細(xì)胞基因藥物的基因遞送有病毒及非病毒兩種方式，其中病毒遞送更為常用,。在病毒遞送路徑中,，腺相關(guān)病毒（AAV）和慢病毒（Lentivirus）是常用的兩種載體,；差別是病毒基因組的存在形式，AAV的基因組一般不整合到染色體中,，以游離形式存在于染色體之外,，且一般會(huì)表達(dá)數(shù)年之久；而慢病毒的基因組則會(huì)整合到染色體達(dá)到長(zhǎng)期持續(xù)表達(dá)的目的,。此外,，其它用于基因藥物的病毒載體有單純皰疹病毒（HSV）、痘苗病毒（Vaccina Virus）,、痘病毒（Poxviruses）,。SAN HQ高鹽核酸酶更適合用于AAV生產(chǎn)。HL-SAN高鹽核酸酶70960-001

染色質(zhì)由組蛋白和DNA組成,，——147個(gè)堿基對(duì)的DNA纏繞在8個(gè)組蛋白（由H2A,、H2B、H3和H4形成的八聚體）周?chē)?，形成基本的染色質(zhì)單位，即核小體,。核小體像珠串一樣串連在一起,，并被包裝成更高階的染色質(zhì)結(jié)構(gòu)。DNA帶負(fù)電荷,，富含堿性氨基酸的組蛋白帶正電荷,，且組蛋白多聚物有很多疏水區(qū)段。所有這些特點(diǎn)導(dǎo)致宿主DNA殘留（HCD）能吸附很多物質(zhì),，包括宿主蛋白殘留（HCD）,、色譜填料、目的病毒顆粒等,，因此,，HCD的存在增加了工藝流程的復(fù)雜度,，同時(shí)也降低了病毒顆粒的穩(wěn)定性。山東上海倍篤生物高鹽核酸酶70921-160SAN HQ具有合規(guī)的資質(zhì)及完善的文件體系,，支持制藥領(lǐng)域嚴(yán)格的監(jiān)管要求,。

宿主細(xì)胞DNA殘留的擔(dān)憂(yōu)是基于致ai風(fēng)險(xiǎn)理論，特別是生產(chǎn)細(xì)胞系所包含的致ai序列,，比如較常見(jiàn)腺病毒基因E1A和E1B（HEK293, PerC.6 和CAP 細(xì)胞系）,，人乳tou瘤病毒E6和E7基因（HeLa細(xì)胞系)等。當(dāng)使用致ai細(xì)胞系生產(chǎn)AAV時(shí),，下游純化須盡可能減少殘留DNA,。工業(yè)上一般使用核酸酶分解殘留DNA，普遍認(rèn)為小于200 bp的DNA片段可有效降低致ai風(fēng)險(xiǎn),。宿主細(xì)胞蛋白殘留與免疫原性,、炎癥或過(guò)敏性休克有關(guān)。盡管與非人類(lèi)的生產(chǎn)原料相比（非人類(lèi)細(xì)胞系如BHK21或昆蟲(chóng)細(xì)胞,，以及輔助病毒如HSV,、腺病毒、桿狀病毒）,，人類(lèi)細(xì)胞免疫原性比較弱,。

大規(guī)模生產(chǎn)階段，AAV/LV載體生產(chǎn)流程跟抗體,、疫苗類(lèi)藥物的生產(chǎn)類(lèi)似,，主要包含上游培養(yǎng)、下游純化及制劑部分,。上游培養(yǎng)分為質(zhì)粒開(kāi)發(fā),、細(xì)胞擴(kuò)增、三質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染及病毒載體生產(chǎn)等步驟,。下游純化分為細(xì)胞裂解釋放AAV病毒顆粒（可以通過(guò)去污劑,、機(jī)械作用、高滲或凍融操作等）or收獲細(xì)胞上清液得到含LV病毒原液,、加入核酸酶以減少宿主細(xì)胞核酸污染,、澄清是通過(guò)離心或過(guò)濾等方法去除細(xì)胞碎片和雜質(zhì)等、超濾濃縮以減少后續(xù)色譜純化體系,、親合及離子交換等純化得到高純度病毒載體,。制劑部分主要是超濾更換緩沖液、過(guò)濾除菌及制劑灌裝等,。SAN HQ高鹽核酸酶在鹽濃度400-650mM條件下活性達(dá)到峰值,。

目前基因藥物領(lǐng)域常用的病毒載體有腺病毒、慢病毒、重組腺相關(guān)病毒（rAAV）以及逆轉(zhuǎn)錄病du等,，其中AAV因其免疫原性極低,、安全性高、宿主細(xì)胞范圍廣,、擴(kuò)散能力強(qiáng),、表達(dá)穩(wěn)定以及特異性強(qiáng)等優(yōu)勢(shì)脫穎而出。據(jù)NIH統(tǒng)計(jì),，已有超過(guò)200個(gè)正在進(jìn)行或已完成的基因藥物臨床試驗(yàn)使用rAAV載體,。盡管rAAV基因藥物已顯示出巨大的前景，但是強(qiáng)大,、穩(wěn)健而且可放大的基因載體生產(chǎn)制造工藝一直是CGT行業(yè)的痛點(diǎn),。目前rAAV生產(chǎn)平臺(tái)主要有三種：三質(zhì)粒瞬轉(zhuǎn)體系（TransientTransfection, TT）、桿狀病毒表達(dá)載體體系(Baculovirusexpression vector,，BEV)和包裝細(xì)胞體系(Packaging/Producercell line,，PCL)。使用SAN HQ高鹽核酸酶可以更少的酶量獲得更高的去除率,，對(duì)載體的產(chǎn)量和活性沒(méi)有任何負(fù)面影響,；陜西分子研究高鹽核酸酶70921-202

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在生物工藝流程中,，需要使用核酸酶去除終產(chǎn)品中的核酸污染，而核酸酶作為外源成份,，也需要在生產(chǎn)流程中去除,。核酸酶去除工藝包括熱滅活法、酶抑制劑,、離子交換和親合層析法等,。AAV衣殼亞種之間因表面電荷的差異導(dǎo)致不同的的等電點(diǎn)，——空衣殼pI在6.3左右,，包裝了完整基因組DNA后的病毒顆粒pI大致為5.9,。而來(lái)自于S.marcescens的全能核酸酶pI 6.85左右，SAN HQ高鹽核酸酶pI 9.6左右,。因此,，在同樣的條件下，從AAV溶液中去除SAN HQ高鹽核酸酶比去除Benzonase全能核酸酶更容易,、更徹底。HL-SAN高鹽核酸酶70960-001