更多信息,,請訪問投資者關系。Genovis的經(jīng)營理念是為生物制藥和研究行業(yè)的客戶提供工具,,以促進和節(jié)省開發(fā)新治療方法和診斷的時間,。Genovis酶產(chǎn)品,,稱為SmartEnzymes,被世界各地的科學家使用,,創(chuàng)新的產(chǎn)品形式促進了生物藥物的開發(fā)和質(zhì)量控制。通過在2020年收購QEDBioscience,,產(chǎn)品組合已擴大到包括用于研究,、生物藥物開發(fā)和診斷檢測的抗體和試劑。在官網(wǎng)上閱讀有關QED的更多信息Genovis研發(fā)活動的基石是客戶關系,,使產(chǎn)品開發(fā)能夠滿足客戶需求。與專注于表征新酶,、開發(fā)新工作流程和新靶點抗體的學術團體的合作同樣有價值,。黑龍江FabDELLOIdeS蛋白酶IgG特異性蛋白酶