跟其他類型的核酸酶一樣,SAN HQ高鹽核酸酶和M-SAN HQ中鹽核酸酶的滅活方法有很多,,分為可逆滅活及不可逆滅活,。金屬離子螯合劑如EDTA會(huì)可逆抑制兩者的活性,加入的EDTA濃度一般是溶液中Mg2+濃度的2倍左右即可完全抑制活性,;后續(xù)補(bǔ)加過(guò)量的Mg2+即可恢復(fù)核酸酶活性。加熱,、還原劑(如DTT)、咪唑,、甘油及表面活性劑(如高于15%濃度的Triton X-100,、SDS,、尿素等)等都可以使其不可逆失活,。在生物工藝流程,,需要結(jié)合上下游應(yīng)用需要選擇合適的方法去除或滅活核酸酶,。染色質(zhì)的雙螺旋結(jié)構(gòu)影響DNA的檢測(cè)與酶切處理,,而中鹽核酸酶降解染色質(zhì)效率更高,。江蘇M-SAN HQ中鹽核酸酶70950
上海倍篤生物科技有限公司(簡(jiǎn)稱“倍篤生物”),,由中國(guó)科學(xué)院及生物醫(yī)藥產(chǎn)業(yè)界人士,,于2018年1月共同創(chuàng)立,。公司代理多個(gè)品牌的儀器、試劑及耗材,,遵守相關(guān)法規(guī)要求,,如cGMP規(guī)范,、ISO13485質(zhì)量管理體系認(rèn)證等,,致力于為診斷領(lǐng)域如分子診斷及病原微生物檢測(cè)研發(fā)等,,藥物研發(fā)領(lǐng)域如細(xì)胞基因藥物,、核酸藥物,、抗體藥物,、干細(xì)胞及外泌體研究等客戶提供合規(guī),、高質(zhì)量物料及專業(yè)服務(wù),,以期與客戶共同協(xié)作,,加快研發(fā)及生產(chǎn)進(jìn)度,,為客戶提供更多價(jià)值,。泰州70950-160中鹽核酸酶聯(lián)系方式中鹽核酸酶更適合細(xì)胞培養(yǎng)體系,相比全能核酸酶,,酶用量減少到1/3-1/2,,HCD去除效率更高,。
除了獲得載體的滴度及產(chǎn)量,,生產(chǎn)慢病毒更關(guān)心的指標(biāo)主要是各種污染物的去除,??侱NA污染的去除百分比在99.1-99.84%,,總蛋白污染物的去除百分比在99.85-99.9%,。針對(duì)宿主細(xì)胞的DNA(HCD)及蛋白(HCP),,有報(bào)道其去除百分比分別為99.8%和99.4%,。因?yàn)椴粌H殘存的DNA可能是個(gè)問(wèn)題,,而且DNA的大小以及由此引起的可能轉(zhuǎn)移整個(gè)有功能的開(kāi)放閱讀框也是問(wèn)題,,因此監(jiān)管機(jī)構(gòu)對(duì)殘存DNA污染的分子量上限的要求越來(lái)越高,。例如,,F(xiàn)DA的指南‘生產(chǎn)用于傳染病適應(yīng)癥的病毒疫苗的細(xì)胞基質(zhì)和其他生物材料的特性和鑒定’中說(shuō)明,,殘留的細(xì)胞宿主的DNA片段不能超過(guò)一個(gè)功能基因的長(zhǎng)度,估計(jì)在200bp左右,。
ArcticZymes Technologies于2019年推出了M-SAN HQ中鹽核酸酶,2021年推出對(duì)應(yīng)的M-SAN HQ ELISA kit,。該試劑盒原理是采用雙抗夾心法定量檢測(cè)各種生物制品的中間品,、半成品和成品中M-SAN HQ中鹽核酸酶的殘留含量,,特異性的anti-M-SAN作為捕獲抗體偶聯(lián)在孔板上,,辣根過(guò)氧化酶HRP標(biāo)記anti-M-SAN作為檢測(cè)抗體,,TMB是檢測(cè)反應(yīng)底物,。該試劑盒特異識(shí)別M-SAN HQ中鹽核酸酶,對(duì)其它核酸酶沒(méi)有特異性結(jié)合,。它的定量范圍是0.12-7.5ng/ml;12*8strips的設(shè)計(jì)規(guī)格,,使用靈活,,更能降低使用成本,。M-SAN HQ中鹽核酸酶終產(chǎn)品放行檢測(cè)包括microbe,、Fungus及內(nèi)毒檢測(cè)等,;
細(xì)胞基因藥物的基因遞送有病毒及非病毒兩種方式,其中病毒遞送更為常用,。在病毒遞送路徑中,,腺相關(guān)病毒(AAV)和慢病毒(Lentivirus)是常用的兩種載體,;差別是病毒基因組的存在形式,,AAV的基因組一般不整合到染色體中,,以游離形式存在于染色體之外,,且一般會(huì)表達(dá)數(shù)年之久;而慢病毒的基因組則會(huì)整合到染色體達(dá)到長(zhǎng)期持續(xù)表達(dá)的目的,。此外,,其它用于基因藥物的病毒載體有單純皰疹病毒(HSV)、痘苗病毒(Vaccina Virus),、痘病毒(Poxviruses),。生理鹽濃度下,M-SAN HQ中鹽核酸酶性能優(yōu)于常用核酸酶,。嘉興中鹽核酸酶
ArcticZymes致力于提供高質(zhì)量產(chǎn)品,,中鹽核酸酶具有好的批間一致性、穩(wěn)定可靠的質(zhì)量。江蘇M-SAN HQ中鹽核酸酶70950
在生物工藝流程中,,需要使用核酸酶去除終產(chǎn)品中的核酸污染,,而核酸酶作為外源成份,也需要在生產(chǎn)流程中去除,。核酸酶去除工藝包括熱滅活法,、酶抑制劑、離子交換和親合層析法等,。慢病毒LV的pI在6.0-6.5左右,,包裝了完整基因組DNA后的AAV病毒顆粒PI大致為5.9,,來(lái)自于S.marcescens的全能核酸酶pI 6.85左右,,M-SAN HQ中鹽核酸酶pI 8.7左右。因此,,在同樣的條件下,,從LV/AAV溶液中去除M-SAN HQ中鹽核酸酶比去除Benzonase全能核酸酶更容易、更徹底,。江蘇M-SAN HQ中鹽核酸酶70950