包括熒光素酶和ATP水平分析;報告基因分析,;高通量測序和各種污染檢測,。目前有三種產品形式:D-熒光素(游離酸),D-熒光素鹽(鈉鹽和鉀鹽),。主要差別在于溶解特性:前者的水溶性以及緩沖體系的溶解性都較弱,,除非溶于弱堿如低濃度NaOH和KOH溶液??扇苡诩状己虳MSO,;后者能夠易溶于水或緩沖液中,使用方便,,溶劑無毒性,,特別適合體內實驗。配成溶液后的這三種產品,,在絕大多數的應用上都沒有實質性的差別,。產品性質運輸和保存運輸條件:4℃冰袋運輸;短期保存:4℃干燥避光長期保存:-20℃干燥避光母液保存:-20℃避光有效期長期保存:有效期一年工作液:先用現配使用方法1.體外生物發(fā)光檢測1)用無菌蒸餾水溶解D-熒光素鉀鹽,,配制成30mg/mL的儲存液(100-200×),,混勻。立即使用,,或分裝于-20℃避光保存,,避免反復凍融。2)用預熱好的組織培養(yǎng)基將儲存液稀釋至mg/mL的工作液濃度,。3)去除細胞培養(yǎng)基,。4)待圖像分析前,向細胞內添加熒光素工作液,,37℃孵育5-10min,然后進行圖像分析,。2.活題成像分析1)用無菌的DPBS(w/oMg2+,、Ca2+)配制15mg/mL的熒光素的儲存液,混勻,。2)用μm濾膜過濾除菌,。立即使用,或分裝于-20℃避光保存,,避免反復凍融,。3)腹腔注射(.)。做D-熒光素鉀鹽測試工作液是先用現配,。連云港熒光素酶D-熒光素鉀鹽濃度
注意事項1)本品(fireflyluciferin)和甲蟲熒光素(beetleluciferin),、螢光素鉀鹽只是不同別名,,以CAS號115144-35-9為準。2)注射方式,、動物類型以及體重等都會影響信號的發(fā)射,,因此建議每次實驗都要做熒光素酶動力學曲線,確定更佳信號平臺期和更佳的檢測時間,。3)如果要進行ATP的檢測,,盡量避免外源ATP的污染,如操作時戴手套并使用ATP-free的實驗耗材,,在進行熒光素的溶解時應使用ATP-free無菌水,。4)為避免反復凍融,本產品配制成溶液后建議適當分裝后-20℃或-80℃保存,。為防止氧化,,如有條件,可以對儲存液充氮氣或氬氣后保存,。5)對于檢測靈敏度要求特別高的實驗,,建議使用新鮮配制的本產品。6)在進行D-熒光素鉀鹽的溶解時,,應使用無鈣鎂離子的DPBS,,因鈣鎂離子可能會抑制熒光素酶的活性,此外鎂離子可能會對熒光素的氧化造成影響,,從而影響檢測,。7)為了您的安全和健康,請穿實驗服并戴一次性手套操作,。8)本產品只作科研用途,!泰州ATPD-熒光素鉀鹽發(fā)射波長D-熒光素鉀鹽測試方法是體外生物發(fā)光檢測。
具體實驗流程:注:該操作流程通常用來檢測轉染了螢火蟲熒光素酶基因的真核細胞中熒光素酶表達的活性,,不適用于對細菌熒光素酶進行檢測,。1.實驗***天,消化并接種細胞(根據具體實驗選擇合適的細胞)于35mm細胞培養(yǎng)皿,,置于5%CO2,、飽和濕度的37℃培養(yǎng)箱內培養(yǎng)過夜。2.等細胞密度達到70%時用Luciferase報告基因質粒,、LacZ的表達質粒及其它質粒(根據具體實驗確定)共轉染細胞(根據具體實驗選擇轉染方法,,如磷酸鈣沉淀法、PEI,、lipofectamine2000等均可),。3.轉染24-36h后,吸取培養(yǎng)液,用預冷的PBS(無鈣和鎂離子)洗滌細胞,。注:熒光酶的酶促反應會被痕量的鈣所抑制,,故用磷酸鈣轉染的細胞在收集細胞前應充分洗滌除去含鈣介質。4.在每個培養(yǎng)皿中加入350μl預冷的harvestbuffer,于4℃或冰上放置10min裂解細胞,。5.在細胞裂解期間,,準備足量的ml微量離心管,將ATPbuffer與luciferinbuffer以1:,,每管100μl,。6.依次取等體積的細胞裂解液(100μl)至步驟5中的離心管中,迅速混勻,,在發(fā)光儀(Luminometer)上讀取吸光值,。注:發(fā)光反應會迅速衰減,將細胞裂解液加入反應液后5s內必須讀取吸光值,。7.確保以相同操作手法讀取全部樣品吸光值后,。
熒光素酶的基因可以被合成并插入到生物體中或轉染到細胞中。研究者利用基因工程已經使得小鼠,、家蠶,、馬鈴薯等一些生物可以合成熒光素酶。間接體外成像是一種強大的研究手段,,可以對整個動物體中的細胞群落進行分析:將不同類型的細胞(骨髓干細胞,、T細胞等)標記上(即表達)熒光素酶,就可以用高敏感度的CCD相機進行對動物體內進行活ti觀察而不會傷害到動物本身,。在熒光素酶中加入正確的熒光素底物就可以放出熒光,,而發(fā)出的光子可以被光敏感元件,如熒光探測器或改進后的光學顯微鏡探測到,。這就使得對包括影響在內的多種生命活動進程進行觀察成為可能,。例如,熒光素酶可以被用于檢測血庫中所存血液中的紅血球是否開始破裂,。法醫(yī)可以用含有熒光素酶的溶液來檢測犯罪現場中殘留的血跡,。醫(yī)院用熒光素酶的發(fā)光來發(fā)現特定的疾病。熒光素酶還可以作為“報告蛋白”被用于分子生物學研究中,,例如,,用于在轉染過熒光素酶的細胞中檢測特定啟動子的轉錄情況或用于探測細胞內的ATP的水平;這一技術被稱為報告基因檢測法或熒光素酶檢測法(LuciferaseAssay),。熒光素酶是一個熱敏感蛋白,因此經常被用于研究蛋白熱變性過程中熱休克蛋白的保護能力,。做D-熒光素鉀鹽的哪家便宜,。
重組為一個明亮的螢光素酶。這些亞基的親和力可以和SmBiT肽一樣低,從而可以進行蛋白質相互作用的測定,;也可以和HiBiT一樣高,,從而允許自我組裝。[1]2017HiBiT?技術基于NanoBiT?系統(tǒng)的研究,,我們將與LgBiT具有極強親和作用的,。HiBiT作為一種易于檢測且具有高靈敏度的蛋白質標簽,具有多種功能,,例如當與基于CRIPSR的標簽一起使用時,,可以創(chuàng)建內源性報告基因模型。[1]2020Lumit?技術隨著NanoBiT?技術的發(fā)展,,人們認識到可以利用該系統(tǒng)通過結合免疫測定的組分檢測多種分析物,。由此產生的平臺(現稱為“Lumit”)提供了具有高靈敏度的簡化免疫檢測法。熒光素酶(英文名稱:Luciferase)是自然界中能夠產生生物熒光的酶的統(tǒng)稱,,其中更有代表性的是一種學名為Photinuspyrali'的螢火蟲體內的熒光素酶,。在相應化學反應中,熒光的產生是來自于螢光素的氧化,,有些情況下反應體系中也包括三磷酸腺苷(ATP),。沒有熒光素酶的情況下,螢光素與氧氣反應的速率非常慢,,而鈣離子的存在常??梢赃M一步加速反應(與肌肉收縮的情況相似)。熒光生成反應通常分為以下兩步:螢光素+ATP→螢光素化腺苷酸,。D-熒光素鉀鹽找南京翌科生物科技有限公司怎么樣,?鹽城游離酸D-熒光素鉀鹽活題成像原理
D-熒光素也常用于身體的外部研究。連云港熒光素酶D-熒光素鉀鹽濃度
通過開發(fā)新的方法來改變螢火蟲螢光素酶檢測的信號動力學,,例如Bright-Glo?,、Steady-Glo?和Dual-Glo?允許使用微孔板進行檢測。而“加樣-讀數”的形式簡化了樣品處理,,并實現了在非常高通量的應用中使用報告基因檢測,。[1]隨著UltraGlo?螢光素酶的發(fā)展,現在已經實現了“加樣-讀數”的ATP檢測方法,。ATP是細胞健康的重要指標,,這使得CellTiter-Glo?能有效測定細胞活力,尤其是在高通量應用中,。該檢測原理還促進了其它ATP檢測平臺的誕生,,尤其是用于研究ATP酶(如激酶)的Kinase-Glo?(2004年)和ADP-Glo?(2009年)酶檢測系統(tǒng)。[1]2003Caspase-Glo?3/7檢測除了可以利用螢火蟲螢光素酶反應測定樣品中螢光素酶或ATP的含量外,,還可以檢測底物(luciferin)濃度的變化,。通過將luciferin與可被不同酶類識別并產生反應的保護基團偶聯,能對這些酶進行靈敏的“加樣-讀數”檢測,如半胱天冬酶(caspase)和其它蛋白酶,。[1]2007One-Glo?螢光素酶檢測系統(tǒng)隨著對螢火蟲螢光素酶化學反應的進一步了解以及Promega生物學家和化學家團隊的建立,,一種改進的luciferin面世,能更好地用于典型的報告基因檢測應用,。這種新的底物——fluoroluciferin,。連云港熒光素酶D-熒光素鉀鹽濃度
南京翌科生物科技有限公司總部位于仙林街道緯地路9號江蘇生命科技園F7棟301-3室,是一家翌科生物基于團隊十余年的研發(fā)基礎,,建立了行業(yè)前端的外泌體與非編碼 RNA 研究和轉化平臺,。公司目前擁有豐富的產品線,包括外泌體提取與檢測試劑,、非編碼 RNA 提取與檢測試劑,、轉染試劑、microRNA 表達文庫,、臨床大數據庫及涵蓋分子,、細胞、動物的綜合科技服務等 100 多種試劑和科研外包服務,。公司堅持國產試劑自主研發(fā),,服務全國各級高校、研究所,、醫(yī)院,、第三方檢測機構、生物醫(yī)藥公司等數千家客戶,。的公司,。翌科生物作為翌科生物基于團隊十余年的研發(fā)基礎,建立了行業(yè)前端的外泌體與非編碼 RNA 研究和轉化平臺,。公司目前擁有豐富的產品線,,包括外泌體提取與檢測試劑、非編碼 RNA 提取與檢測試劑,、轉染試劑,、microRNA 表達文庫、臨床大數據庫及涵蓋分子,、細胞,、動物的綜合科技服務等 100 多種試劑和科研外包服務。公司堅持國產試劑自主研發(fā),,服務全國各級高校,、研究所、醫(yī)院,、第三方檢測機構,、生物醫(yī)藥公司等數千家客戶,。的企業(yè)之一,為客戶提供良好的外泌體提取,,非編碼RNA試劑,檢測試劑,,轉染試劑,。翌科生物不斷開拓創(chuàng)新,追求出色,,以技術為先導,,以產品為平臺,以應用為重點,,以服務為保證,,不斷為客戶創(chuàng)造更高價值,提供更優(yōu)服務,。翌科生物始終關注自身,,在風云變化的時代,對自身的建設毫不懈怠,,高度的專注與執(zhí)著使翌科生物在行業(yè)的從容而自信,。