在生物工藝流程中,,需要使用核酸酶去除終產(chǎn)品中的核酸污染,而核酸酶作為外源成份,,也需要在生產(chǎn)流程中去除,。核酸酶去除工藝包括熱滅活法、酶抑制劑,、離子交換和親合層析法等,。慢病毒LV的pI在6.0-6.5左右,包裝了完整基因組DNA后的AAV病毒顆粒PI大致為5.9,,來自于S.marcescens的全能核酸酶pI 6.85左右,,M-SAN HQ中鹽核酸酶pI 8.7左右。因此,,在同樣的條件下,,從LV/AAV溶液中去除M-SAN HQ中鹽核酸酶比去除Benzonase全能核酸酶更容易、更徹底,。ArcticZymes的產(chǎn)品開發(fā),、生產(chǎn)、銷售和營銷過程均通過ISO13485質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的認(rèn)證,。南京70950-160中鹽核酸酶工廠直銷
基因藥物常用的AAV載體有三種生產(chǎn)方法,,分別是三質(zhì)粒瞬轉(zhuǎn)體系,、桿狀病毒表達(dá)載體體系和包裝細(xì)胞體系。其中,,20多年前開發(fā)的三質(zhì)粒瞬轉(zhuǎn)表達(dá)技術(shù)仍然占據(jù)腺相關(guān)病毒AAV生產(chǎn)的主流地位,,其三質(zhì)粒分別是Helper質(zhì)粒(含E2a/b、E4和VARNA基因),、目標(biāo)基因表達(dá)質(zhì)粒及輔助質(zhì)粒(含Cap和Rep基因),。雖然AAV病毒載體的血清型不同,但AAV的生產(chǎn)流程基本一致,,主要有質(zhì)粒共轉(zhuǎn)宿主細(xì)胞HEK293,、293細(xì)胞生產(chǎn)病毒顆粒、從細(xì)胞培養(yǎng)上清或/及細(xì)胞裂解液中收獲病毒載體,、純化/制劑/無菌過濾/灌裝等流程,。嘉興倍篤生物中鹽核酸酶聯(lián)系方式在細(xì)胞培養(yǎng)液或收獲的培養(yǎng)上清中,不需調(diào)整任何組分,,M-SAN HQ中鹽核酸酶即可表現(xiàn)較高核酸酶活性,。
M-SAN HQ中鹽核酸酶在生理鹽條件下的優(yōu)勢,讓其成為生物生產(chǎn)工藝中去除核酸污染的更好選擇,。經(jīng)過多年的市場宣傳,,M-SAN HQ中鹽核酸酶品質(zhì)已得到多個(gè)全球TOP CDMOs認(rèn)可,納入其工藝開發(fā)篩選平臺,。此外,,目前全球有10+臨床項(xiàng)目涉及的病毒載體生產(chǎn)用到M-SAN HQ中鹽核酸酶。對于同一個(gè)項(xiàng)目,,用M-SAN HQ替代Benzonase全能核酸酶,,酶量減少、HCD去除效果更優(yōu),、病毒載體產(chǎn)量也有一定程度的提高,,酶相關(guān)成本降為原有的1/5以內(nèi),極大降低了病毒載體生產(chǎn)成本,。
文章作者對酶法去除dsDNA進(jìn)行了優(yōu)化研究,,兩種酶濃度梯度為25U/ml、50U/ml及100U/ml,,Mg2+濃度為5mM,,通過PicoGreen檢測dsDNA含量。結(jié)果發(fā)現(xiàn),,25U/ml的M-SAN HQ中鹽核酸酶對dsDNA去除效果明顯優(yōu)于100U/ml的Benzonase,。此外,在酶切反應(yīng)速度方面,,M-SAN HQ有更明顯的優(yōu)勢,,——在低濃度底物dsDNA(如20ng/ml)條件下,,50U/ml的M-SAN HQ在5分鐘內(nèi)將dsDNA降解到2ng/ml左右;而50U/ml的Benzonase在30分鐘孵育消化后,,dsDNA濃度依然是12ng/ml左右,。ArcticZymes精于規(guī)模化生產(chǎn)獨(dú)特特性的酶產(chǎn)品,,于2005年在證券交易所上市,。
在生物工藝中,核酸酶的主要作用是高效消化宿主細(xì)胞DNA(HCD),,并將其分解成足夠小的片段,以便在下游純化過程中去除,。雖然大多數(shù)核酸酶可以在生理鹽條件下高效地將裸DNA降解成微小片段,,比如Benzonase和SANs都可以把dsDNA分解成小于8nt的寡核苷酸鏈,但實(shí)際生產(chǎn)中的核酸污染情況更加復(fù)雜,。HCD通常以染色質(zhì)形式存在,,與細(xì)胞裂解碎片、病毒顆粒等結(jié)合在一起,,影響核酸酶的識別及剪切,。因此,HCD去除的關(guān)鍵在于——核酸酶如何在復(fù)雜的生產(chǎn)體系中識別并剪切HCD,。M-SAN HQ中鹽核酸酶不需調(diào)整培養(yǎng)基任何組分,,使用簡單方便;蕪湖70960-001中鹽核酸酶銷售電話
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細(xì)胞基因藥物的基因遞送有病毒及非病毒兩種方式,其中病毒遞送更為常用,。在病毒遞送路徑中,,腺相關(guān)病毒(AAV)和慢病毒(Lentivirus)是常用的兩種載體;差別是病毒基因組的存在形式,,AAV的基因組一般不整合到染色體中,,以游離形式存在于染色體之外,且一般會表達(dá)數(shù)年之久,;而慢病毒的基因組則會整合到染色體達(dá)到長期持續(xù)表達(dá)的目的,。此外,其它用于基因藥物的病毒載體有單純皰疹病毒(HSV),、痘苗病毒(Vaccina Virus),、痘病毒(Poxviruses)。南京70950-160中鹽核酸酶工廠直銷